Summary

השתלת עור בעובי מלא Murine

Published: January 02, 2017
doi:

Summary

השתלת עור בעובי מלאת Murine היא מודל ומבוסס ללמוד דחייה בסביבת alloimmune. כאן, אנו מספקים הדרכה של כל שלב המעורב בביצוע BALB / ג – השתלת עור> C57BL / 6 בעובי מלא.

Abstract

השתלת עור בעובי מלאת Murine היא מודל in vivo ומבוסס ללמוד alloimmune תגובת דחיית שתל. למרות היישום המוגבל שלה לבני אדם, השתלת עור בעכברים הועסקה נרחבת למחקר השתלה. הנוהל הוא קל ללמוד ולבצע, וזה אינו דורש טכניקות מייקרו עדינות ולא הכשרה מקיפה. יתר על כן, דחיית שתל במודל זה מתרחשת תגובה אימונולוגית מאוד לשחזור מנוטר בקלות על ידי בדיקה ישירה ומישוש. בנוסף, השתלת עור משני עם שתלים בהתאמה או צד שליש עור יכולה להתבצע על מודלי השתלה מורכבים יותר כמו שיטה חלופית ולא מסובכת להעריך סובלנות תורם ספציפי. הסיבוכים נמוכים והם בכלל מוגבלים יתר הרדמה או מצוקה נשימתית לאחר ההליך. לכישלון השתל, מצד שני, בדרך כלל מתרחשת כתוצאה הכנה לקויה של גרמיצוב ומאחור, שגוי במיטת השתל, או מיקום לא ראוי של התחבושת. במאמר זה, אנו מציגים פרוטוקול להשתלת עור בעובי מלא בעכברים ולתאר הצעדים החשובים דרושי הליך מוצלח.

Introduction

השתלת איברים היא טיפול הבחירה בחולים עם כשל איברים סופנית, ותוצאות השתפרו פלאים עם ההתקדמות ניתוחים ופרוטוקולים דיכוי חיסוני. עם זאת, דיכוי מערכת חיסוני לטווח ארוך קשור לתופעות לוואי משמעותיות, לבין ההתפתחות של אסטרטגיות חדשות המקדמות סובלנות נשארת מטרת מחקר השתלה המודרנית.

במודלים של בעלי חיים רבים פותחו למחקר בסיסי בהשתלות, כדי לחקור את המנגנונים של דחייה של השתל וכדי לבחון גישות דיכוי חיסוני למניעת דחיית שתל ו לקידום סובלנות לטווח ארוך 1-3. מודלי העכבר הפכו התווך של מחקר האימונולוגי בשל הזמינויות הבלעדיות מכריעות של נוגדני אבחון וטיפול ומוגדרים היטב זנים טהורים ו מהונדסים. השתלת עור היא הליך פשוט שאינו דורש מיומנויות microsurgical מיוחדות והוא יכולבקלות להיות במעקב אחרי הניתוח. יחדיו, השתלת עור העכבר כבר כלי יוצא דופן ללמוד היבטים רבים המעורבים בתגובה alloimmune, כולל משלוח אנטיגן, סחר התא, והרס רקמות במהלך דחיית שתל 4,5.

כאן, אנו מציגים את הצעד-אחר-צעד הליך השתלת עור בעובי מלא תוך שימוש במודל העכבר, אנו מתארים את הצעדים החשובים הכרחיים עבור engraftment מוצלח של העור המושתל.

Protocol

כל הנהלים בוצעו בהתאם מדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה של המכון הלאומי לבריאות (NIH) ואושרו על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים באוניברסיטת ג'ונס הופקינס ושימוש (JHUACUC). הנהלים הספציפיים בוצעו תחת MO13M292 פרוטוקולי ACUC המאושרות MO13M370. קציר עור ת…

Representative Results

המיקום של התחבושת על עכבר הנמען הוא צעד חשוב של ההליך. שתל עור ממוקם על גזע הנמען, בין הכתף, הירך ועמוד השדרה (איור 1). התחבושת הוא עשה עם גזה מקופלת ושילוב של שתי תחבושות דבקות פלסטיק. עכבר הנמען מושם עם השתל למטה על הגזה על המרכז את התחבושת. שי…

Discussion

מאז השקתו ידי מךוואר, ראשון במחקרים בבני אדם ולאחר מכן בארנבות ועכברים, השתלת עור כבר מודל יסולא בפז לחקר תגובות חיסוניות אלוגנאית 6,7. בכתב היד הזה, אנו מציגים מודל של בקנה מידה גדול, הלא vascularized, השתלת עור בעובי מלא באמצעות העור הגב העליון והתחתון. שיטות חלופיות ש…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

עבודה זו מומנה על ידי NIH מענק R01AI077610.

