神経周囲浸潤のIn Vivoマウスの坐骨神経モデル
Summary
坐骨神経に同系膵癌細胞を注入することによって浸潤の体内マウス モデルについて述べる。モデル神経浸潤の程度の定量化と浸潤細胞および分子メカニズムの調査をサポートしています。
Abstract
癌細胞浸潤 (PNI)、がん細胞が増殖し、神経の微小環境の移行と呼ばれるプロセスを介して神経に侵入します。このタイプの侵略は様々 な癌の種類は、展示し、膵臓癌の発見は非常に頻繁。マウスの膵臓の神経線維の微細なサイズは、直交異方性マウスモデルで難しい PNI の研究をレンダリングします。ここでは、マウスの坐骨神経に同系膵癌細胞株 Panc02 H7 を注入我々 PNI の生体内異所性モデルについて述べる.このモデルでは、麻酔下マウスの坐骨神経を公開され、がん細胞を注入します。挿入ポイントから脊髄に向かって近位の神経の癌細胞に侵入します。侵略の坐骨神経は抽出し、10 月冷凍区分のため処理します。H & E と以下の免疫蛍光染色は、蛋白質の表現の侵略の度に変化の定量化を許可します。このモデルは、その汎用性を与え PNI に関する研究各種に適用できます。PNI の細胞および分子メカニズムの調査のため、別のがんの種類によりさまざまな遺伝的変更および/または異なったタイプの癌細胞とマウスを使用します。さらに、これらのマウスに治療を適用することによって神経浸潤に対する治療薬の効果を学ぶことができます。
Introduction
神経は、がんの成長と移行1,2,3を刺激する特定の腫瘍微小環境を形成します。浸潤 (PNI) は、神経周辺を介して、がん細胞に侵入するプロセスです。それは、癌の浸潤が神経に沿って元のサイトから延びてので転移のユニークなルートとして考慮されるかもしれない。PNI は 22% から 1001,2に至るまで発生率と膵臓、前立腺、頭と首、唾液、子宮頚部、大腸癌を含むいくつかのがんの種類で発見されます。PNI 痛みに関連付けられ、予後不良と悪い生存率1,2と相関します。
神経周囲浸潤のモデルの開発は、このプロセスの細胞および分子メカニズムを明らかにし、梗数を減らす治療剤の候補物質をテストするのには不可欠です。癌と神経間相互作用を勉強の in vitro方法があります神経外植片4後根罹5,6、7、または特定のセル癌細胞の共培養神経からシュワンなど微小細胞7をです。生体内でのアプローチは、ただし、もっと生理学的に関連して、癌マウスモデルでがんが誘発または移植の使用を含む、会計全体の神経の微小環境の利点があります。同所性同種膵や前立腺癌、PNI のモデルはずっと報告された8,9,10 PNI の発生率が記録される可能性がありますがこれら器官の神経のサイズが小さいため参照してくださいすることは困難です。全体の神経とそのため梗数の程度を定量化します。ここで述べるモデルは単純な手術11を介してマウスの坐骨神経に注入される細胞の癌 PNI の体内モデルです。異所性移植は、脊髄へ神経内に侵入します。脊髄注射のサイトから神経の侵略の長さ測定される、神経中の癌のボリュームだけでなく。重要なは、侵略の神経は様々 なアッセイを顕微鏡、分子解析などのも収集できます。様々 な癌細胞をテストことができますと遺伝的に変更または特定化合物処理ホスト マウスを使用することもことがあります。この強力なアッセイとは、がん細胞とホスト微小環境 PNI のメカニズムを調査用に変更します。
Protocol
Representative Results
Discussion
このプロトコルでは膵臓癌細胞による坐骨神経浸潤の定量化は、浸潤の体内マウス モデルをについて説明します。このモデルにより、神経浸潤の分子メカニズムの研究です。この技術を用いた実験の成功プロセスで 3 つの重要な手順に慎重なアプローチが必要: 2) 侵略神経 (ステップ 3.4) の抽出と収穫された神経 (手順 4.1) の処理 3) 癌細胞 (手順 2.7、2.8) の 1) の注入。
<p class="jove_con…Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者らは、分子細胞診施設、メモリアルスローンケタ リング癌センターの動物施設によって提供される技術サービスをご了承ください。この作品は、NIH 助成金 CA157686 (r. j. ウォン) と P30 CA008748 によって支持された (メモリアルスローンケタ リングがんセンター助成金)。
Materials
| Mouse | Number and age variable depending on experimental needs | ||
| Cell culture media (PBS, Trypsin, and DMEM+10% FBS) | Any | Steps 1.1, 1.2, 1.3. | |
| Conical centrifuge tube, 50 mL | Falcon | 352098 | Step 1.1 |
| Microcentrifuge tube 1.5 mL | Axygen | MCT-150-C-S | Step 1.2 |
| Electric razor | WAHL | 9962 | Step 2.1. Can be substituted with commercial hair removal agent |
| Isoflurane, 250 mL | Baxter | 1001936060 | Step 2.2 |
| Hypoallergenic surgical tape | 3M Blenderm | 70200419342 | Step 2.3 |
| Betadine Swapsticks | PDI | SKU 41350 | Step 2.4 |
| Webcol Alcohol Preps | Covidien | 5110 | Step 2.4 |
| Sterile surgical tools (scissors and forceps) | Steps 2.4, 2.5, 3.3, 3.4, 3.5 | ||
| 10 μL Hamilton syringe | Hamilton | 80308 | Steps 2.7, 2.8 |
| Steel Micro spatula | Fisher Scientific | S50823 | Step 2.7 |
| Dissecting microscope | Step 2.7 | ||
| Bupivacine, 1 g | Enzo Life Sciences | BML-NA139-0001 | Step 2.9. Reconstitute to 0.5% |
| 5-0 Nylon suture | Ethicon | 698H | Step 2.9 |
| Tissue-Tek O.C.T. Compound | VWR | 25608-930 | Step 4.1 |
| Tissue-Tek Cryomold Molds | VWR | 25608-916 | Step 4.1 |
References
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