JoVE Journal > Chemistry
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
자동 번역
화학

En praktisk metode til udvinding og analyse med højtryks væskekromatografi catecholamin neurotransmittere og deres metabolitter

Published: March 01, 2018
doi:
10.3791/56445
, , , ,
1School of Public Health of Southeast University,Laboratory of Environment and Biosafety Research Institute of Southeast University in Suzhou, 2Key Laboratory of Child Development and Learning Science (Ministry of Education), School of Biological Science & Medical Engineering,Southeast University, 3School of Public Health,Tianjin Medical University, 4British Columbia Academy,Nanjing Foreign Language School

Summary

Vi præsenterer en bekvem fast-fase udvinding koblet til højtryks væskekromatografi (HPLC) med elektrokemisk detektion (ECD) samtidige bestemmelse af tre monoamin neurotransmittere og to af deres metabolitter i spædbørns urin. Vi har også identificere metabolit MHPG som en potentiel biomarkør for tidlig diagnosticering af hjerneskade til spædbørn.

Abstract

Udvinding og analyse af katekolamin neurotransmittere i biologiske væsker er af stor betydning for vurderingen af nervesystemet funktion og beslægtede sygdomme, men deres præcise måling er stadig en udfordring. Mange protokoller er blevet beskrevet for neurotransmitter måling af en række instrumenter, herunder højtryks væskekromatografi (HPLC). Men der er mangler, som kompliceret operation eller svære at opdage flere mål, som ikke kan undgås, og i øjeblikket dominerende analyse teknik er stadig HPLC kombineret med følsomme elektrokemiske eller fluorimetri påvisning, skyldes dens høje følsomhed og god selektivitet. Her, er en detaljeret protokol beskrevet for forbehandling og påvisning af katekolaminer med højtryk væskekromatografi med elektrokemisk detektion (HPLC-ECD) i virkelige urinprøver af spædbørn, ved hjælp af electrospun sammensatte nanofibers sammensat polymere crown Eter med polystyren som adsorbent, også kendt som metoden pakket fiber faste fase udvinding (PFSPE). Vi viser hvordan urin prøver kan let precleaned af en nanofiber-pakket faste fase kolonne, og hvordan analysander i stikprøven kan være hurtigt beriget, desorberet, og fundet på en ECD system. PFSPE forenkler de forbehandling procedurer for biologiske prøver, giver mulighed for nedsat tid, udgifter og reduktion af tabet af mål.

Alt i alt illustrerer dette arbejde en enkel og praktisk protokol for fast-fase udvinding koblet til en HPLC-ECD system for samtidige bestemmelse af tre monoamin neurotransmittere (noradrenalin (NE), adrenalin (E), dopamin (DA)) og to af deres metabolitter (3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol (MHPG) og 3,4-dihydroxy-Phenyleddikesyre (DOPAC)) i spædbørns urin. Den etablerede protokol blev anvendt til at vurdere forskelle i urin katekolaminer og deres metabolitter mellem højrisiko spædbørn med perinatal hjerneskade og raske kontrolpersoner. Sammenlignende analyse viste en betydelig forskel i urin MHPG mellem de to grupper, der angiver, at catecholamin metabolitter kan være en vigtig kandidat markør for tidlig diagnosticering af tilfælde med risiko for hjerneskade hos spædbørn.

Introduction

Catecholamin neurotransmittere og deres metabolit indholdet i kropsvæsker kan påvirke neurale funktion og påvirker balancen af svar til stimulus stater til et stort omfang1. Abnormities kan forårsage en række sygdomme, såsom pheochromacytoma, ganglioneuroma, neuroblastoma, og neurologiske1,2. Ekstraktion og bestemmelse af katekolaminer i kropsvæsker er meningsfuld for diagnosticering af de pågældende sygdomme. Men katekolaminer i biologiske prøver findes i lave koncentrationer og oxideres nemt. De er desuden meget vanskeligt at eluere på grund af den store mængde af indblanding i den mellemstore3. Samtidige påvisning af katekolaminer i biologiske væsker er således stadig en udfordring.

