نموذج حيوان ضروري لفك دور تعميم الخلايا السرطانية (ريادية) في تعزيز استعمار الرئة أثناء سرطان خبيث. هنا، قمنا بإنشاء وتنفيذها بنجاح في فيفو الاعتداء على وجه التحديد اختبار اشتراط الجمعية فيبرونيكتين البوليمرية (بوليفن) على ريادية لاستعمار الرئة.
ورم خبيث هو السبب الرئيسي للوفاة من السرطان. دور تعميم الخلايا السرطانية (ريادية) في الترويج لسرطان خبيث، الذي يساهم في الرئة الاستعمار ريادية خطيرة على عمليات المنتشر الرئة المبكر، تم التحقيق بشدة. على هذا النحو، النماذج الحيوانية هي النهج الوحيد الذي يلتقط عملية منهجية كاملة لورم خبيث. نظراً لأن المشاكل تحدث في التصاميم التجريبية السابقة لدراسة إسهامات ريادية للتسرب الأوعية الدموية، قمنا بإنشاء في فيفو الرئة استعمار مقايسة التي طويلة الأجل-الأسفار الخلية-الراسم، كاربوكسيفلوريسسين إستر سوكسينيميديل (CFSE)، تم استخدامه لتسمية الخلايا السرطانية مع وقف التنفيذ، وقد أنجز نضح الرئة لمسح غير تحديداً المحاصرين ريادية قبل إزالة الرئة والتصوير [كنفوكل]، والتقدير الكمي. تم العثور على فيبرونيكتين البوليمرية (بوليفن) اجتمعنا للأسطح لجنة مكافحة الإرهاب التوسط من أجل استعمار الرئة في النهائي إنشاء أنسجة الورم المنتشر. وهنا على وجه التحديد اختبار شرط الجمعية بوليفن على ريادية لاستعمار الرئة والتسرب، أجرينا قصير فحوصات الرئة الاستعمار التي علقت خلايا سرطان الرئة لويس (المسئولية) ستابلي معربا عن الجبهة الوطنية-شرنا (شفن) أو التدافع-شرنا (شسكر) والمسمى مسبقاً مع 20 ميكرو كفسي تم تلقيح عن طريق الوريد في الفئران C57BL/6. أننا نجح في إثبات أن قدرات شفن LLC الخلايا لاستعمار الرئتين الماوس تتضاءل إلى حد كبير بالمقارنة مع الخلايا شسكر LLC. ولذلك، هذه المنهجية القصيرة الأجل قد تطبق على نطاق واسع لإثبات قدرة ريادية داخل الدورة الدموية لاستعمار الرئتين على وجه التحديد.
ورم خبيث هو السبب الرئيسي للسرطان الموت1،2. أدخل على تداول في تعليق الخلايا السرطانية المستمدة من الأنسجة الأولية والبقاء على قيد الحياة مختلف عن التحديات، مثلاً، anoikis، ومحصنة ضد الاعتداءات والأضرار نتيجة لإجهاد القص من ضغط الدم أو القيود هندسية، قبل أن تكون القدرة على استعمار الأجهزة البعيدة، خطوة أساسية في إملاء نجاح خبيث3،4،،من56. ولذلك، قد حاليا تم بذل جهود نشطة في تميز الخلايا السرطانية المتداولة (ريادية) وربط هذه الخصائص مع الورم الخبيث، وورم خبيث، ومعدلات البقاء على قيد الحياة لمرضى السرطان7،8 , 9-منذ عملية سرطان خبيث على وجه التحديد يصور حدثاً في فيفو ، نماذج حيوانية هي النهج الوحيد الذي يلتقط عملية منهجية كاملة لورم خبيث10،11،12 .
تصبح ريادية أنسجة الورم المنتشر من خلال أحداث الخلوية متعددة بما في ذلك استعمار الأجهزة البعيدة1،2. ومع ذلك، لا توفر خبيث الأكثر استخداماً فحوصات13،،من1415 وسيلة لمراقبة لجنة مكافحة الإرهاب استعمار الأجهزة البعيدة. ولذلك، حاجة ملحة في فيفو مقايسة تصميم للتصور الاستعمار لجنة مكافحة الإرهاب. على الرغم من أن عدة في فيفو و السابقين فيفو قصيرة الأجل الرئة الاستعمار وقد تم تصميم الاختبارات ومشاكل وعيوب تظل. على سبيل المثال، بينما البروتينات الفلورية الخضراء (التجارة والنقل)-فحوصات overexpressing ورم الخلايا التي استخدمت في هذه،من2223، ويستغرق وقتاً ستابلي ترانسفيكت واستنساخ الخلايا السرطانية مع كافية شدة الفلورسنت بروتينات فلورية خضراء تحت المجهر. وبالمثل، قد استخدمت تلطيخ عابر للخلايا السرطانية مع الراسم خلية طويل الأجل كفسي ليحل محل الخلايا السرطانية معربا عن التجارة والنقل، ولكنها لا تزال صعوبة في الحكم على ما إذا كانت خلايا السرطان المسمى كفسي مرفقة أو مجرد موجودة داخل المفرج من ال16،الأجهزة البعيدة قصت17.
