Summary
Detta protokoll fokuserar på kvantitativ analys av neuronala dendritiska arborization komplexitet (NDAC) i Drosophila, som kan användas för studier av dendritiska morfogenes.
Abstract
Dendriter är förgrenade projektionerna av en neuron och dendritiska morfologi återspeglar synaptic organisation under utvecklingen av nervsystemet. Drosophila larval neuronala dendritiska arborization (da) är en idealmodell för att studera morfogenes av neurala dendriter och geners funktion i utvecklingen av nervsystemet. Det finns fyra klasser av da nervceller. Klass IV är den mest komplexa med en förgrening mönster som täcker nästan hela området av larval kroppen väggen. Vi har tidigare präglat effekten av ljuddämpning i Drosophila ortholog av SOX5 på klass IV neuronala dendritiska arborization komplexitet (NDAC) med hjälp av fyra parametrar: längden på dendriter, ytan av dendrite täckning, den Totalt antal grenar och förgrenade struktur. Detta protokoll presenterar arbetsflödet av NDAC kvantitativ analys, bestående av larval dissektion, konfokalmikroskopi och bild analys procedurer använder ImageJ programvara. Ytterligare insikt da neuronal utveckling och dess underliggande mekanismer kommer att förbättra förståelsen av nervcellernas funktion och ge ledtrådar om de grundläggande orsakerna till neurologiska och kind.
Introduction
Dendriter, som är förgrenade projektionerna av en neuron, täcka området som omfattar neuron's sensoriska och synaptic ingångar från andra nervceller1,2. Dendriter är en viktig komponent i synapsen bildandet och spelar en avgörande roll i att integrera synaptic ingångar, samt förökningsmaterial elektrokemisk stimulering i ett neuron. Dendritiska arborization (da) är en process genom vilken nervceller bildar nya dendritiska träd och grenar att skapa nya synapser. Utveckling och morfologi av da, såsom gren densitet och gruppera mönster, resultera från flera steg biologiska processer och är starkt korrelerade till nervcellernas funktion. Målet med detta protokoll är att tillhandahålla en metod för kvantitativ analys av neuronala dendritric arborization komplexitet i Drosophila.
Komplexiteten i dendriter bestämmer den synaptiska typer, connectivity och ingångar från partner nervceller. Förgrenade mönster och tätheten av dendriter är inblandade i behandlingen av de signaler som konvergerar på den dendritiska fält3,4. Dendriter har flexibilitet för justering i utveckling. Exempelvis har synaptisk signalering en effekt på dendrite organisation i somatosensoriska neuron under utvecklingsfasen och i den mogna nervsystem5. Inrättandet av neuronala anslutning bygger på morfogenes och mognaden av dendriter. Missbildning av dendriter är associerade med försämrad nervcellernas funktion. Studier har visat att abnormitet av da neuron morfogenes kan bidra till etiologier av flera neurodegenerativa sjukdomar, däribland Alzheimers sjukdom (AD), Parkinsons sjukdom (PD), Huntingtons sjukdom (HD), och Lou Gehrigs sjukdom / Amyotrofisk lateralskleros (ALS)6,7,8. Synaptic ändringar visas i tidigt stadium av AD, i konsert med nedgång och nedskrivning av neuron funktion7,8. Detaljerna i hur dendrite patologi bidrar till patogenes i dessa neurodegenerativa sjukdomar är dock fortfarande gäckande.
Utvecklingen av dendriter regleras av gener som kodar för ett komplext nätverk av tillsynsmyndigheter, såsom familjen Wnt proteiner9,10, transkriptionsfaktorer och ligander på cell surface receptorer11,12 . Drosophila da nervceller består av fyra klasser (klass I, II III, IV), av vilken klass IV da nervceller har de mest komplexa förgrenade mönsterna och har varit anställd som en kraftfull experimentella system för bättre förståelse morfogenes13, 14. Under tidiga morfogenes, överuttryck eller RNAi nedtystning av gener i klass IV da nervceller resultera i förändringar i förgrenade mönster och dendrite beskärning13. Det är viktigt att utveckla en praktisk metod för kvantitativ analys av den neuronala dendritiska arborization.