Der har været vurderinger viser, urin katekolaminer kan være en foranstaltning af stress, og at deres niveauer er vigtige biologiske markører reagerer på taktil stimulation forarbejdning i nyfødte5. Ifølge forskning, alle spædbørn, der har lidt af for tidlig hændelser er i risiko for hjernen skade4,5,6, og skade kan forårsage unormale frigivelse af katekolaminer og dertil knyttede spørgsmål i væsker. Der findes avancerede magnetisk resonans teknikker, der kan afsløre hjerneskade i tidligere faser7,8. Men inden for de første 48 timer, en unormal udviklingsforstyrrelser proces vil forårsage permanent hjerneskade, der ikke vil være tydelig i medicinske billeder11. Udover, de høje omkostninger og knappe instrument ressourcer, sammen med andre faktorer, gør det umuligt for alle neonatal enheder skal have adgang til disse specialiserede neuro-imaging teknikker. Men brugen af en let tilgængelig og praktisk biomarkør (såsom katekolaminer og deres metabolitter) kunne overvinde disse mangler og screening af en biomarkør i menneskelige væsker kan hjælpe i den tidlige diagnosticering af hjerneskade og føre til lynhurtig identifikation af nyfødte spædbørn at behøve neuroprotection9. Katekolaminer i urinen kan være en let og indlysende indeks, på grund af den direkte sammenhæng mellem mængden af dem udgivet i væsker og neuroactivity funktion.

Blandt biologiske væsker, cerebrospinalvæske (CSF) og plasmaprøver er ikke let at få via eksisterende traumatisk procedurer, og det er også meget svært at slippe af interferens på grund af selvklæbende protein og andre urenheder, fører til en besværlig og tidskrævende prøvetagning proces, der er uegnede for gentagne påvisning. Også, for børn, det er næsten umuligt at få prøverne i en traumatisk mode. Derfor, urin prøveudtagning er bedre end de andre former for prøveudtagning, som det er non-invasiv, nem at betjene, og kan gøres gentagne gange. Urinprøver er rigelig og let at opbevare, og Vis store fordele i forhold til de andre former for biologiske prøver.

De vigtigste metoder til at kvantificere katekolaminer i biologiske væsker omfatter radioenzymic assays10, enzym-forbundet immun-sorptionsmiddel assays11, voltammetry12 og termisk linse massespektrometri13. Men mangler findes, såsom komplicerede operationer og svære at opdage flere mål. I dag er er den dominerende analyse teknik højtydende væskekromatografi (HPLC)14, kombineret med følsomme elektrokemiske15 eller fluorimetri påvisning16, på grund af sin høje følsomhed og god selektivitet. Med tandem massespektrometri teknologi, såsom væskekromatografi/massespektrometri (LC/MS) og liquid chromatography/masse massespektrometri/massespektrometri (LC/MS/MS), analyse og kvantificering af neurotransmittere kan opnå høj nøjagtighed og specificitet17,18. MS teknik kræver dog dyrt instrumentation samt væsentligt kvalificeret arbejdskraft, hvilket gør metoden vanskelig at anvende almindeligt i de fleste konventionelle laboratorier. HPLC-ECD systemer er almindeligt udstyret i mest konventionelle og kliniske laboratorier, og således er blevet et fælles og gode valg for forskningsgrupper at bruge kemiske bestemmelse, men de kræver prøven blev indført i systemet til at være ren og af individuel bind19. Således, det er af stor betydning at rense og kondensere prøve inden analysen. Den klassiske metode til rensning skridt er væske-væske ekstraktion14,15,20 og off-line fast-fase udvinding, herunder aktiveret aluminiumoxid kolonne21,22 og diphenylborate (DPBA) compleksering23,24,25,26.

