Marginating - 폐 백혈구의 선택적 수확

요약

Marginating-pulmonary leukocytes는 다른 백혈구 집단에 비해 독특한 특성과 뚜렷한 면역 기능을 나타냅니다. 여기서 우리는 쥐와 생쥐에서 폐의 강제 관류에 의한 폐 백혈구의 이러한 하위 집단의 선택적 수확에 대해 설명합니다. 변두리폐 백혈구는 혈액 매개 및 폐 관련 질환에 대한 감수성을 결정하는 데 중요한 것으로 보입니다.

초록

Marginating-pulmonary (MP) 백혈구는 폐 모세혈관의 내부 내피에 부착하는 백혈구입니다. MP-백혈구는 다른 면역 구획의 백혈구와 비교하여 독특한 구성과 특성을 나타내는 것으로 나타났습니다. 증거는 자연 살해 세포의 세포 독성이 더 높고, 순환 또는 비장 면역 세포와 비교하여 MP-백혈구 집단의 뚜렷한 전염증 및 항염증 프로파일을 시사합니다. 본원에 제시된 방법은 마우스 또는 랫드에서 폐의 강제 관류에 의한 MP-백혈구의 선택적 수확을 가능하게 합니다. 조직 분쇄 및 생물학적 분해와 같이 폐-백혈구를 추출하는 데 사용되는 다른 방법과 달리, 이 방법은 실질, 간질성 및 기관지-폐포 세포로 오염되지 않은 폐 모세혈관에서 독점적으로 백혈구를 생성합니다. 또한 관류 기술은 조직 처리로 인한 생리적 반응을 유발하지 않고 MP-백혈구의 무결성과 생리학적 환경을 더 잘 보존합니다. 이 독특한 MP 백혈구 집단은 모든 순환 악성 세포와 감염된 세포가 폐 모세혈관을 통과하는 동안 억류되어 내피 세포 및 상주 백혈구와 물리적으로 상호 작용하기 때문에 비정상적인 순환 세포를 식별하고 반응하기 위해 전략적으로 배치됩니다. 따라서 MP-백혈구의 선택적 채취와 다양한 조건에서의 연구는 특히 순환 비정상 세포 및 폐 관련 질병 제어와 관련하여 생물학적 및 임상적 중요성에 대한 이해를 높일 수 있습니다.

서론

폐의 모세 혈관 (즉, marginating - 폐 (MP) 백혈구) ^{(1) 다른} 면역 구획 (예를 들어, 순환, 비장, 골수)에서 백혈구에 비해 뚜렷한 백혈구의 구성과 독특한 활성을 나타내는 것으로 나타났다 ^2-에 부착 백혈구 ^4. 예를 들어, 순환 및 비장 NK 세포뿐만 아니라, 분화 된 전령 RNA (mRNA의) 레벨 및 프로와 항 염증성 사이토 카인의 분비 증가에 비해 다양한 종양 세포에 대하여 MP-백혈구 전시보다 천연 킬러 (NK) 세포 독성. MP-백​​혈구 순환 백혈구 (50 % 대에 각각 30 %)에 비해 본래 / 적응 면역의 높은 비율을 가지고있는 세포의 조성물은 순환하는 백혈구와 구별된다. 여기에 제시된 방법의 목적은, MP-백혈구의 선택적 수확을 가능하게이 중요하고 독특한 면역 구획 (세포 인구)을 연구하기 위해, 그리고 eluc하는 것입니다이러한 특정 세포에 대한 각종 조작 (예를 들면, 면역 활성)의 효과를 IDATE.

이 독특한 인구의 의미를 이해하기 위해서는, 면역 시스템 세포 매개 면역 (CMI)의 생체 내 기능을 통해 종양 세포, 미세 전이 및 잔여 질병을 순환 제어 할 수 있다는 것이....

프로토콜

동물 주제와 관련된 절차 텔 아비브 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다.

