Здесь мы представляем адаптация пассивной ЯСНОСТИ и 3D реконструкции метод для визуализации яичников сосудистую и фолликулярной капилляров в яичниках нетронутыми мыши.
Яичник является главным органом женской репродуктивной системы и имеет важное значение для производства женских гамет и эндокринной системы, но сложных структурных отношений и трехмерные (3D) сосудистую архитектуры управления яичник не хорошо описаны. Для того, чтобы визуализировать 3D соединения и архитектуры кровеносных сосудов в яичнике нетронутыми, первый важный шаг, чтобы оптически ясно яичника. Для того, чтобы избежать усадки ткани, мы использовали гидрогеля на основе фиксации пассивной ЯСНОСТИ (очистить липидный обмен гибридизированных акриламида грузовик изображений / иммуноокрашивания/в situ гибридизация совместимых тканей гидрогеля) протокола метод для очистки нетронутыми яичника . Иммуноокрашивания, расширенный multiphoton confocal микроскопии и 3D изображение реконструкций затем были использованы для визуализации яичников сосудов и фолликулярной капилляров. Используя этот подход, мы показали значительное положительная корреляция (P < 0.01) между длиной фолликулярной капилляров и объем фолликулярной стены.
Фолликул является блок основных структурных и функциональных яичников, и ее развития весьма связано с сосудистую внутри яичника. Кровеносные сосуды поставки питания и гормоны фолликулов и таким образом играют важную роль в обеспечении роста и созревания фолликулов1.
Сочетание технологий, в том числе селективного кровеносный сосуд маркеров, трансгенные мыши модели и фармацевтических разработок, увеличили наши знания о яичников сосудистой сети, ангиогенез и функции кровеносных сосудов фолликулогенез. Завязь известен как активный орган, потому что она моделирует различные ткани и сосудистой сети во время фолликулогенез и овуляции. Такие активные реконструкции в размер и структура судов требуется для биологической функции разработки и набором фолликулов.
Традиционные гистологические и histomorphometric методы, с помощью яичников секций и immunolabeling кровеносных сосудов, ограничиваются двухмерные (2D) изображения2. С развитием технологий трехмерного (3D) реконструкции, 2D изображения срезов ткани могут перекрываться сделать 3D структура, но этот метод все еще имеет некоторые ограничения — секционирование ткани может уничтожить микроструктур, некоторые части ткани часто отсутствуют, и значительный труд участвует в принятии 3D реконструкций из изображений, полученных из кусочков. Целом ткани 3D визуализации с помощью конфокальной микроскопии можно преодолеть многие из этих ограничений, но эти методы ограничены к оценке ангиогенеза в эмбриональных яичников3. Использование цельной ткани, очистка методы, такие как ясность4 может увеличить визуализированных объем с тем, чтобы решить эти проблемы в послеродовой период и взрослых яичников, и такие методы предоставляют оптических Распродажа завязи без каких-либо структурных деформаций. Визуализация 3D архитектуры нетронутыми завязи обеспечивает точный образ базы данных для программного обеспечения для анализа изображений, такие как пакет программного обеспечения Imaris, используемый в этой работе.
Ремоделирование завязи всей взрослой жизни является частью динамической физиологические системы, и это делает завязи отличную модель для расследования положения по ангиогенез. Кроме того оценки роли яичников кровеносных сосудов в патологических условиях женской репродуктивной системы, такие как синдром поликистозных яичников или яичников могут быть изучены через весь яичников ткани изображений. Развитие метода пассивной ЯСНОСТИ и использование программного обеспечения для анализа современных изображений предоставили подробной пространственной информации на отношения между кровеносных сосудов и яичников структур, таких как фолликулов.
В текущем исследовании мы представляем 3D визуализации для оценки взаимосвязи между капилляров и отдельных растущих фолликулов. В нашей предыдущей работы, используя же протокол 9мы изучили роль крупных сосудистую, взаимодействия между фолликулов и расположение фолликуло?…
The authors have nothing to disclose.
Это исследование было поддержано грантов из китайского Специального фонда для постдокторантов (№ 2014T70392 до YF), Фонд национального естественных наук Китая (№ 81673766 до YF), новый учитель грунтовка фонд, Zuoxue фонд университета Фудань и развитие Проект пик Шанхай дисциплин интегративной медицины (20150407).
Acrylamide | Vetec | v900845 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/vetec/v900845 |
Alexa Flour 488 (Dilution 1:50) | Life Technologies | A11039 | https://www.thermofisher.com/antibody/product/Goat-anti-Chicken-IgY-H-L-Secondary-Antibody-Polyclonal/A-11039 |
Alexa Flour 594 (Dilution 1:50) | Life Technologies | A11012 | https://www.thermofisher.com/antibody/product/Goat-anti-Rabbit-IgG-H-L-Cross-Adsorbed-Secondary-Antibody-Polyclonal/A-11012 |
Bisacrylamide | Amresco | 172 | http://www.amresco-inc.com/BIS-ACRYLAMIDE-0172.cmsx |
Black wall glass bottom dish (Willco-Dish) | Ted Pella | 14032 | http://www.tedpella.com/section_html/706dish.htm#black_wall |
Boric acid | Sinopharm Chemical Reagent | 10004818 | http://en.reagent.com.cn/enshowproduct.jsp?id=10004818 |
Disodium hydrogen phosphate dodecahydrate (Na2HPO4 12H2O) | Sinopharm Chemical Reagent | 10020318 | http://en.reagent.com.cn/enshowproduct.jsp?id=10020318 |
FocusClear | Celexplorer | FC-102 | http://www.celexplorer.com/product_list.asp?MainType=107&BRDarea=1 |
Parafilm | Bemis | PM996 | http://www.parafilm.com/products |
Paraformaldehyde | Sinopharm Chemical Reagent | 80096618 | http://en.reagent.com.cn/enshowproduct.jsp?id=80096618 |
PECAM1/CD31, platelet-endothelial cell adhesion molecule 1 (Dilution 1:10) | Abcam | ab28364 | http://www.abcam.com/cd31-antibody-ab28364.html |
Photoinitiator VA044 | Wako | va-044/225-02111 | http://www.wako-chem.co.jp/specialty/waterazo/VA-044.htm |
Sodium azide | Sigma | S2002 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/s2002?lang=en®ion=US |
Sodium chloride (NaCl) | Sinopharm Chemical Reagent | 10019318 | http://en.reagent.com.cn/enshowproduct.jsp?id=10019318 |
Sodium dihydrogen phosphate dihydrate (NaH2PO4 2H2O) | Sinopharm Chemical Reagent | 20040718 | http://en.reagent.com.cn/enshowproduct.jsp?id=20040718 |
Sodium dodecyl sulfate | Sinopharm Chemical Reagent | 30166428 | http://en.reagent.com.cn/enshowproduct.jsp?id=30166428 |
Sodium hydroxide (NaOH) | Sinopharm Chemical Reagent | 10019718 | http://en.reagent.com.cn/enshowproduct.jsp?id=10019718 |
Triton X-100 | Sinopharm Chemical Reagent | 30188928 | http://en.reagent.com.cn/enshowproduct.jsp?id=30188928 |
Tyrosine hydroxylase (TH, Dilution 1:50) | Abcam | ab76442 | http://www.abcam.com/tyrosine-hydroxylase-phospho-s40-antibody-ab51206.html |