Myeongho Lee et al. har brugt polymer harpiks kemisk modificeret med krone ether som adsorbent til selektivt uddrag katekolaminer fra humant urin siden 200727. Også i 2006, Haibo han mfl. påvist en letkøbt syntese tilgang til boronate affinitet udvinding sorptionsmiddel byutilizing functionalizable nanomagnetic polyeder oligomere silsesquioxane (eventuelt) baseret nanomagnetic sammensat, og anvender det til berigelse af katekolaminer i human urin (noradrenalin, adrenalin og isoprenaline)28. De tog også fordel af nanomaterialer til at opfylde det arbejde, ved hjælp af en teknologi kaldet nano-electrospinning og danner polymer fibermaterialet i nanoskala. Electrospinning processen kan justere diameter, morfologi og rumlige justering af produktet ved at kontrollere arbejdskapital spænding og ændre indholdet af spinning løsning sammen med andre parametre29. Sammenlignet med konventionelle SPE patron, electrospun nanofibers er særdeles velegnet til at udtrække og berige target analysander fra en kompleks matrix, som de er udstyret med høj overflade-areal-til-volumen forhold til adsorberes til analysander med høj effektivitet, og udvise flere let-kontrollerede kemiske overfladeegenskaber, så handy udlæg i target forbindelser. Disse egenskaber gør dem gode valg for SPE adsorbenter, hvilket reducerer den faste fase og desorption opløsningsmiddel beløb30,31,32,33. For katekolaminer i urinprøver, blev electrospun nanofibers, der består af apolymeric crown afdampes med polystyren (PCE-PS) brugt til selektivt udtrække tre katekolaminer (NE, E, og DA)34. Papiret anført, at den selektive crown ether adsorberet mål af NE, E, og DA, som var baseret på dens korrekte geometri for bindende katekolaminer via danne hydrogenbindinger. Resultaterne vises de materielle crown ether effektivt, at fjerne andre interfererende forbindelser indeholdt i biologiske prøver. Inspireret af denne betænkning, en roman metode blev udviklet til en selektiv ekstraktion af katekolaminer ved brug af electrospun sammensatte nanofibers sammensat af PCE-PS.

I dette papir rapporteret metoden tidligere34 blev forbedret og ansat ikke kun til at analysere E, NE, og DA, men også deres MHPG og DOPAC, metabolitter i urin. Vi også udforske nye muligheder for mekanismen af adsorption proces. Metoden viser tilfredsstillende ekstraktionseffektivitet og selektivitet til de fem analysander, og metoden blev efterprøvet i analysen af urin fra højrisiko spædbørn med perinatal hjerneskade og raske kontrolpersoner.

Protocol

Blev indhentet informeret samtykke fra forældrene, og institutionelle review board godkendelse blev opnået for undersøgelsen. Undersøgelsen blev udført i overensstemmelse med etiske kodeks af World Medical Association (Helsinki-erklæringen) for eksperimenter, der involverer mennesker. Pårørende af alle deltagerne givet skriftligt samtykke til at blive indskrevet i undersøgelsen. Etisk udvalg godkendelse fra Zhongda Hospital, affiliate med sydøst Universitet, blev også fremstillet. 1. …

Representative Results

Denne protokol er en enkel og praktisk PFSPE metode til at forbehandle urinprøver og berige fem katekolaminer for registrering via en HPLC-ECD system; et diagram af processen er vist i figur 1. Protokollen omfatter hovedsagelig fire trin-aktivering, lastning, skylning, og eluerer – kombineret med en lille mængde af PCE-PS nanofibers og en enkel solid-fase udvinding enhed. Morfologi af PCE-PS nanofibers blev vurderet ved hjælp af en overflade og porøsitet …

