신생아 마우스 췌장의 기능 독도의 효과적인 분리

Chen Huang; Guoqiang Gu

doi:10.3791/55160

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방법 논문

신생아 마우스 췌장의 기능 독도의 효과적인 분리

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DOI:

10.3791/55160

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2017년 1월 6일

Chen Huang¹ , Guoqiang Gu¹

¹Department of Cell and Development Biology, Vanderbilt University Medical School

이 논문에서

요약

우리는 신생아 쥐에서 그대로 섬을 분리 본원 프로토콜을 설명합니다. Pancreata 부분적으로 세척하고 손을 따기 다음, 콜라게나로 소화했다. 20-80 아일렛 클러스터 여러 섬 연구에 적합한 새로 태어난 쥐의 췌장에 따라 얻을 수있다.

초록

큰 포유 동물 pancreata에서 관류 기반의 섬 - 격리 프로토콜은 잘 확립되어있다. 이러한 프로토콜은 쉽게 인해 준비 콜라겐 주입 및 이후의 조직 관류를 허용 췌관의 큰 크기로 많은 실험실에서 실시하고 있습니다. 관류 쉽게 작은 pancreata에서 얻을 수 없기 때문에 반대로, 작은 pancreata에서 섬 격리는, 신생아 쥐처럼, 도전이다. 여기에서 우리는 시각적 인 도움으로 새로 태어난 쥐에서 독도의 상당한 숫자를 복구 상세한 간단한 절차를 설명합니다. 갓 해부 전체 pancreata는 마이크로 원심 튜브에서 37 ° C에서 행크스 균형 염 용액 (HBSS)에 용해하고, 0.5 ㎎ / ㎖의 콜라게나 제 IV로 분해 하였다. 튜브는 조직의 분산을 돕기 위해 정기적으로 도청했다. 조직의 대부분이 1mm 주위에 작은 클러스터에 분산시킨 경우, 용 해물을 10 % 소 태아 혈청 (FBS)로 배양 배지와 서너 번 세척 하였다. 섬 클러스터,인식 선포 조직의 결여, 다음 입체경을 해부에서 복구 할 수 있습니다. 새로 태어난 마우스의 췌장 당 대형 섬에 80 소형 -이 방법은 (20)를 복구합니다. 이 섬은 인슐린 분비, 유전자 발현, 문화를 포함한 대부분의 생각할 수있는 다운 스트림 분석에 적합하다. 인슐린 분비 분석의 예는 분리 프로세스를 검증하기 위해 제공된다. 유전 적 배경과 소화의 정도는 수익률을 결정하는 가장 큰 요인이다. 이 내분비 - 외분비 격리 에이즈로 높은 활성 갓 만든 콜라겐 용액은 바람직하다. 세척의 모든 솔루션 및 소 태아 혈청에있는 양이온의 존재 [칼슘 (Ca ^2+)과 마그네슘 (Mg를 ^2+)] / 따기 매체는 적절한 무결성 섬의 좋은 수율이 필요하다. 좋은 대조 및 확대와 해부 범위도 도움이 될 것입니다.

서론

순수한 췌장섬을 분리하는 것은 베타 세포의 포도당 자극 인슐린 분비(GSIS)를 분석하고 사체 기증자로부터 섬을 이식하는 데 필수적입니다 ^1-3. 또한 섬세포에서 내분비 유전자 발현을 확립할 필요가 있다 ^{4, 5}. 이를 위해 큰 췌장섬을 큰 췌장섬으로부터 분리할 수 있도록 상세한 프로토콜이 수립되었습니다(⁶ 및 그 안에 있는 참고 문헌). 이러한 방법은 효소 관류를 기반으로 하여 섬 조직에서 acinar를 해리하고 gradient separation 및 hand picking과 결합합니다. 따라서 큰 췌장에서 섬을 분리하는 것은 대부분의 실험실에서 쉽게 수행할 수 있습니다. 반면에, 너무 작아서 관류할 수 없는 췌장에서 섬을 분리할 수 있는 상세한 단계별 프로토콜은 없습니다.

신생아 섬의 유전자 발현과 기능을 연구하는 것은 중요합니다. 신생아 섬은 인슐린 분비 및 증식 능력에서 성인과 다른 특성을 가지고 있습니다 ^{7, 8}. 그러나 새로 태어난 동물, 특히 쥐로부터 섬을 분리하는 것은 새로 태어난 췌장의 크기가 작기 때문에 어렵습니다. 이 크기는 췌관을 통해 콜라겐 분해 효소가 주입 될 때 일반적인 관류 과정을 방지합니다. 실제로, 몇몇 논문에서는 효소 또는 비효소 ....