뇌 조각에서 전체 셀 패치 클램프 녹음

Amir Segev; Francisco Garcia-Oscos; Saïd Kourrich

doi:10.3791/54024

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방법 논문

뇌 조각에서 전체 셀 패치 클램프 녹음

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DOI:

10.3791/54024

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2016년 6월 15일

Amir Segev¹ , Francisco Garcia-Oscos¹ , Saïd Kourrich¹

¹Department of Psychiatry, University of Texas Southwestern Medical Center

이 논문에서

요약

이 프로토콜은 전체 셀 패치 클램프 녹음을 수행하기위한 기본 절차 단계를 설명합니다. 이 기술은 신경 세포의 전기적 동작의 연구를 허용하고, 뇌 조각에서 수행하는 경우, 여전히 상대적으로 잘 보존 된 뇌 회로에 통합되어 신경 세포에서 다양한 신경 기능의 평가를 할 수 있습니다.

초록

전체 셀 패치 클램프 기록은 신경 세포의 상당한 부분의 전기적 특성의 조사를 허용하는 전기 생리 기술이다. 이러한 구성에서, 마이크로 피펫은 이전에 사용 된 세포 날카로운 전극 기록 방법보다 더욱 정확한 이온 전류 측정 전류 누설을 방지함으로써 제공 세포막에 밀착된다. 고전적으로, 전체 셀 기록 세포 배양 모델 해리 신경 뇌 조각 뉴런 제제를 포함하는 다양한 형태의 신경 세포에서 수행하고, 그대로 마취 또는 웨이크 동물 일 수있다. 요약하면,이 기술은 대단히 흥분 세포의 수동 및 능동 생물 물리학 적 특성의 이해에 기여하고있다. 이 기술의 주요 장점은 조작 (예, 약물은 실험자 유도 가소성)는 특정한 신경 기능 또는 C를 변경할 수있는 방법의 특정 정보를 제공하는 것이다실시간 hannels. 또한 세포막의 중요한 개구 내부 피펫 용액 자유롭게 도입하는 약물, 예를 들어 작용제 또는 특정 세포 단백질의 길항제를위한 수단을 제공하며 인접 셀의 기능을 변경하지 않고 이러한 대상을 조작하는 세포질 내로 확산 할 수있다. 전체 셀 기록에 초점이 문서는 뇌 조각의 뉴런에 생리 학적으로 관련 맥락에서, 즉 상대적으로 잘 보존 된 뇌 회로에 신경을 기록하는 장점을 가지고 준비를 시행 하였다. 특히, 적절한 약리학과 결합 될 때, 이러한 기술은 학습, 약물 남용에 대한 노출, 스트레스 등의 경험 중 어느 방식에 따른 구체적인 neuroadaptations 발생을 식별 할 수있는 강력한 도구이다. 요약하면, 뇌 조각에서 전체 셀 패치 클램프 녹음은 생체 준비를 오래 지속 변화를 측정 할 수있는 수단을 제공신경 기능에 해당 그대로 깨어 동물에서 개발했습니다.

서론

패치 클램프 기술은, 1970 년대 후반에 개발 ^{1,2-되었습니다} 전기 생리 기술은 실시간 조직에서 단일 또는 다중 이온 채널의 기능을 연구하기위한 기본 툴이다. 달성 될 수있는 다른 패치 구성 중에서, 전체 셀 패치 클램프 기록은 뉴런의 주요부의 전기적 성질의 조사를 허용한다. 고전적으로,이 기술은 시험 관내에서 두 뇌 조각 갓 해리 뉴런 또는 세포 배양 모델 ^(3)에 행해진 다. 뇌 조각 뉴런에서 수행하는 경우,이 기술은 여러 가지 장점을 제공한다. 특히, (I) 신경 세포는 다소 상대적으로 보존 된 뇌 회로에 기록되고, 세포 배양 용 제제에 비해 ³ 생리 관련이있는 환경을 제공한다. 이것은 급성 pharmacolog 임의의 유형에 의해 유발되는 세포 및 분자 사건을 초기에 포착, 또는 실시간으로 모니터링 할 수있게iCal의 조작 - 생체 내 조건의 전형적인 사용하여 달성 될 수없는 시간 해상도; 시각적으로 뇌 조각에 뇌 영역을 식별에 (II) 기능은 모두가 형광 마커를 표현 할 때 뇌 영역은 공부에 대한 특정 신경 세포에 대한 높은 지역 특이성 ^{3 수} 있습니다; (ⅲ) (세포 내 레코딩을위한 날카로운 마이크로 피펫으로 막을 천공 대조적으로) 원형질막의 상당 부분을 열어 세포의....