Discussion

Den foreslåede PFSPE metode i dette papir kan være betydelige og meningsfuld for sin hurtighed, enkelhed og bekvemmelighed. Adsorbenter bruges i protokollen er electrospun nanofibers, som har høj overflade område-til-volumen forhold og adsorberes til analysander med høj effektivitet. Proceduren kun brug for et par milligram af nanofiber og en lille mængde af eluant opløsningsmiddel, og kræver ikke en fordampning skridt at koncentrere analysander. Her, har vi fremlagt en detaljeret oversigt over en HPLC-ECD basere…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Denne undersøgelse blev støttet af National Science Foundation of China (No.81172720, nr. 81673230), sociale udvikling forskning Program af Jiangsu provinsen videnskab og teknologi afdeling (nr. BE2016741), videnskab & teknologi projekt af Kina General Administration for Quality Supervision, Inspection and Quarantine (2015QK055), åbne projektet Program af centrale laboratorium for barnets udvikling og læring videnskab af Undervisningsministeriet, Sydøst Universitet (CDLS-2016-04). Vi anerkender oprigtigt Yuan sang og Ping Liu, der hjalp os i prøver samling.

Materials

200 µL pipette tip column to contain nanofibers
PCE-PS nanofibers material for PFSPE extraction
steel rod (about 0.5 mm diameter) fill the nanofibres into the column
gastight plastic syringe (5 ml) compress solution into the end of the tip
methanol Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 67-56-1
diphenylborinic acid 2-aminoethyl ester(DPBA) Sigma-Aldrich.Inc A-106408 complex reagent
norepinephrine(NE) Sigma-Aldrich.Inc A-9512 analyte
3-Methoxy-4-hydroxyphenylglycol(MHPG) Sigma-Aldrich.Inc H1377 analyte
epinephrine(E) Sigma-Aldrich.Inc 100154-200503 analyte
3, 4-Dihydroxyphenylacetic acid(DOPAC) Sigma-Aldrich.Inc D-9128 analyte
dopamine(DA) Sigma-Aldrich.Inc H-8502 analyte
3, 4-dihydroxybenzylamine hydrobromide(DHBA) Sigma-Aldrich.Inc 858781 interior label
acetonitrile Sigma-Aldrich.Inc 75-05-8 eluriant and mobile phase
phosphoric acid Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 7664-38-2 eluriant
uric acid Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 69-93-2 artifical urine
creatinine Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 60-27-5 artifical urine
trisodium citrate Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 6132-04-3 artifical urine
KCl Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 7447-40-7 artifical urine
NH4Cl Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 12125-02-9 artifical urine
NaHCO3 Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd SWC0140326 artifical urine
C2Na2O4 Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 62-76-0 artifical urine
NaSO4 Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 7757-82-6 artifical urine
disodium hydrogen phosphate Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 10039-32-4 artifical urine
urea Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 57-13-6 artifical urine
NaCl Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 7647-14-5 artifical urine
MgSO4.7H2O Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 10034-99-8 artifical urine
CaCl2 Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 10035-04-8 artifical urine
HCl Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 7647-01-0 artifical urine
citric acid Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 77-92-9 artifical urine and mobile phase
EDTA disodium salt Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 34124-14-6 mobile phase
monometallic sodium orthophosphate Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 7558-80-7 artifical urine and mobile phase