1. 쥐 프로토콜

1. 준비
   1. 2 나비 21 G 바늘을 정렬합니다. 선택적으로, 바늘의 날카로운 가장자리를 제출하여이 무딘 칼날 나비 21 G 바늘을 준비합니다.
   2. 중력 (건조) 설정에 적어도 30 분 동안 121 ° C에서 오토 클레이브 멸균 가위 이쌍, 무딘 칼날 집게, 지혈, 치아 조직 겸자 : 수술 도구를 소독.
   3. 인산염 완충 식염수 (1X PBS) 용액 1 ㎖ 당 30 단위의 헤파린을 첨가하여 PBS 헤파린 (30 유니트 / ㎖)을 준비한다. RT에서 사용합니다. 35 ml의 동물에 따라 필요한 최소한의 볼륨입니다.
   4. 공기 방울을 방지하기 위해 연동 펌프 라인과 나비 바늘로 헤파린 PBS 스트림.
2. MP-백​​혈구의 폐와 컬렉션의 관류
   1. 8 %의 이소 플루 란의 과다 복용으로 동물을 안락사. 모니터링 호흡 정지에 의한 안락사를 확인합니다.
   2. 호흡 중단시 즉시 멸균 가위와 치아 조직 집게를 사용하여 복강와 가슴 충치를 엽니 다. 칼 모양의 과정 복부까지 따라 중간 선 복부 절개를 수행합니다.
   3. 내부 장기 또....

결과

MP-구획 전시 다른 백혈구 하위 집합 조성물은 백혈구 순환 비교. 유세포 분석을 이용하여, 백혈구 개체군 식별 모두 순환 및 MP 백혈구의 조성물의 특징을 정량화 하였다. 과립구와 림프구는 전방 및 측면 산란을 기반으로 확인되었다. 림프구 내 NKRP-1 세포는 ^밝은 NK 세포, 단핵구와 같은 T 세포로서 CD3 ^+, RM1 ⁺ 및 CD4 ⁺ / CD8 ⁺ / CD25로 확인 하였다 ⁺ T 세포 개체군의 식별을 위해 사용되었다. 과립구, 단핵구 및 NK 세포를 포함하여 면역 세포가 선천적으로, 순환 (p <0.05), 27.9 % (± 0.66 %)에 비해, MP-백혈구 인구의 52 % (± 1.52 %)를 구성. 반대로, CD4 ^+, CD4 ⁺ CD8 ⁺ T 세포 및 규정 (CD4

토론

본 명세서에있어서, 상기 선택적 수확을 가능 MP-백혈구 고유 인구 공부. 순환 또는 비장 백혈구에 비해 MP 인구 백혈구 개체군의 고유 조성물 높은 활성 수준, 다양한 사이토 카인의 높은 릴리스 및 프로와 항 염증성 사이토 카인 ^2,3- 높은 mRNA 수준을 특징으로한다. 구체적으로, 우리는 MP-NK 세포는 다양한 표적 세포에 대해 ^3,4- 순환 NK 세포보다 더 독성이 있고, 인터페론 γ 높은 수준의 발현을 보여 주었다. 전반적으로, 우리의 결과는 MP-NK 백혈구는 혈액을 매개로 전이 및 폐 전이를 조절하는데 더 큰 생물학적 중요성을 의미 할 수있다, 따라서 NK 세포를 순환하고,보다 더 큰 세포 독성을 가지고하는 것이 좋습니다. 따라서, 비장 또는 순환 백혈구가 골드 표준 또는 면역 상태를 반영하기위한 기본 인구, 인간 연구로 간주해서는 안 그 닷컴monly는 조심스럽게 해석되어야 백혈구 순환에 전적으로 의존하고 있습니다. 각종 질병 특이 폐 준다 더욱이, 면역력이 기관 내 연구.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Autoclud 연동 펌프
, 버터플라이 바늘,	OMG		, 26G
, 버터플라이 바늘,	OMG		, 21G*3/4"
, 주사기	Pic 용액		1ml
주사기	Pic 용액		2.5ml
주사기	Pic 용액		5ml
주사기	Pic 용액		10ml
주사기	Pic 용액		25ml
뭉툭한 모서리 집게
위
지혈
조직 집게 헤
파린 나트륨 돼지 점막(무방부제)	Sigma Aldrich

, , , , , 가