सुरक्षा सावधानियों और एक (ए) में संचालन प्रक्रिया बीएसएल 4 प्रयोगशाला: 2. सामान्य आचरण
Summary
Performing viral assays in a BSL-4 laboratory is more involved compared to work in a BSL-2 laboratory due to required additional safety precautions. Here, we present an overview of practices and procedures used inside a BSL-4 laboratory illustrating proper Class II biosafety cabinet usage, waste management/disposal, and sample removal.
Abstract
एक जैव सुरक्षा स्तर 4 (बीएसएल 4) रोकथाम प्रयोगशाला में काम के समय और विस्तार करने के लिए महान ध्यान की आवश्यकता है। एक ही काम है कि गैर-उच्च परिणाम रोगजनकों के साथ एक बीएसएल -2 प्रयोगशाला में किया जाता है काफी लंबे समय तक एक बीएसएल 4 में स्थापित करने में समय लगेगा। इस वृद्धि समय की आवश्यकता कारकों की एक भीड़ है कि प्रयोगशाला का अधिग्रहण संक्रमण, संभावित संक्रमण से काम के माहौल और उच्च परिणाम रोगाणुओं की संभावित रिलीज से स्थानीय समुदाय से शोधकर्ता की रक्षा करने के उद्देश्य से कर रहे हैं के कारण है। प्रयोगशाला के अंदर, आंदोलन हवा अनिवार्य पूरे शरीर की सुरक्षा सूट से जुड़ी hoses के कारण प्रतिबंधित है। इसके अलावा, हर आइटम की कीटाणुशोधन कि द्वितीय श्रेणी जैव सुरक्षा अलमारियाँ (BSCs) से निकाल दिया जाता है की आवश्यकता है। प्रयोगशाला के विशेषज्ञों बीएसएल 4 प्रयोगशाला के तरीकों में प्रशिक्षित किया जाना चाहिए और कौशल वे प्रदर्शन कर रहे हैं में उच्च प्रवीणता दिखाना चाहिए। इस लेख का ध्यान केंद्रित उचित प्रक्रिया और सुनिश्चित करने के लिए प्रयोगशाला ख तकनीक की रूपरेखा तैयार करने के लिए हैiosafety और प्रयोगात्मक सटीकता एक उदाहरण प्रक्रिया के रूप में एक मानक वायरल पट्टिका परख का उपयोग कर। विशेष रूप से, उचित तकनीक एक बीएसएल 4 वातावरण में सुरक्षित रूप से काम करने के लिए जब एक प्रयोग के प्रदर्शन नेत्रहीन जोर दिया जाएगा। इन तकनीकों में शामिल हैं: प्रयोगों, द्वितीय श्रेणी बीएससी की समुचित सफाई जब काम खत्म हो गया, अपशिष्ट प्रबंधन और एक बीएसएल 4 प्रयोगशाला के अंदर उत्पन्न कचरे के सुरक्षित निपटान, और एक BSL- अंदर से निष्क्रिय नमूनों को हटाने के लिए एक द्वितीय श्रेणी के बीएससी की स्थापना बीएसएल -2 प्रयोगशाला के लिए 4 प्रयोगशाला।
Introduction
के रूप में उच्च परिणाम रोगजनकों से निपटने प्रयोगशाला कर्मियों की सुरक्षा (कोई संक्रमण prophylaxes है और न ही उपचार के विकल्प मौजूद हैं) सर्वोपरि है, स्वास्थ्य और मानव सेवा विभाग के अमेरिका के जैव चिकित्सा में रोगज़नक़ों और के साथ काम के सुरक्षित संचालन के लिए सुविधा के निर्माण के लिए दिशा निर्देशों और सर्वोत्तम प्रथाओं की स्थापना की है एक जैव सुरक्षा के नजरिए से 1 नैदानिक प्रयोगशालाओं। कानून और विनियमन के माध्यम से, प्रथाओं और प्रक्रियाओं के कई अनिवार्य आवश्यकताओं कि इन रोगज़नक़ों के साथ काम करने के लिए पीछा किया जाना चाहिए बन गए हैं। अमेरिका, रोगज़नक़ों कि आसानी से हर व्यक्ति में से प्रेषित कर रहे हैं, में उच्च