Vi har tidigare visat att ljuddämpning av den Drosophila ortholog av SOX5, Sox102F, lett till kortare dendriter av da nervceller och minskad komplexitet i klass IV da nervceller15. Här presenterar vi förfarandet för kvantitativ analys för neuronal dendritiska arborization komplexiteten (NDAC) i Drosophila. Detta protokoll, anpassad från de tidigare beskrivna metoder, ger en kortfattad metod att assay utvecklingen av da sensoriska nervceller. Det illustrerar den robust bild märkning och da neuron i tredje instar larval kroppen väggen16,17,18,19. Det är en värdefull protokoll för forskare som vill undersöka NDAC och utvecklingsmässiga skillnaderna i vivo.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. experimentell förberedelse
- Förbered följande reagenser: Dulbeccos fosfatbuffrad saltlösning (PBS); Triton x-100; 0,2% PBST (PBS + 0,2% Triton x-100); 32% PARAFORMALDEHYD (PFA), utspädd till 4% före användning; silikon elastomer bas och härdare; AntiFade monteringsmedium (t.ex., förlänga guld); och Nagel polska.
- Förbered följande utrustning: dissektion Mikroskop, två skarpa pincett och en sax för lokalt, ett antal pins för lokalt, en petriskål för att göra dissektion skålen, objektglas och coverslips, confocal Mikroskop, och en dator med Fiji ImageJ programvara installerad.
2. larver samling
- Mate UAS-Sox102F-RNAi flugor med UAS-GFP, ppk-GAL4 eller W1118 vildtyp flugor, respektive. Kultur flugor i standardvillkor vid 25 ° C.
- I ~ 5-6 dagar, samla tredje instar larver av UAS-Sox102F-RNAi / ppk-GAL4, UAS-GFP eller UAS-GFP och ppk-GAL4 / + kontroll försiktigt med pincett för dissektion.
3. dissektion av larver
Obs: Alla procedurer i det här avsnittet drivs under ett lokalt Mikroskop. Förstoringen är upp till utredarna. Försök att justera till vyn optimalt sikte. ~ 4-6 X förstoring rekommenderas.
- Placera en larv på en dissektion maträtt gjord av silikonelastomer bas och en vävnadskultur petriskål.
- Fästa larv mun kroken för att tillåta ryggsidan att möta, och sedan fästa svansen på larv. Placera ryggsidan i mitten så mycket som möjligt att exponera mittlinjen, som kommer att öppna upp markören.
- Tillsätt 200 µL av PBS att larven att behålla kroppen fukt.
- Gör ett snitt med en sax längs den dorsala mittlinjen mellan de två tracheas, från stjärtfenan till rostralt. Gör ett litet snitt vid varje av de fyra hörnen av larvaen kroppen.
- Placera en PIN-kod vid varje av de fyra hörnen av kroppen så att kroppen ligger plant.
- Fixa larv kroppen väggen i 4% PFA för 25 min i rumstemperatur.
- Tvätta i PBST för 5 min. Upprepa två gånger.
- Ta bort stiften från vävnaden. Sedan överföra vävnaden på ett objektglas, täck med antifade monteringsmedium och montera med ett täckglas. Lufttorka för 1 h och försegla kanterna med nagel polska.
4. imaging bearbetning
Obs: Bilder är tagna med en inverterad confocal Mikroskop system. Användaren kan fotografera provet med ett 20 X-objektiv (rekommenderas).
- Fånga Z-serie bilder. Öppna dialogrutan ”fånga Z-serie” i programvaran confocal mikroskopet. Bestämma området för att fånga Z serie bilder.
- Klicka på knappen ”upptill och nedtill”. Fastställa övre och nedre position och mata in värdena till ”botten”: och ”Top”: lådor. Ange ”steg” ”fånga Z-serie” i dialogrutan som 0,5 µm. Klicka på knappen ”Kör nu” att förvärva Z-serie bilder.