تم العثور على فيبرونيكتين البوليمرية (بوليفن) المجمعة على أسطح ريادية المساهمة حاسمة في إقامة النهائي للورم المنتشر الأنسجة18،19،،من2021،22 . هنا، نحن إجراء قصير تم تلقيح الرئة الاستعمار فحوصات في أي تعليق لويس خلايا سرطان الرئة (المسئولية) ستابلي معربا عن الجبهة الوطنية-شرنا (شفن) أو التدافع-شرنا (شسكر) والمسمى مسبقاً مع كفسي عن طريق الوريد في الفئران C57BL/6. بعد 2-3 أيام، كانت أول perfused الرئتين الماوس مع الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) لإزالة فاتحة ريادية ضمن المفرج قبل أن يتعرض للفحص المجهري [كنفوكل] والتحديد الكمي لاستعمار الرئة المسئولية. لقد تبين بوضوح أن أعدادا من استعمار الرئة شفن المسئولية والعقيدات الورم خفضت إلى حد كبير بالمقارنة مع شسكر المسئولية، مساندة دور الجمعية بوليفن على ريادية إلى حد كبير في تسهيل الاستعمار ونمو ريادية في الرئتين. دراستنا يستحق مزيدا من التحقيق للدور بوليفن في سرطان خبيث.
جنبا إلى جنب مع طويلة الأجل الرئة الاستعمار فحوصات، على المدى القصير المنهجية المتبعة ونحن هنا لتقييم الاستعمار في فيفو الرئة بريادية في الأجهزة البعيدة كشفت بوضوح ويميز الدور المحدد لتجميعها في ريادية في استعمار بوليفن الرئتين، مما أدى بعد ذلك إلى التسرب وعمليات المنتشر1…
The authors have nothing to disclose.
الكتاب أود أن أشكر الدكتور تشانغ مينغ-مين والسيدة تشنغ هسين-يا لتقديم الدعم التقني لهم. هذا العمل كان تدعمها وزارة العلوم والتكنولوجيا في تايوان (معظم-103-2325-ب-006-009، ومعظم-104-2325-ب-006-001، معظم-105-2325-ب-006-001، و MOST-106-2320-B-006-068-MY3) ووزارة الصحة والرعاية الاجتماعية (MOHW106-TDU-ب-211-144004). نحن ممتنون أيضا للدعم من “مختبر البحوث الأساسية” لكلية الطب، جامعة تشينغ كونغ الوطنية، مجهر [كنفوكل] فوتون متعددة.
Material | |||
Bovine Serum Albumin (BSA) | Cyrusbioscience (Taipei, Taiwan) | 101-9048-46-8 | |
Bouin's Fluid | MCC(medical chemical corporation)/POISON | 456-A-1GL | |
CFSE Proliferation Dye | ebiosciences | 65-0850-85 | Full name: Carboxyfluorescein succinimidyl ester |
Dulbecco's Modified Eagle Media (DMEM) | (Gibco)ThermoFisher Scientific | 12100-061 | |
Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) | Cyrusbioscience (Taipei, Taiwan) | 101-6381-92-6 | For prepared trypsin-EDTA solution( Final concentration: 0.53mM ) |
Fetal bovine serum (FBS) | (Gibco)ThermoFisher Scientific | 10437-028 | |
Lewis lung carcinoma (LLC) | ATCC, Manassas, VA, USA | CRL-1642 | |
L-Glutamine, USP | (Gibco)ThermoFisher Scientific | 21051-024 | |
Potassium chloride (KCl) | Cyrusbioscience (Taipei, Taiwan) | 101-7447-40-7 | For prepared 1X PBS ( Final concentration: 2.7mM ) |
Potassium phosphate monobasic (KH2PO4) | Cyrusbioscience (Taipei, Taiwan) | 101-7778-77-0 | For prepared 1X PBS ( Final concentration: 1.8mM ) |
Sodium chloride (NaCl) | Cyrusbioscience (Taipei, Taiwan) | 101-7647-14-5 | For prepared 1X PBS ( Final concentration: 137mM ) |
Sodium phosphate dibasic (Na2HPO4) | Cyrusbioscience (Taipei, Taiwan) | 101-10039-32-4 | For prepared 1X PBS ( Final concentration: 10mM ) |
Trypan Blue | Sigma Aldrich | T6146 | 0.5 g mix with 100 mL 1X PBS |
Trypsin | Sigma Aldrich | T4799 | For prepared trypsin-EDTA solution ( Final concentration: 5g/L ) |
Zoletil 50 | Virbac | To dilute with 1X PBS | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Equipment | |||
Compact Tabletop Centrifuge 2420 | KUBOTA Co. | 2420 | |
Culture dish (6cm) | Wuxi NEST Biotechnology Co. | 705001 | |
Disposable syringe (with needle) | Perfect Medical Industry Co. | 24G/3 cm;3 ml & 26G/0.5 cm;1 ml | |
End over end mixer | C.T.I YOUNG CHENN | TS-20 | For suspended cells recovery |
FACSCalibur (FACS) | BD biosciences | ||
Forceps | Dimeda | 10.102.14 | |
Forma Direct Heat CO2 incubator | Thermo Fisher Scientific Inc. | HEPA CLASS 100 | |
Mouse restrainer (Cylindrical Restrainer 15-30 gm) | Stoelting | 51338 | |
Multiphoton Confocal Microscope BX61WI | Olympus | FV1000MPE | |
Neubauer counting chamber | Marienfeld-Superior | 640010 | |
Surgical scissor | Dimeda | 08.370.11 | |
Surgical sutures | UNIK SURGICAL SUTURES MFG. CO. | NO. 0034 | Black Braided silk; non-absorbable (25YD; U.S.P. 4/0) |
1.5 mL microcentrifuge tube | Wuxi NEST Biotechnology Co. | 615001 | |
15 mL Greiner tube | Greiner bio-one | 188271 |