Summary

Gelijktijdig opnemen van Electroretinografie en Visual evoked potentials in verdoofde ratten

Published: July 01, 2016
doi:

Summary

This protocol describes simultaneous measurement of electroretinogram and visual evoked potentials in anesthetized rats.

Abstract

The electroretinogram (ERG) and visual evoked potential (VEP) are commonly used to assess the integrity of the visual pathway. The ERG measures the electrical responses of the retina to light stimulation, while the VEP measures the corresponding functional integrity of the visual pathways from the retina to the primary visual cortex following the same light event. The ERG waveform can be broken down into components that reflect responses from different retinal neuronal and glial cell classes. The early components of the VEP waveform represent the integrity of the optic nerve and higher cortical centers. These recordings can be conducted in isolation or together, depending on the application. The methodology described in this paper allows simultaneous assessment of retinal and cortical visual evoked electrophysiology from both eyes and both hemispheres. This is a useful way to more comprehensively assess retinal function and the upstream effects that changes in retinal function can have on visual evoked cortical function.

Introduction

Meting van de electroretinogram (ERG) en visuele evoked potential (VEP) bruikbare kwantitatieve beoordeling van de integriteit van de visuele route. De ERG meet de elektrische respons van het netvlies lichtstimulatiebron, terwijl de VEP meet de overeenkomstige functionele integriteit van de visuele trajecten van de retina naar de primaire visuele cortex na hetzelfde licht event. Dit manuscript beschrijft een protocol voor de registratie en analyse van de ERG en VEP reacties in een algemeen gebruikt laboratorium model, de rat.

De ERG biedt een index van de functionele integriteit van een aantal belangrijke retinale cel klassen door het kwantificeren van de bruto elektrische reactie van de retina om een ​​lichtflits. Een gecoördineerde reeks ionische fluxen gestart door het aanzetten van licht en offset, detecteerbare veranderingen in de spanning die kan worden gemeten met behulp van oppervlakte-elektroden buiten het oog geplaatst. De resulterende golfvorm vertegenwoordigt de combinatie van een SERies van goed gedefinieerde componenten, die verschillen in amplitude, timing en frequentie. Een aanzienlijke hoeveelheid onderzoek is gebleken dat deze onderdelen relatief goed geconserveerd zijn over vele gewervelde retina en de componenten kunnen worden gescheiden van elkaar. Door oordeelkundig selecteren van de stimulus (flash stimulus, achtergrond, interstimulus interval) voorwaarden en de keuze van de specifieke kenmerken van de samengestelde golfvorm te analyseren kan men overtuigd van het terugsturen van een maatregel van een specifieke groep van retinale cellen 1,2 zijn. Deze kenmerken ten grondslag aan de bruikbaarheid en daarmee de wijdverspreide toepassing van de ERG als een niet-invasief meten van retina functie. Dit handschrift is gericht op de methode voor het meten van de ERG en de analyse van de mogelijkheden ervan om informatie terug te keren over een aantal van de grote mobiele klassen in het netvlies, namelijk fotoreceptoren (de PIII component), bipolaire cellen (de PII component) en retinale ganglion cellen (de positieve scotopisch drempel reactie of pstr).

<p class= "Jove_content"> The VEP biedt een analyse van de corticale reactie op licht; eerst afkomstig van het netvlies en daarna serieel gecommuniceerd via de oogzenuw, optische darmkanaal, thalamus (laterale geniculate nucleus, LGN) en optische straling tot gebied V1 van de cortex 3. Bij knaagdieren, de meerderheid (90-95%) van de optische zenuwvezels van elk oog kruisvormige 4 en innerveren de contralaterale midden hersenen. In tegenstelling tot de ERG, is het nog niet mogelijk verschillende componenten van de VEP toeschrijven aan specifieke klassen cellen, 5 verandert dus overal langs de gezichtsbaan kunnen hebben voor de VEP golfvorm. Toch is de VEP een nuttige niet-invasief meten van visuele prestatie en gezichtsbaan integriteit. De VEP, bij gebruik in combinatie met de ERG, kan een volledige beoordeling van de visuele systeem (bijv retina / gezichtsbaan) verschaffen.

ERG en VEP opnamen kan worden uitgevoerd of in combinatie, afhankelijk van de toekation. De in dit document beschreven methode maakt gelijktijdige evaluatie van het netvlies en corticale visuele opgeroepen elektrofysiologie van beide ogen en beide halfronden in verdoofde ratten. Dit is een handige manier om de retinale functie en de upstream-effecten die veranderingen in de functie van de retina op de visuele opgeroepen corticale functie kan hebben meer uitvoerig te evalueren.

