Murin modèle expérimental de tumeur de développement original et péritonéale Métastase<em> via</em> Orthotopique Inoculation avec des cellules de l'ovaire Carcinome

Summary

Afin de clarifier le processus en plusieurs étapes de la dissémination peritoneale d'un carcinome de l'ovaire, l'étude actuelle présente un modèle expérimental murin du développement de la tumeur d'origine et métastases péritonéales par inoculation orthotopique avec ces cellules tumorales.

Abstract

carcinome ovarien épithélial (COE) est associée à un mauvais pronostic, car il montre la diffusion péritonéale. Pour améliorer le pronostic, il est important de contrôler la dissémination peritoneale. Cependant, on ignore encore comment les cellules tumorales se détachent des lésions primaires et attachent à la mésothélium. La mise en place d'un modèle animal approprié est nécessaire pour mieux comprendre le mécanisme de diffusion péritonéale in vivo. Dans l'étude actuelle, nous introduisons le processus de l'injection locale de cellules EOC dans la surface de l'ovaire murin au développement de métastases, y compris le péritoine et des organes éloignés. Femme souris nude (BALB / c nu / nu) à 8 semaines d'âge ont été utilisés. Sous un champ de vision microscopique, les cellules EOC (1 x 10 ⁵ cellules / pl de la matrice extracellulaire moyen (ECM) à base d' hydrogel / ovaire unilatéral / souris) ont été injectés dans les ovaires de souris grâce à une approche rétropéritonéale du flanc dorsal. Cette méthode proposée est un chierss procédure invasive pour la souris et minimise les dommages causés à l'ovaire. Ici, nous décrivons les étapes méthodologiques dans le développement de la formation de la tumeur d'origine et métastatique du COU.

Introduction

Carcinome ovarien épithélial (COE) représente le plus haut taux de mortalité liée au cancer chez les tumeurs malignes gynécologiques ^1. EOC est associée à un mauvais pronostic, principalement en raison de son retard symptomatologie, et est souvent associée à de multiples disséminations intrapéritonéale et métastases à distance ^2-4. diffusion péritonéale est un processus en plusieurs étapes. Tout d'abord, les cellules tumorales se détachent des lésions primaires et migrent dans la cavité abdominale. Lorsque les cellules tumorales se fixent au mésothélium péritonéal, ils commencent à envahir les tissus à travers le mésothélium ^5,6. Afin de mieux comprendre la biologie de la tumeur (par exemple, la progression du cancer et la réponse thérapeutique), des modèles de souris fournissent une mine d'informations. Une xénogreffe de cellules cancéreuses humaines est largement utilisé pour les modèles de souris dans lequel les cellules cancéreuses humaines sont inoculées par voie sous- cutanée, intraperitoneale, intraveineuse, et de manière orthotopique. Un modèle animal orthotopique avec un gempilée tumeur peut produire plus efficacement et avec précision des résultats qui reflètent l'environnement de la tumeur chez l'être humain par rapport à un modèle animal avec une tumeur greffée hétérotopique. Par conséquent, pour de nombreuses tumeurs humaines, des modèles de transplantation orthotopique ont été établis ^7-11.

Ici, nous décrivons l'inoculation orthotopique de cellules EOC humaines grâce à une approche rétropéritonéale du flanc dorsal, ce qui a limité l'invasivité par rapport à l'inoculation ventral. Cette technique peut fournir une variété d'informations utiles sur EOC, en particulier le mécanisme de diffusion intrapéritonéale.

Protocol

Le protocole de traitement suit les lignes directrices pour l'expérimentation animale adoptée par l'Université de Nagoya. 1. Préparation de suspensions de cellules ligne Human ovarien clair carcinome cellulaire. Maintenir ES-2 , les cellules 12 dans du milieu RPMI-1640 avec 10% de sérum de fœtus bovin (FBS) et de la pénicilline / streptomycine (pénicilline: 100 unités / ml, streptomycine 0,1 mg / ml). Les cellules de culture à 37 ° C dans un …

Representative Results

Six souris nues avaient leurs ovaires inoculés avec la claire lignée humaine de cellules de carcinome de cellules ES-2, tel que décrit dans ce protocole. Comme le montre la figure 1A, après 2 semaines, 5 des 6 souris avaient une tumeur de l'ovaire inoculés avec ES-2 cellules, mais il n'y avait pas de tumeur dans l'ovaire controlatéral sans inoculation (utilisé comme témoin). En outre, 2 des 5 souris ont montré plusieurs disséminations périton…

Discussion

Les modèles animaux sont essentiels pour analyser les mécanismes de développement de la tumeur, la progression, la métastase, et l'efficacité des médicaments contre les cellules cancéreuses. Les souris porteuses de cellules cancéreuses d'ovaire humain ont également été utilisés en tant que modèle animal. Ici, nous décrivons une procédure moins invasive pour l'administration des cellules tumorales ovariennes sur un site orthotopique. En utilisant cette procédure, l'inoculation dans l'o…

Materials

Matrigel matrix	BD	354234	ECM-based hydrogel
Insulin syringe	TERUMO	SS-05M2913	1/2cc, 29Gx1/2"
Suturing needle with suture			11mm, 3/8, Nylon6-0
Reflex 7mm Wound Clip Applier	CellPoint Scientific	204-1000
Reflex 7mm wound clips	CellPoint Scientific	203-1000