मामला-मृत्यु दर में परिणाम है, और / या प्रमुख सार्वजनिक स्वास्थ्य प्रभाव और bioterrorism के लिए क्षमता है, एलर्जी और संक्रामक के स्वास्थ्य / राष्ट्रीय संस्थान के राष्ट्रीय संस्थान के रूप में वर्गीकृत कर रहे हैं रोग (एनआईएच / NIAID) प्राथमिकता एक रोगज़नक़ों और या रोग नियंत्रण और रोकथाम (सीडीसी) Bioterrorism श्रेणी के लिए केंद्र एक एजेंटों 2। इसके अलावा, जigh-परिणाम रोगजनकों टीयर 1 एजेंटों का चयन के रूप में वर्गीकृत अगर इन रोगजनकों संभावित bioterrorism एजेंट हैं, जन हताहत या अर्थव्यवस्था, महत्वपूर्ण बुनियादी ढांचे, या जनता के विश्वास से 3 विनाशकारी प्रभाव के लिए क्षमता है कर रहे हैं।
बीएसएल 4 प्रयोगशालाओं के साथ संस्थानों के लिए उपयोग सहित बीएसएल 4 संचालन, और अधिक अत्यधिक बीएसएल 2/3 के संचालन से नियंत्रित कर रहे हैं। उदाहरण के लिए, यह पर्याप्त सूट प्रशिक्षण आवश्यकताओं, व्यापक सदस्यता की आवश्यकताओं, और अतिरिक्त चिकित्सा जैव सुरक्षा आवश्यक शर्तें के कारण एक बीएसएल -2 या बीएसएल 3 प्रयोगशाला की तुलना में एक बीएसएल 4 प्रयोगशाला के लिए पहुँच प्राप्त करने के लिए काफी मुश्किल है। इसके अलावा, वहाँ आम तौर पर बनाम एक बीएसएल 2 या 3 बीएसएल सुविधा 4-6 एक बीएसएल 4 सुविधा में अधिक शारीरिक सुरक्षा अवरोध कर रहे हैं। के रूप में बीएसएल 4 प्रवेश और निकास प्रक्रियाओं पर हमारा पहला लेख में उल्लिखित, प्रयोगशाला स्टाफ व्यापक प्रशिक्षण और मनोवैज्ञानिक स्क्रीनिंग बीएसएल 4 प्रयोगशाला 7 में प्रवेश के लिए अर्हता प्राप्त करने के गुज़रना पड़ता है। डब्ल्यूIthin बीएसएल 4 प्रयोगशाला, संक्रमण और गलतियों के जोखिम से बचा या स्थापित प्रक्रियाओं का पालन करके कम कर रहे हैं। अनुसंधान न्यूनतम मल्टीटास्किंग या distractions के साथ, ध्यान से और जानबूझ कर आगे बढ़ना चाहिए। सकारात्मक दबाव सूट में झुकने मुश्किल है, और चेहरा शील्ड ऐसे माइक्रोस्कोपी के रूप में प्रक्रियाओं को प्रतिबंधित कर सकता है। भारी दस्ताने ऐसी छोटी वस्तुओं को संभालने या ट्यूब लेबलिंग के रूप में ठीक मोटर कार्यों के प्रदर्शन में बाधा। बीएसएल 4 प्रयोगशालाओं में बिताए समय को कम करने, प्रयोगशाला विशेषज्ञों काम प्रक्रियाओं की समीक्षा कार्य (एस) के पूरा होने के लिए बीएसएल 4 प्रयोगशाला में कदम है कि एक प्रयोगशाला बीएसएल -2 में आगे किया जा सकता है की पहचान करने और उसके परिवहन के लिए इन सामग्रियों चाहिए। जब बीएसएल -2 प्रयोगशाला में आगे की प्रक्रिया के लिए सामग्री को हटाने, सामग्री तय की और एक मोहरबंद माध्यमिक कंटेनर में बीएसएल 4 प्रयोगशाला से हटा रहे हैं। नमूने है कि हटाया जा करना पड़ सकता है के उदाहरण हैं: तय प्लेटों या संक्रमित सामग्री की नलियों कि एंजाइम से जुड़ी immunosorbe द्वारा विश्लेषण किया जाएगाNT परख (एलिसा), immunofluorescence परख (आइएफए), या पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर)।