Materials

Straight micro forceps  Sigma F4017
Curved micro forceps  Aesculap BD333R
Curved Stevens tenotomy scissors  Aesculap BC905R
Mayo dissecting  scissors Sigma S3146
Micro needle holder Aesculap BM563R
Sterile gauze Covidien 441218
6-0 Nylon suture  MWI 31849
Plastic Strips Band-Aid Johnson & Johnson Obtained from pharmacy
10 cm Petri dish Fisherbrand FB0875712
PBS Quality Biological 119069131
Buprenorphine DEA Number required; Obtained from hospital pharmacy
Enrofloxacin Bayer Health Care 186599

References

  1. Furtmuller, G. J., et al. Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse. J Vis Exp. , (2016).
  2. Oh, B., et al. A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice. J Vis Exp. , (2016).
  3. Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. J Vis Exp. , e50753 (2014).
  4. Jones, T. R., Shirasugi, N., Adams, A. B., Pearson, T. C., Larsen, C. P. Intravital microscopy identifies selectins that regulate T cell traffic into allografts. J Clin Invest. 112, 1714-1723 (2003).
  5. Celli, S., Albert, M. L., Bousso, P. Visualizing the innate and adaptive immune responses underlying allograft rejection by two-photon microscopy. Nat Med. 17, 744-749 (2011).
  6. Medawar, P. B. The behaviour and fate of skin autografts and skin homografts in rabbits: A report to the War Wounds Committee of the Medical Research Council. J Anat. 78, 176-199 (1944).
  7. Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B., Sparrow, E. M. Quantitative studies on tissue transplantation immunity. I. The survival times of skin homografts exchanged between members of different inbred strains of mice. Proc R Soc Lond B Biol Sci. 143, 43-58 (1954).
  8. Garrod, K. R., Cahalan, M. D. Murine skin transplantation. J Vis Exp. , (2008).
  9. Schmaler, M., Broggi, M. A., Rossi, S. W. Transplantation of tail skin to study allogeneic CD4 T cell responses in mice. J Vis Exp. , e51724 (2014).
  10. Bergstresser, P. R., Toews, G. B., Gilliam, J. N., Streilein, J. W. Unusual numbers and distribution of Langerhans cells in skin with unique immunologic properties. J Invest Dermatol. 74, 312-314 (1980).
  11. Chen, H. D., Silvers, W. K. Influence of Langerhans cells on the survival of H-Y incompatible skin grafts in rats. J Invest Dermatol. 81, 20-23 (1983).
  12. Chong, A. S., Alegre, M. L., Miller, M. L., Fairchild, R. L. Lessons and limits of mouse models. Cold Spring Harb Perspect Med. 3, a015495 (2013).
  13. Mayumi, H., Nomoto, K., Good, R. A. A surgical technique for experimental free skin grafting in mice. Jpn J Surg. 18, 548-557 (1988).
  14. McFarland, H. I., Rosenberg, A. S. Skin allograft rejection. Curr Protoc Immunol. Chapter 4, (2009).
  15. Lee, C. F., et al. Preventing Allograft Rejection by Targeting Immune Metabolism. Cell reports. 13, 760-770 (2015).
  16. Pollizzi, K. N., Powell, J. D. Integrating canonical and metabolic signalling programmes in the regulation of T cell responses. Nat Rev Immunol. 14, 435-446 (2014).
  17. Pearce, E. L., Poffenberger, M. C., Chang, C. H., Jones, R. G. Fueling immunity: insights into metabolism and lymphocyte function. Science. 342, 1242454 (2013).

Play Video

Cite This Article
Cheng, C., Lee, C., Fryer, M., Furtmüller, G. J., Oh, B., Powell, J. D., Brandacher, G. Murine Full-thickness Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (119), e55105, doi:10.3791/55105 (2017).

View Video