1-heptanesulfonic acid sodium salt Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 22767-50-6 mobile phase
sodium hydroxide Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 1310-73-2 mobile phase
phenylboronic acid column(PBA column) Aglilent 12102018 PBA extraction
Inertsil® ODS-3 5 µm 4.6×150 mm column Dikma 5020-06731 HPLC column for seperation
SHIMADZU SIL-20AC prominence AUTO SAMPLER Shimadzu Corporation, Japan SIL-20AC auto injection for eluriant
SHIMADZU LC-20AD High Performance Liquid Chromatography Shimadzu Corporation, Japan LC-20AD HPLC pump
SHIMADZU L-ECD-60A electrochemical detector Shimadzu Corporation, Japan L-ECD-60A detector for the analytes
ASAP 2020 Accelerated Surface Area and Porosimetry System Micromeritics, USA surface and porosity analyzer 
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Elhwuegi, A. S. Central monoamines and their role in major depression. Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 28, 435-451 (2004).
  2. Da, C. F., Ngoabdalla, S., Houzel, J. C., Rehen, S. K. Murine model for Parkinsons disease: From 6-OH dopamine lesion to behavioral test. J. Vis. Exp. (35), e1376 (2010).
  3. Varley, H., Gowenlock, A. H. The clinical chemistry of monoamines. Brit. Med. J. 2, 1330 (1963).
  4. Wang, X., Rousset, C. I., Hagberg, H., Mallard, C. Lipopolysaccharide-induced inflammation and perinatal brain injury. Semin. Fetal. Neonatal. Med. 11, 343-353 (2006).
  5. Inder, T. E., Volpe, J. J. Mechanisms of perinatal brain injury. Semin. Neonatol. 5, 3-16 (2000).
  6. Miller, S. P., Ferriero, D. M. From selective vulnerability to connectivity: Insights from newborn brain imaging. Trends. Neurosci. 32, 496-505 (2009).
  7. Barkovich, A. J., et al. Proton MR spectroscopy for the evaluation of brain injury in asphyxiated, term neonates. Am. J. Neuroradiol. 20, 1399-1405 (1999).
  8. Liauw, L., van Wezel-Meijler, G., Veen, S., van Buchem, M. A., van der Grond, J. Do apparent diffusion coefficient measurements predict outcome in children with neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy?. Am. J. Neuroradiol. 30, 264-270 (2009).
  9. Varsami, M., et al. Inflammation and oxidative stress biomarkers in neonatal brain hypoxia and prediction of adverse neurological outcome: A review. J. Pediatr. Neonat. Individual. Med. 2, e020203 (2013).
  10. Cooper, R. L., Walker, R. F. Microradioenzymic assays for the measurement of catecholamines and serotonin. Methods. Enzymol. 103, 483-493 (1983).
  11. Murphy, J. F. The development of enzyme linked immunosorbent assays (ELISA) for the catecholamines adrenaline and noradrenaline. J. Immunol. Methods. 154, 89-98 (1992).
  12. Jones, S. R., Mickelson, G. E., Collins, L. B., Kawagoe, K. T., Wightman, R. M. Interference by pH and Ca2+ ions during measurements of catecholamine release in slices of rat amygdala with fast-scan cyclic voltammetry. J. Neurosci. Methods. 52, 1-10 (1994).
  13. Sanchismallols, J. M., Villanuevacamañas, R. M., Ramisramos, G. Determination of unconjugated catecholamine in urine as dopamine by thermal lens spectrometry. Analyst. 117, 1367-1371 (1992).
  14. Lan, C., Liu, W. Determination of catecholamines by HPLC-ECD in urine. Medical Laboratory Science and Clinics. , (2007).
  15. Tsunoda, M., Aoyama, C., Ota, S., Tamura, T., Funatsu, T. Extraction of catecholamines from urine using a monolithic silica disk-packed spin column and high-performance liquid chromatography-electrochemical detection. Anal. Methods. 3, 582-585 (2011).
  16. Bartolini, B., et al. Determination of monoamine oxidase activity by HPLC with fluorimetric detection. Neurobiology (Bp). 7, 109-121 (1999).