व्यक्तिगत सुरक्षा बीएसएल 4 प्रयोगशालाओं में आवश्यक उपकरण द्वारा लगाए अधिक से अधिक भौतिक सीमाओं बीएसएल -2 प्रयोगशालाओं में उन लोगों की तुलना करने के अलावा, सेल संस्कृति प्लेटों और अपशिष्ट निपटान में उच्च परिणाम रोगाणुओं की निष्क्रियता के लिए प्रक्रियाओं कम रोगजनक वायरस के लिए जरूरत से अधिक सख्त हैं एक प्रयोगशाला बीएसएल -2 में अध्ययन किया। कम से कम, इन तरीकों सीडीसी की आवश्यकता को पूरा करना चाहिए। उदाहरण के लिए, दूषित सेल संस्कृति प्लेट और अन्य सामग्री ऐसी तटस्थ बफर formalin के रूप में रासायनिक अभिकर्मकों, साथ निष्क्रिय किया जा सकता है। इलाज किया सेल संस्कृति प्लेटों या ट्यूबों एक डुबोना एक तरल कीटाणुनाशक से भरे टैंक के माध्यम से गर्मी मुहर formalin युक्त पाउच में रखा है और हटाया जा करने के लिए प्रयोगशाला से कर रहे हैं। बर्बाद बाल्टी कीटाणुनाशक के समाधान के साथ भरा और स्प्रे कीटाणुनाशक अस्थायी रूप से प्रयोग के दौरान और Disi के लिए उत्पन्न कचरे को प्राप्त करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैंदस्ताने nfecting, क्रमशः, सफाई जैव सुरक्षा कैबिनेट सतहों और उपकरणों। सूचीबद्ध एकाग्रता में चतुर्धातुक अमोनियम कीटाणुनाशक समाधान सभी अमेरिकी बीएसएल 4 लेबोरेटरीज (बर्र जम्मू, निजी संचार, 2015) के लिए स्वर्ण मानक माना जाता है। बर्बादी बाल्टी से ठोस अपशिष्ट प्रदूषण के लिए संभावित समाप्त करने के लिए autoclaved है।
करने के प्रयास में नेत्रहीन कार्यप्रवाह और सामान्य बीएसएल 4 प्रक्रियाओं की सीमाओं का प्रदर्शन, हम आमतौर पर इस्तेमाल किया वायरल प्रक्रिया का एक उदाहरण के रूप में एक मानक वायरल पट्टिका परख इस्तेमाल किया। वायरल परख प्रक्रिया सामान्य रूप में वर्णन किया गया है, वहीं हम इस प्रोटोकॉल में प्रयोगशाला कर्मियों की सुरक्षा सुनिश्चित करने के लिए इस्तेमाल जैव सुरक्षा प्रक्रियाओं तनाव। पट्टिका परख तकनीक 8,9 पर अतिरिक्त पृष्ठभूमि के लिए पिछले शास्त्रीय पट्टिका परख दृश्यावलोकन को देखें।
यहाँ प्रस्तुत प्रक्रियाओं BMBL विनिर्देशों सीडीसी 1 द्वारा उल्लिखित का पालन करें। हालांकि, प्रस्तुत प्रोटोकॉल रहे हैंआईआरएफ-फ्रेडरिक के लिए विशिष्ट। प्रत्येक बीएसएल 4 सुविधा अलग मानक संचालन प्रक्रिया (एसओपी) और ऑपरेशन के तरीकों कि बीएसएल 4 प्रयोगशाला के भीतर प्रयोगों के निष्पादन के प्रभाव पड़ता है। अपशिष्ट धारा प्रबंधन और पट्टिका assays के निष्पादन के लिए वैकल्पिक प्रक्रियाओं के प्रबंधन और इन प्रयोगशालाओं के संचालन के आधार पर अलग हो सकता। फिर भी, एक बीएसएल 4 सूट प्रयोगशाला और बीएसएल 4 पर्यावरण के अंदर द्वितीय अलमारियाँ कक्षा के साथ कार्य करने के लिए प्रक्रियाओं की स्थापना के एक सामान्य समझ में मदद मिलेगी वैज्ञानिकों की कमी और सुरक्षा निहितार्थ समझ में जब उच्च जोखिम वाले रोगाणुओं की पढ़ाई के विचार। एक बीएसएल 4 प्रयोगशाला में काम आसपास कठिनाइयों के बाहर सहयोगियों के बारे में जागरूकता बढ़ने समायोजित उम्मीदों और अनुसंधान समुदाय में चिकित्सा countermeasures के विकास में अधिक से अधिक आराम करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं।
Protocol
Representative Results
Discussion