- Spara de erhållna bilderna som *.tiff eller *.nd2 filer.
- Lagra bilder i en mörk hållare vid 4 ° C efter imaging.
5. dendrite utvärdering
Obs: GFP protein var co-i ökad utsträckning i UAS-GFP och ppk-GAL4 flugor i da nervceller för god Jordbrukarsed fluorescens imaging analys. Längd, förgrening och struktur av da nervceller i tredje instar larverna kvantifierades. Analysparametrar inkluderar längd av dendriter (µm), yta (µm2), totalt antal grenar och förgrenade struktur (%). Figur 1 visar analysparametrar i detalj.
-
Längd av dendriter
Obs: Längden av dendriter är summan av alla dendriter märkt tracer plugin.- Setup och köra Fiji ImageJ (https://fiji.sc/)20 programvara. Sedan dela bilder i separata kanaler, om det finns flera kanaler av bilder.
Obs: Bilden i detta protokoll har bara en kanal av GFP. - Kör ”bild | Stackar | Z-projektet att få en Z projektion; ett nytt fönster visas med namnet 'Z-projektion.' Klicka på ”max intensitet” för projektionstyp och organisera siffror mellan start skiva och stop segment beroende på individuella preferenser. Klicka på ”OK”. En Z-projektion bild visas presentera dendrite projektionen tydligt.
- Spåra neuriter.
- Välj ”Plugins | Segmentering | Enkla neuriter Tracer ”i fönstret att spåra dendriter. Hitta de neuron soma, och klicka sedan på en punkt på en dendrite från cellkroppen och en annan punkt på spetsen av detta dendrite.
Obs: Programmet kommer att ansluta två punkter med en blå linje. - Tryck på ”Y” i fönstret plug-in om sökvägen är tydligt; dendrite sökvägen spåras fram till ändpunkterna på den markerade banan i de synliga bilderna. Klicka ”fullständig sökväg” på samma plugin fönster; segmentet är klar (figur 2).
Obs: Vissa dendriter slutade vattenhastigheten utgångspunkterna, där vägen var indelad i mindre segment. Segmenten har kombinerats för att ge en fullständig sökväg för spårämne.
- Välj ”Plugins | Segmentering | Enkla neuriter Tracer ”i fönstret att spåra dendriter. Hitta de neuron soma, och klicka sedan på en punkt på en dendrite från cellkroppen och en annan punkt på spetsen av detta dendrite.
- Efter en sökväg är klar, gå tillbaka till en ny punkt där grenarna är. Den nya sökvägen kan byggas på; rutan ”alla sökvägar” fönster kommer att Visa längd värdena för alla banor (figur 3). Spara filen spårning och fortsätta med oavslutade spår som visas i figur 2.
- Exportera dendrite längd data genom att klicka på ”, fil | ”Exportera som *.cvs” i fönstret 'Plugin'. Sedan sammanfatta alla sökvägen längderna och exportera data till en data analys/kalkylprogram. (Figur 3).
- Setup och köra Fiji ImageJ (https://fiji.sc/)20 programvara. Sedan dela bilder i separata kanaler, om det finns flera kanaler av bilder.
-
Yta på da nervceller
- Välj verktyget Freehand ritning i fönstret 'Fiji ImageJ'. Spåra sökvägen, och Anslut sedan ändpunkterna. Från 'Analysera' menyn, Välj ”Set mätningar | Området ”. Klicka på ”åtgärd” från menyn 'Analysera'. Resultatet visas i en ny ruta med värdet för det markerade området (figur 4). Kopiera den till data analys programvara.
-
Totala antalet av grenar och förgrening struktur da nervceller
- Beräkna det totala antalet grenar genom att öppna ”analys” och sedan ”Render | Analysera Skeletonized banor ”i fönstret plugin för spårning (figur 5).
Obs: Strukturen i bersån är summan av halterna av grenar. Sökvägen definierades mellan cellkroppen och dendrite tips, och en sökväg kan omfatta flera grenar, såsom de primära arbors är dendriter från neuron cellkroppen. De sekundära arbors är grenar från primärt och så vidare med de tertiary, Kvartär och fem arbors. Strukturera av dendrite förgrening separeras beroende på halterna av grenar. Exempelvis är de primära % antalet grenar delat med totalt antal förgreningar, och så vidare.