  17. Dunand, M., Gubian, D., Stauffer, M., Abid, K., Grouzmann, E. High throughput and sensitive quantitation of plasma catecholamines by ultraperformance liquid chromatography tandem mass spectrometryusing a solid phase microwell extraction plate. Anal. Chem. 85, 3539-3544 (2013).
  18. He, H., Carballo-Jane, E., Tong, X., Cohen, L. H. Measurement of catecholamines in rat and mini-pig plasma and urine by liquid chromatography-tandem mass spectrometry coupled with solid phase extraction. J. Chromatogr. B. 997, 154-161 (2015).
  19. Simon, N., Young, P. How to increase serotonin in the human brain without drugs. J. Psychiatry. Neurosci. 32, 394-399 (2007).
  20. Grossi, G., et al. Improvements in automated analysis of catecholamine and related metabolites in biological samples by column-switching high-performance liquid chromatography. J. Chromatogr. A. 541, 273-284 (1991).
  21. Iwamot, T., Yoshiura, M., Iriyama, K. Liquid chromatographic identification of urinary catecholamine metabolites adsorbed on alumina. J. Liq. Chromatogr. R. T. 10, 1217-1235 (1987).
  22. Maycock, P. F., Frayn, K. N. Use of alumina columns to prepare plasma samples for liquid-chromatographic determination of catecholamines. Clin. Chem. 33, 286-287 (1987).
  23. Grossi, G., Bargossi, A., Lippi, A., Battistoni, R. A fully automated catecholamines analyzer based on cartridge extraction and HPLC separation. Chromatographia. 24, 842-846 (1987).
  24. Rondelli, I., et al. New method for the resolution of the enantiomers of 5,6-dihydroxy-2-methyl-aminotetralin by selective derivatization and HPLC analysis: Application to biological fluids. Chirality. 8, 381-389 (1996).
  25. Kumar, A., Hart, J. P., McCalley, D. V. Determination of catecholamines in urine using hydrophilic interaction chromatography with electrochemical detection. J. Chromatogr. A. 1218, 3854-3861 (2011).
  26. Sabbioni, C., et al. Simultaneous liquid chromatographic analysis of catecholamines and 4-hydroxy-3-methoxyphenylethylene glycol in human plasma: Comparison of amperometric and coulometric detection. J. Chromatogr. A. 1032, 65-71 (2004).
  27. Lee, M., et al. Selective solid-phase extraction of catecholamines by the chemically modified polymeric adsorbents with crown ether. J. Chromatogr. A. 1160, 340-344 (2007).
  28. He, H., et al. Facile synthesis of a boronate affinity sorbent from mesoporous nanomagnetic polyhedral oligomeric silsesquioxanes composite and its application for enrichment of catecholamines in human urine. Anal. Chim. Acta. 944, 1-13 (2016).
  29. Subbiah, T., Bhat, G. S., Tock, R. W., Parameswaran, S., Ramkumar, S. S. Electrospinning of nanofibers. J. Appl. Polym. Sci. 96, 557-569 (2005).
  30. Hu, W. Y., et al. Packed-fiber solid-phase extraction coupled with high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry for determination of diethylstilbestrol, hexestrol, and diedestrol residues in milk. J. Chromatogr. B. 957, 7-13 (2014).
  31. Liu, Z., Kang, X., Fang, F. Solid phase extraction with electrospun nanofibers for determination of retinol and α-tocopherol in plasma. Microchim. Acta. 168, 59-64 (2010).
  32. Qi, D., Kang, X., Chen, L., Zhang, Y., Wei, H., Gu, Z. Electrospun polymer nanofibers as a solid-phase extraction sorbent for the determination of trace pollutants in environmental water. Anal. Bioanal. Chem. 390, 929-938 (2008).
  33. Kang, X. J., Chen, L. Q., Zhang, Y. Y., Liu, Y. W., Gu, Z. Z. Performance of electrospun nanofibers for SPE of drugs from aqueous solutions. J. Sep. Sci. 31, 3272-3278 (2008).
  34. Chen, L. Q., Wang, Y., Qu, J. S., Deng, J. J., Kang, X. J. Selective extraction of catecholamines by packed fiber solid-phase using composite nanofibers composing of polymeric crown ether with polystyrene. Biomed. Chromatogr. 29, 103-109 (2015).