एक बीएसएल 4 प्रयोगशाला में काम काफी समय और विस्तार करने के लिए अतिरिक्त ध्यान देने की आवश्यकता है। इस माहौल में काम करने की किसी भी प्रकार की अच्छी तरह से प्रशिक्षित करने की आवश्यकता है, पूरी तरह से, और ई?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The content of this publication does not necessarily reflect the views or policies of the US Department of Health and Human Services (DHHS) or of the institutions and companies affiliated with the authors. This work was funded in part through Battelle Memorial Institute’s prime contract with the US National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID) under Contract No. HHSN272200700016I. M.R.H., D.P., L.B., K.J. and J.W. performed this work as employees of Battelle Memorial Institute. Subcontractors to Battelle Memorial Institute who performed this work are: S.M. as an employee of MRI Global; M.G.L. as an employee of Lovelace Respiratory Research Institute, Inc.; and J.H.K. as an employee of Tunnell Government Services, Inc.
Materials
| Micro-Chem Plus | National Chemical Laboratories | 255 | |
| Ethanol | Fisher | BP2818500 | |
| 2-ml 96-Deep Well Plates | Fisher | 278743 | |
| 10-ml Serological Pipette | Fisher | 13-678-11E | |
| 25-ml Serological Pipette | Fisher | 13-678-11 | |
| 6-well plates | Fisher | 140675 | |
| Crystal Violet | Sigma | HT90132-1L | |
| 10% Neutral Buffered Formalin | Fisher | 22-050-105 | |
| Tragacanth | Fisher | 50-702-2000 | |
| 20-μl Pipette Tips | Fisher | 21-402-550 | |
| 200-μl Pipette Tips | Fisher | 21-402-561 | |
| 1000-μl Pipette Tips | Fisher | 21-402-581 | |
| DMEM | Lonza | 12-604Q | |
| FBS | Sigma | F2442-500mL | |
| Penicillin/Streptomycin | Lonza | 17-602E | |
| 2X EMEM | Quality Biological | 115-073-101 | |
| Pipettor | Drummond | 4-000-101 | |
| 1000-μl Pipette | Rainin | L-1000XLS+ | |
| 200-μl Pipette | Rainin | L-200XLS+ | |
| 12-Well, Multichannel 200-μl Pipettor | Rainin | L12-200XLS+ | |
| 8-Well, Multichannel 1000-μl Pipettor | Rainin | LA8-1200XLS | |
| Attest | Express Medical Supplies | MMM12192 | |
| Autoclave | Getinge | GEB 2404 AMB-2 | |
| Autoclave Bag | Fisher | 01-828E | |
| 2000-ml Beaker | Fisher | 02-591-10H | |
| Autoclave Tray | Fisher | 13-359-20B | |
| Pipette Tray | Fisher | 13-361-5 | |
| 37°C Incubator | Fisher | WU-39321-00 | |
| Biohazard Can | Rubbermaid Commercial | FG614500 RED | |
| Autoclave Tape | Fisher | 15-903 | |
| Autoclave Rod | Made by IRF Facility | N/A | |
| Light Box | Fisher | S11552 | |
| Heat Sealer | Fisher | NC9793612 | |
| Heat Seal Pouches | Fisher | 01-812-25H | |
| Biohazard Bag | Fisher | 01-828E |
References
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