- Beräkna det totala antalet grenar genom att öppna ”analys” och sedan ”Render | Analysera Skeletonized banor ”i fönstret plugin för spårning (figur 5).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Dendriter da nervceller var märkt av co-överuttryck GFP (UAS-GFP; ppk-GAL4) i da neurala soma och dendritiska arbors för god Jordbrukarsed fluorescens imaging analys. Morfologi av da neuron dendriter fotograferades av en inverterad confocal Mikroskop (figur 2).
Dendriter da nervceller spårades med Fiji ImageJ programvara. Filen används för att uppskatta längden dendrite (figur 3). Tystande av Sox102F i da nervceller (N = 21) (UAS-Sox102F-RNAi/ppk-GAL4; UAS-GFP) ledde till en betydande minskning av antalet dendriter och en kortare grenlängd med en enklare struktur jämfört med kontroller (N = 20) (UAS-GFP; ppk-GAL4 / +) i tredje instar larven (figur 6). Specifikt, flugor där Sox102F tystnade uppvisade en minskning av genomsnittlig dendrite längd 127 µm jämfört med 249 µm i kontrollerna (p = 0,02), och hade en mindre genomsnittliga arbor yta 552,476 µm2 jämfört med 847,571 µm2 i kontrollerna (p = 0,04). Dessutom, Tystande av Sox102F resulterade i ett mindre antal grenar och en enklare förgrenade struktur av bersåer med totala grenar av 17 (17,3 ± 6,7), jämfört med 28 (28,4 ± 9,5) i kontrollerna (p = 0,04). Student t-test utfördes för att jämföra skillnaderna mellan grupperna, och signifikansnivån sattes till 0,05.
Figur 1 : Scheman över dendrite analysparametrar Drosophila da neuron. Panelen (A) är den ursprungliga bilden av en da-neuron. (B) Dendrite längd var genomsnittet av alla dendrite längder i alla uppmätta da nervceller. (C) ytan av da neuron dendrite definierades manuellt av verktyget ImageJ freehand. (D) detta schema visar hur man räknar det totala antalet filialer och analysera förgrenade struktur av en da-neuron. 1: primära arbor. 2: sekundära arbor. 3: Tertiary arbor. 4: Kvartära arbor. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2 : Representativa spårning av dendriter en da neuron. En da neuron fotograferades med en confocal fluorescens Mikroskop system. (A) den första spårningen skapades med en startpunkt från cellkroppen och slutpunkten för en dendrite med hjälp av plugin/segmentering. Den blå linjen (vit pil) representerar sökvägen definieras. Efter att klicka på ”Ja” (röd pil), ändrar linjen färg från blått till rött. (B) Klicka på ”Avsluta sökvägen” det visas lila (C). (A-C) Visar processen för att spåra en enskild dendrite; (D) den kompletta spårade bilden. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3 : Mätning av spåras vägar. Bilden till vänster visar hur man mäter spåra stigar efter att ha kört den ”analys | Mäta banor ”. Exportera sökvägen längdvärden till en kalkylbladsfil och beräkna summan av längden. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4 : Ett exempel för att definiera den dendrite yta manuellt. En definierad bild erhölls genom verktyget frihand i ImageJ fönster-menyn (visas med röd pil). Ange mått genom att välja område. Kör funktionen ”åtgärd” för att få det område som visas i den röda rutan. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 5 : Ett exempel på analys av förgrening. Kör ”Analysis_Render | Analysera Skeletonized banor ”i fönstret” segmentering ”plugin. De återgivna vägar och deras antal erhölls genom att välja ”återge alla sökvägar | Erhåll Sammanfattning ”. Sökvägen definieras mellan cellkroppen och dendrite tips, och en sökväg kan innehålla flera grenar; till exempel var de primära arbors dendriter från neuron cell kroppen; de sekundära arbors var grenar från primärt och så vidare med de tertiary, Kvartär och fem arbors. Strukturera av dendrite förgrening skildes beroende på halterna av grenar. Exempelvis var primära % antalet filialer delat med totalt antal förgreningar, och så vidare. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 6 : Representativa resultat av Tystande av Sox102F i da nervceller. Tystande av Sox102F i da nervceller (UAS-Sox102F-RNAi/UAS-GFP; ppk-GAL4) ledde till betydligt minskad dendrite längd och kortare förgrening med enklare struktur i tredje instar larven jämfört med kontroller. Skillnaderna mellan Sox102F-RNAi flugor (UAS-Sox102F-RNAi/UAS-GFP; ppk-GAL4, N = 21) och kontroll (UAS-GFP; ppk-GAL4 / +, N = 20) flugor var på (A) dendrite längd (B) arbor yta (C) antalet filialer, och (D, E ) förgrenade struktur av da nervceller. Student T-test var uppträtt för statistisk analys. * indikerar statistisk signifikans (p < 0,05). Felstaplar är medelvärde ± standardavvikelse. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Dendriter som innerverar epidermis är de ingående regionerna av nervceller och deras morfologier bestämmer hur information tas emot och bearbetas av enskilda nervceller. Utveckling dendrite morfologi återspeglas genen modulering av dendrite organisation. Drosophila larver da neuron i det perifera nervsystemet är en viktig modell för att studera dendrite utveckling på grund av: 1) den funktionella likheten med däggdjur11,12. (2) fyra klasskillnader baserat på dendrite struktur11,12. och 3) de genetiska faktorer som reglerar morfogenes. I detta protokoll presenterar vi arbetsflödet från larver förberedelse till bildanalys av Drosophila da nervceller. Metoderna beskriver de fyra viktiga parametrarna för att analysera dendriter i da nervceller i detalj, vilket är längden på dendriter, yta, det totala antalet filialer och förgrenade struktur. Det kritiska steget var att ta bort så många vävnader från larv kroppen väggen som möjligt för att helt avslöja da nervceller för avbildning och analyser. Det kan finnas vissa korta grenar avskurna på grund av det begränsade antalet Z-projektion bilder. Denna metod är relativ mätning av dendriter längd jämfört med kontroller, tas ett stort antal bilder för varje grupp av da nervceller att öka täckningen områdena Z-projektion bilder.
Drosophila klass IV da nervceller har varit i fokus för forskning kring dendrite arbor morfologi15,21,22,23. Morfogenes av dendritiska arbor utveckling kan störas av förlust eller vinst av geners funktion, vilket visar att da neuron utveckling är känsliga för genetiska förändringar24. För genetiska studier är det viktigt att analysera morfologi noggrant för att förstå dess inverkan på da nervceller. Klass IV da neuroner är komplext men fortfarande tillgängliga för högkvalitativa imaging eftersom de ligger precis under den semi-transparent kroppen väggen och gren, nästan helt i två dimensionell rymd. Den dynamiska GFP fluorescensen märkt da nervceller (ppk-GAL4; UAS-GFP) ger en lätt visualiseras modell för att undersöka neuronal utveckling. Riktning mot morfologi förändring varierar, bersåerna kan bli overbranched eller förenklas. Här, vi kategoriserat dessa morfologiska förändringar av kvantitativa parametrar, t.ex. dendrite längd, yta, det totala antalet filialer och da nervceller förgrenade struktur. Resultaten återspeglar svaret i Sox102F uttryck reglera neuronal utveckling, som visas i denna studie.