Protocol

Alle experimentele procedures werden uitgevoerd volgens de Australische Code of Practice voor de zorg en het gebruik van dieren voor wetenschappelijke doeleinden, uitgevoerd door de National Health en Medical Research Council in Australië te stellen. Ethiek goedkeuring werd verkregen van de Universiteit van Melbourne, FNWI, Animal Ethics Committee (erkenningsnummer 0.911.322,1). 1. Pre-implantatie van chronische VEP elektroden Opmerking: Als gelijktijdige ERG en VEP signalen worden verzameld dieren moeten…

Representative Results

De ERG a-wave (> -1,38 log cd.sm -2), b-golven (> – 4,99 log cd.sm -2) STR's (<- 4,99 log cd.sm -2) en de VEP (> – 0,52 log cd.sm -2) gelijktijdig (figuur 1 en 3 opgenomen). Bij zeer zwak knippert, wordt een positieve STR ​​(pstr) waargenomen bij ongeveer 110 msec na de flits, en een negatieve STR ​​(NSTR) bij ongeveer 220 msec (figuren 1 en 2). Een ERG met een grote b-golf, pieken tusse…

Discussion

De ERG en VEP objectieve metingen van de visuele functie van het netvlies en de cortex, respectievelijk. Het voordeel van gelijktijdige opname is dat een meer uitgebreid overzicht van het gehele visuele route wordt geboden. Daarbij zouden de aanvullende informatie van de samenlopende beoordeling een duidelijker afbakening van de plaats van letsel te voorzien in de visuele banen (bijvoorbeeld bij aandoeningen met overlappende Nog ERG afzonderlijke VEP manifestaties 18, wanneer optische neuropathie kan…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Funding for this project was provided by the National Health and Medical Research Council (NHMRC) 1046203 (BVB, AJV) and Melbourne Neuroscience Institute Fellowship (CTN).

