अलगाव, लक्षण और मसूड़ों का प्रतिरक्षा सेल नेटवर्क के कार्यात्मक परीक्षा
Summary
हम अलगाव, प्ररूपी लक्षण वर्णन और murine मसूड़े से प्रतिरक्षा कोशिकाओं के कार्यात्मक विश्लेषण के लिए एक तकनीक की स्थापना की है।
Abstract
Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident immune cell populations in the oral mucosa and gingiva. We have established a technique for the isolation and study of immune cells from murine gingival tissues, an area of constant microbial exposure and a vulnerable site to a common inflammatory disease, periodontitis. Our protocol allows for a detailed phenotypic characterization of the immune cell populations resident in the gingiva, even at steady state. Our procedure also yields sufficient cells with high viability for use in functional studies, such as the assessment of cytokine secretion ex vivo. This combination of phenotypic and functional characterization of the gingival immune cell network should aid towards investigating the mechanisms involved in oral immunity and periodontal homeostasis, but will also advance our understanding of the mechanisms involved in local immunopathology.
Introduction
मसूड़ों के ऊतकों मानव और murine दांत निकलना चारों ओर और लगातार दांत 1 के जटिल biofilm के संपर्क में हैं। प्रतिरक्षा सेल मसूड़ों बाधा पुलिस नेटवर्क, ऊतक अखंडता को बनाए रखने के लिए स्थानीय खानेवाला रोगाणुओं के साथ homeostasis सुनिश्चित करने और एक ही समय में, रोगजनक चैलेंज 2 के खिलाफ प्रभावी प्रतिरोधक क्षमता प्रदान करने के लिए महत्वपूर्ण है। Homeostasis को प्राप्त करने के लिए, प्रतिरक्षा प्रणाली को ध्यान से एक उच्च विशेष प्रतिरक्षा सेल नेटवर्क है, फिर भी थोड़ा विस्तार से मसूड़ों प्रतिरक्षा सेल आबादी और ऊतक प्रतिरोधक क्षमता को बनाए रखने में उनकी भूमिका के लिए जाना जाता है 2 बनाने मसूड़ों के माहौल के अनुरूप है।
प्रतिरक्षा homeostasis मसूड़े में खलल डाल दिया जाता है, या तो वृद्धि हुई मेजबान संवेदनशीलता और / या dysbiotic माइक्रोबियल समुदायों, एक सूजन हालत की उपस्थिति के माध्यम से, periodontitis 3 4 उठता है। Periodontitis, एक आम सूजन की बीमारी है दांत एस के नुकसान के लिए अग्रणीupporting संरचनाओं। इसके गंभीर रूपों में यह सामान्य जनसंख्या 5 का लगभग 10% में देखा जाता है। कुंजी periodontitis संवेदनशीलता और प्रगति में शामिल घटकों विदारक मुश्किल 6 साबित कर दी है। हालांकि, पशु मॉडल periodontitis दीक्षा और प्रगति 7 के तंत्र को समझने में बेहद उपयोगी है। मॉडल कुंजी सेल आबादी और आणविक मध्यस्थों कि प्रतिरक्षा homeostasis और periodontitis की ड्राइव विकास को बनाए रखने के लिए महत्वपूर्ण हैं परिभाषित करने के लिए नियोजित किया जा सकता है। इस तरह की अंतर्दृष्टि प्रतिरक्षा homeostasis के मसूड़े विशेष नियंत्रण के बारे में हमारी समझ को बदलने और रोग रोगजनन की हमारी वर्तमान समझ को आगे होगा।
Protocol
Representative Results
Discussion
मौजूदा तकनीक को सफलतापूर्वक (एक माउस से) प्रतिरक्षा कोशिकाओं की एक बड़ी संख्या उपयुक्त पैदावार, न केवल प्ररूपी लक्षण वर्णन के लिए, लेकिन यह भी कार्यात्मक अध्ययन के लिए पूर्व vivo। एक अन्य समूह पहले से ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Authors were funded in part by the intramural program of NIDCR (N.M.M) and supported by a Wellcome Trust Stepping Stones Fellowship (097820/Z/11/B to J.E.K) and by a Manchester Collaborative Centre for Inflammation Research grant (to J.E.K). The authors thank Teresa Wild for critically reviewing the manuscript.
Materials
| Fine Scissors | Fine science tools | 14058-11 | |
| Scalpel Handle #3 | Fine science tools | 10003-12 | |
| Scalpel Blades #10 | Fine science tools | 10010-00 | Sterile |
| Splinter Forceps | Integra Miltex | 6-304 | |
| Needles with regular bevel | BD Medical | 305109 | 27G, 12.7 mm length |
| Monoject syringes | Covidien | 8881513934 | Luer-lock tip, 3mL |
| PBS, pH 7.4 | Life Technologies | 10010-049 | Without Calcium and Magnesium |
| RPMI 1640 | Lonza | 12-167F | Without L-glutamine |
| DNase I from bovine pancreas | Sigma-Aldrich | DN25-1G | |
| Collagenase type IV | Gibco (by Life technologies) | 17104-019 | |
| Fetal Bovine Serum | Gemini Bio-products | 100-106 | |
| Gentamicin 50 mg/ml | Quality biological | 120-098-661EA | |
| Pen Strep | Gibco (by Life technologies) | 15140-122 | |
| L-Glutamine | Gibco (by Life technologies) | 25030-081 | |
| 0.5M EDTA pH 8.0 | Quality biological | 351-027-721EA | |
| 50 mL tubes | Corning | 352070 | Polypropylene, sterile |
| 70 μM Cell Strainers | Corning | 352350 | |
| Petri dishes | Corning | 351029 | Sterile |
| 5 mL FACS tubes | Corning | 352052 | Sterile |
| BD GolgiPlug | BD Biosciences | 555029 | Contains brefeldin A solution |
| Phorbol 12-Myristate 13-Acetate (PMA) | Sigma-Aldrich | P8139 | |
| Ionomycin Calcium Salt | Sigma-Aldrich | 13909 | |
| Saponin from quillaja bark | Sigma-Aldrich | S4521 | |
| LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit | Life Technologies | L34957 | |
| Anti-Mouse CD45 Alexa Fluor 700 | eBioscience | 56-0451-82 | |
| Anti-Mouse CD4 eFluor 450 | eBioscience | 48-0042-82 | |
| Anti-Mouse TCR beta APC eFluor 780 | eBioscience | 47-5961-82 | |
| Anti-Mouse gamma delta TCR FITC | eBioscience | 11-5711-82 | |
| Anti-Mouse IL-17A APC | eBioscience | 12-7311-82 | |
| Anti-Mouse IFN-γ PE | eBioscience | 11-5931-82 | |
| Anti-Mouse NK1.1 PE-Cy7 | eBioscience | 25-5941-82 | |
| Anti-Mouse CD90.2 APC eFluor 780 | eBioscience | 47-0902-82 | |
| Anti-Mouse CD3e FITC | eBioscience | 11-0031-82 | |
| Anti-Mouse CD19 FITC | eBioscience | 11-0193-82 | |
| Anti-Mouse CD11b FITC | eBioscience | 11-0112-82 | |
| Anti-Mouse CD11c FITC | eBioscience | 11-0114-82 | |
| Anti-Mouse TCR beta FITC | eBioscience | 11-5961-82 | |
| Anti-Mouse Ly-6G FITC | eBioscience | 11-5931-82 | |
| Anti-Mouse Ly-6C FITC | BD Pharmingen | 553104 |
References
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