  35. Chen, L. Q., Zhu, X. H., Shen, J., Zhang, W. Q. Selective solid-phase extraction of catecholamines from plasma using nanofibers doped with crown ether and their quantitation by HPLC with electrochemical detection. Anal. Bioanal. Chem. 408, 4987-4994 (2016).
  36. Hu, H., Zhang, Y., Zhang, Y., Huang, X., Yuan, D. Preparation of a new sorbent based on boronate affinity monolith and evaluation of its extraction performance for nitrogen-containing pollutants. J. Chromatogr. A. 1342, 8-15 (2014).
  37. Chen, J., et al. Sensitive determination of four camptothecins bysolid-phase microextraction-HPLC based on a boronic acid contained polymer monolithic layer. Anal. Chim. Acta. 879, 41-47 (2015).
  38. Li, D., Chen, Y., Liu, Z. Boronate affinity materials for separation and molecular recognition: structure, properties and applications. Chem. Soc. Rev. 44, 8097-8123 (2015).
  39. Yan, J., Springsteen, G., Deeter, S., Wang, B. The relationship among pKa, pH, and binding constants in the interactions between boronic acids and diols: It is not as simple as it appears. Tetrahedron. 60, 11205-11209 (2004).
  40. Reuster, T., Rilke, O., Oehler, J. High correlation between salivary MHPG and CSF MHPG. Psychopharmacology. 162, 415-418 (2002).
  41. Beckmann, H., Goodwin, F. K. Urinary MHPG in subgroups of depressed patients and normal controls. Neuropsychobiology. 6, 91-100 (1980).
  42. Mitoma, M., et al. Stress at work alters serum brain-derived neurotrophic factor (BDNF) levels and plasma 3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol (MHPG) levels in healthy volunteers: BDNF and MHPG as possible biological markers of mental stress?. Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 32, 679-685 (2008).
  43. Ressler, K. J., Nemeroff, C. B. Role of Norepinephrine in the Pathophysiology and Treatment of Mood Disorders. Biol. Psychiatry. 46, 1219-1233 (1999).
  44. Alonso-Spilsbury, M., et al. Perinatal asphyxia pathophysiology in pig and human: A review. Anim. Reprod. Sci. 90, 1-30 (2005).
  45. Shalak, L., Perlman, J. M. Hypoxic-ischemic brain injury in the term infant: Current concepts. Early. Hum. Dev. 80, 125-141 (2004).
  46. Maas, J. W., Leckman, J. F. relationships between central nervous system noradrenergic function and plasma and urinary MHPG and other norepinephrine metabolites. MHPG: Basic Mechanisms and Psychopathology. , 33-43 (1983).
  47. Maas, J. W. Relationships between central nervous system noradrenergic function and plasma and urinary concentrations of norepinephrine metabolites. Adv. Biochem. Psychopharmacol. 39, 45-55 (1984).
  48. Peyrin, L., Pequignot, J. M., Chauplannaz, G., Laurent, B., Aimard, G. Sulfate and glucuronide conjugates of 3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol (MHPG) in urine of depressed patients: Central and peripheral influences. J. Neural. Transm. 63, 255-269 (1985).
  49. Peyrin, L. Urinary MHPG sulfate as a marker of central norepinephrine metabolism: A commentary. J. Neural. Transm. 80, 51-65 (1990).

Tags

High-pressure Liquid ChromatographyCatecholamine NeurotransmittersMetabolitesSolid-phase ExtractionElectrochemical DetectionMonoamine NeurotransmittersInfant’s UrineDPBA SolutionNorepinephrineEpinephrineDopamineMHPGDOPACDHBAHydrochloric AcidAnalyte Stocks
check_url/kr/56445?article_type=t&slug=a-convenient-method-for-extraction-analysis-with-high-pressure-liquid

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Xie, L., Chen, L., Gu, P., Wei, L., Kang, X. A Convenient Method for Extraction and Analysis with High-Pressure Liquid Chromatography of Catecholamine Neurotransmitters and Their Metabolites. J. Vis. Exp. (133), e56445, doi:10.3791/56445 (2018).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image