Materials

Alligator clip generic brand HM3022 Stainless steel 26 mm clip for connecting VEP screw electrodes to cables
Bioamplifier ADInstruments ML 135 For amplifying ERG and VEP signals
Carboxymethylcellulose sodium 1.0% Allergan CAS 0009000-11-7 Viscous fluid for improving signal quality of the active ERG electrode
Carprofen 0.5% Pfizer Animal Health Group CAS 53716-49-7 Proprietary name: Rimadyl injectable (50 mg/mL). For post-surgery analgesia, diluted to 0.5% (5 mg/mL) in normal saline
Chlorhexadine 0.5% Orion Laboratories 27411, 80085 For disinfecting surgical instruments
Circulating water bath Lauda-Königshoffen MGW Lauda For maintaining body temperature of the anesthetized animal during surgery and electrophysiological recordings
Dental amalgam DeguDent GmbH 64020024 For encasing the electrode-skull assembly to make it more robust
Dental burr Storz Instruments, Bausch and Lomb #E0824A A miniature drill head of ~0.7mm diameter for making a small hole in the skull over each hemisphere to implant VEP screws
Drill Bosch Dremel 300 series An automatic drill for trepanning
Electrode lead Grass Telefactor  F-E2-30 Platinum cables for connecting silver wire electrodes to the amplifier
Faraday Cage custom-made Ensures light proof to maintain dark adaptation. Encloses the Ganzfeld setup to improve signal to noise ratio
Gauze swabs Multigate Medical Products Pty Ltd 57-100B For drying the surgical incision and exposed skull surface during surgery
Ganzfeld integrating sphere Photometric Solutions International Custom designed light stimulator: 36 mm diameter, 13 cm aperture size
Velcro VELCRO Australia Pty Ltd VELCRO Brand Reusable Wrap Hook-and-loop fastener to secure the electrodes and the animal on the recording platform
Isoflurane 99.9% Abbott Australasia Pty Ltd CAS 26675-46-7 Proprietary Name: Isoflo(TM) Inhalation anaaesthetic. Pharmaceutical-grade inhalation anesthetic mixed with oxygen gas for VEP electrode implant surgery
Ketamine  Troy Laboratories Ilium Ketamil Proprietary name: Ketamil Injection, Brand: Ilium. Pharmaceutical-grade anesthetic for electrophysiological recording
Luxeon LEDs Phillips Lighting Co. For light stimulation twenty 5 watt and one 1 watt LEDs.
Micromanipulator Harvard Apparatus BS4 50-2625 Holds the ERG active electrode during recordings
Needle electrode Grass Telefactor  F-E2-30 Subcutaneously inserted in the tail to serve as the ground electrode for both the ERG and VEP
Phenylephrine 2.5% minims  Bausch and Lomb CAS 61-76-7 Instilled with Tropicamide to achieve maximal dilation for ERG recording
Povidone iodine 10% Sanofi-Aventis CAS 25655-41-8 Proprietory name: Betadine, Antiseptic to prepare the shaved skin for surgery 10%, 500 mL
Powerlab data acquisition system ADInstruments ML 785 Controls the LEDs
Proxymetacaine 0.5% Alcon Laboratories  CAS 5875-06-9 For corneal anaesthesia during ERG recordings
Saline solution Gelflex Non-injectable, for electroplating silver wire electrodes
Scope Software ADInstruments version 3.7.6 Simultaneously triggers the stimulus via the Powerlab system and collects data
Silver (fine round wire) A&E metal 0.3 mm Used to make active and inactive ERG electrodes, and the inactive VEP electrode
Stainless streel screws  MicroFasterners 0.7 mm shaft diameter, 3 mm in length to be implanted over the primary visual cortex and serve as the active VEP electrodes
Stereotaxic frame David Kopf Model 900 A small animal stereotaxic instrument for locating the primary visual cortices according to Paxinos & Watson's 2007 rat brain atlas coordinates
Surgical blade Swann-Morton Ltd. 0206 For incising the area of skin overlaying the primary visual cortex to implant the VEP electrodes
Suture Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co.,Ltd 3-0 silk braided suture non-absorbable, for skin retraction during VEP electrode implantation surgery
Tobramycine eye ointment 0.3% Alcon Laboratories  CAS 32986-56-4 Proprietary name: Tobrex. Prophylactic antibiotic ointment applied around the skin wound after surgery
Tropicamide 0.5% Alcon Laboratories  CAS 1508-75-4 Proprietary name: 0.5% Mydriacyl eye drop, Instilled to achieve mydriasis for ERG recording
Xylazine Troy Laboratories Ilium Xylazil-100 Pharmaceutical-grade anesthetic for electrophysiological recording
Pipette tip  Eppendorf Pty Ltd 0030 073.169 Eppendorf epTIPS 100 – 5000 mL, for custom-made electrodes
Microsoft Office Excel Microsoft version 2010 spreadsheet software for data analysis
Lethabarb Euthanazia Injection Virbac (Australia) Pty Ltd LETHA450 325 mg/mL pentobarbital sodium for rapid euthanazia

References

  1. Nguyen, C. T. O., Vingrys, A. J., Bui, B. V. Dietary omega-3 fatty acids and ganglion cell function. Invest Ophthalmol Vis Sci. 49, 3586-3594 (2008).
  2. Weymouth, A. E., Vingrys, A. J. Rodent electroretinography: methods for extraction and interpretation of rod and cone responses. Prog Retin Eye Res. 27, 1-44 (2008).
  3. Tsai, T. I., Bui, B. V., Vingrys, A. J. Effect of acute intraocular pressure challenge on rat retinal and cortical function. Invest Ophthalmol Vis Sci. 55, 1067-1077 (2014).
  4. Cowey, A., Franzini, C. The retinal origin of uncrossed optic nerve fibres in rats and their role in visual discrimination. Exp Brain Res. 35, 443-455 (1979).
  5. Weinstein, G. W., Odom, J. V., Cavender, S. Visually evoked potentials and electroretinography in neurologic evaluation. Neurol Clin. 9, 225-242 (1991).
  6. Odom, J. V., et al. Visual evoked potentials standard (2004). Doc Ophthalmol. 108, 115-123 (2004).
  7. Ridder, W. H., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. Causes of cataract development in anesthetized mice. Exp Eye Res. 75, 365-370 (2002).
  8. Nixon, P. J., Bui, B. V., Armitage, J. A., Vingrys, A. J. The contribution of cone responses to rat electroretinograms. Clin Experiment Ophthalmol. 29, 193-196 (2001).
  9. Bui, B. V., et al. Using the electroretinogram to understand how intraocular pressure elevation affects the rat retina. J Ophthalmol. 2013, 262467 (2013).
  10. Nguyen, C. T., Vingrys, A. J., Bui, B. V. Dietary omega-3 fatty acids and ganglion cell function. Invest Ophthalmol Vis Sci. 49, 3586-3594 (2008).
  11. Hood, D. C., Birch, D. G. A quantitative measure of the electrical activity of human rod photoreceptors using electroretinography. Vis Neurosci. 5, 379-387 (1990).
  12. Birch, D. G., Hood, D. C., Locke, K. G., Hoffman, D. R., Tzekov, R. T. Quantitative electroretinogram measures of phototransduction in cone and rod photoreceptors – Normal aging, progression with disease, and test-retest variability. Arch Ophthalmol. 120, 1045-1051 (2002).
  13. Bui, B. V., Vingrys, A. J. Development of receptoral responses in pigmented and albino guinea-pigs (Cavia porcellus). Doc Ophthalmol. 99, 151-170 (1999).
  14. Robson, J. G., Saszik, S. M., Ahmed, J., Frishman, L. J. Rod and cone contributions to the a-wave of the electroretinogram of the macaque. J Physiol. 547, 509-530 (2003).
  15. Severns, M. L., Johnson, M. A. The care and fitting of Naka-Rushton functions to electroretinographic intensity-response data. Doc Ophthalmol. 85, 135-150 (1993).
  16. Bui, B. V., Fortune, B. Origin of electroretinogram amplitude growth during light adaptation in pigmented rats. Vis Neurosci. 23, 155-167 (2006).
  17. Bui, B. V., Fortune, B. Ganglion cell contributions to the rat full-field electroretinogram. J Physiol. 555, 153-173 (2004).
  18. Tremblay, F., Laroche, R. G., Debecker, I. The Electroretinographic Diagnosis of the Incomplete Form of Congenital Stationary Night Blindness. Vision Res. 35, 2383-2393 (1995).
  19. Bayer, A. U., Keller, O. N., Ferrari, F., Maag, K. P. Association of glaucoma with neurodegenerative diseases with apoptotic cell death: Alzheimer’s disease and Parkinson’s disease. Am J Ophthalmol. 133, 135-137 (2002).
  20. Wostyn, P., Audenaert, K., De Deyn, P. P. An abnormal high trans-lamina cribrosa pressure difference: A missing link between Alzheimer’s disease and glaucoma. Clinical Neurology and Neurosurgery. 110, 753-754 (2008).
  21. Yucel, Y. H., Zhang, Q. A., Weinreb, R. N., Kaufman, P. L., Gupta, N. Effects of retinal ganglion cell loss on magno-, parvo-, koniocellular pathways in the lateral geniculate nucleus and visual cortex in glaucoma. Prog Retin Eye Res. 22, 465-481 (2003).
  22. Gupta, N., Yucel, Y. H. What changes can we expect in the brain of glaucoma patients. Survey of Ophthalmology. 52, 122-126 (2007).
  23. Kong, Y. X., et al. Impact of aging and diet restriction on retinal function during and after acute intraocular pressure injury. Neurobiol Aging. 33, 1115-1125 (2012).
  24. Bui, B. V., Sinclair, A. J., Vingrys, A. J. Electroretinograms of albino and pigmented guinea-pigs (Cavia porcellus). Aust N Z J Ophthalmol. 26, 98-100 (1998).
  25. Jobling, A. I., Wan, R., Gentle, A., Bui, B. V., McBrien, N. A. Retinal and choroidal TGF-beta in the tree shrew model of myopia: isoform expression, activation and effects on function. Exp Eye Res. 88, 458-466 (2009).
  26. Robson, J. G., Frishman, L. J. Dissecting the dark-adapted electroretinogram. Doc Ophthalmol. 95, 187-215 (1998).
  27. Robson, J. G., Frishman, L. J. The rod-driven a-wave of the dark-adapted mammalian electroretinogram. Prog Retin Eye Res. 39, 1-22 (2014).
  28. Hudnell, H. K., Boyes, W. K. The comparability of rat and human visual-evoked potentials. Neurosci Biobehav Rev. 15, 159-164 (1991).
  29. Charng, J., et al. Conscious wireless electroretinogram and visual evoked potentials in rats. PLoS One. 8, e74172 (2013).
  30. Hetzler, B. E., Berger, L. K. Ketamine-Induced Modification of Photic Evoked-Potentials in the Superior Colliculus of Hooded Rats. Neuropharmacology. 23, 473-476 (1984).

Play Video

Cite This Article
Nguyen, C. T., Tsai, T. I., He, Z., Vingrys, A. J., Lee, P. Y., Bui, B. V. Simultaneous Recording of Electroretinography and Visual Evoked Potentials in Anesthetized Rats. J. Vis. Exp. (113), e54158, doi:10.3791/54158 (2016).

View Video