Våra protokoll användes för att visa de morfologiska förändringarna av klass IV da nervceller i flugor i som den Drosophila ortholog av SOX5, Sox102F, tystnade, som visar en viktig funktionell roll av SOX5 dendrite utveckling och morfogenes. Wnt proteinerna är en familj av utsöndrade glykoproteiner som har varit inblandade i regleringen dendrite morphogeneis. Wnt2 och Wnt7b främjar da och neuronala komplexitet9,10. I Wnt kanoniska väg följs denna aktivering av aktivering av GSK3β, en serin-treonin-Kinas, som i sin tur aktiverar β-catenin medierad transkription10,25. Vi har tidigare funnit att Tystande av SOX5 i mänskliga SH-SY5Y neuroblastomceller resulterade i en betydande repression av Wnt signalering verksamhet och reglerade uttrycket av en rad Wnt gener inklusive ett överuttryck av GSK3β 15. Ökat uttryck av GSK3β har associerats med de kännetecknande egenskaperna hos AD, inklusive minnesförlust, β-amyloid plågor och onormal hyperphosphorylation tau26. Tystande av SOX5 ökade GSK3β uttryck, som kan tyda på en funktionell koppling mellan SOX5 och GSK3β.
Klass IV da nervceller har alla sensoriska neuroner mest komplexa dendriter. I detta protokoll, har vi utvecklat en metod för att analysera komplexiteten i bersån och grenar till abstrakt klass IV da nervceller i Drosophila baserat på konventionellt tillgängliga plugins och programvara egenskaper. Bilder som togs från en confocal Mikroskop analyserades och plugin segmentering av enkla neurite spårämne som ett perfekt verktyg för att spåra dendrite grenar27,28. Dessutom tillåter denna kvantifiering metod för detaljerad analys av dendrite komplexitet genom att presentera nyckeltalen av olika nivåer av förgrening från soma till de mer avlägsna dendrite. Dessutom kan denna metod användas för att analysera andra klasser av da nervceller. Exempelvis klass I da nervceller förlänga sekundära dendriter på ena sidan av kroppen väggen; klass II har bifurcating grenar symmetriskt; och klass III da nervceller har mer komplexitet av förgrening och spikar. Sammanfattningsvis, har vi gett ett protokoll för imaging och analys av klass IV da nervceller för neuronal dendrite analyser i Drosophila.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har något att avslöja.
Acknowledgments
Vi vill tacka William A. Eimer för imaging tekniskt bistånd. Detta arbete stöddes av bota Alzheimers fonden [R.E.T], National Institute of Health [R01AG014713 och R01MH60009 till R.E.T; R03AR063271 och R15EB019704 att A.L.], och National Science Foundation [NSF1455613 att A.L.].
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Phosphate buffered saline(PBS) | Gibco Life Sciences | 10010-023 | |
| TritonX-100 | Fisher Scientific | 9002-93-1 | |
| Paraformaldehyde(PFA) | Electron Microscopy Sciences | 15714-S | |
| Sylgard 184 silicone elastomer base and curing agent | Dow Corning Corportation | 3097366-0516;3097358-1004 | |
| ProLong Gold Antifade Mountant | Thermo Fisher Scientific | P36931 | |
| Fingernail polish | CVS | 72180 | |
| Stereo microscope | Nikon | SMZ800 | |
| Confocal microscope | Nikon | Eclipse Ti-E | |
| Petri dish | Falcon | 353001 | |
| Forceps | Dumont | 11255-20 | |
| Scissors | Roboz Surgical Instrument Co | RS-5611 | |
| Insect Pins | Roboz Surgical Instrument Co | RS-6082-25 | |
| Microscope slides and cover slips | Fisher Scientific | 15-188-52 |
References
- Wassle, H., Boycott, B. B.
- MacNeil, M. A., Masland, R. H. Extreme diversity among amacrine cells: implications for function. Neuron. 20 (5), 971-982 (1998).
- Losonczy, A., Makara, J. K., Magee, J. C. Compartmentalized dendritic plasticity and input feature storage in neurons. Nature. 452 (7186), 436-441 (2008).
- Spruston, N. Pyramidal neurons: dendritic structure and synaptic integration. Nat Rev Neurosci. 9 (3), 206-221 (2008).
- Jaworski, J., et al. Dynamic microtubules regulate dendritic spine morphology and synaptic plasticity. Neuron. 61 (1), 85-100 (2009).
- Kweon, J. H., Kim, S., Lee, S. B. The cellular basis of dendrite pathology in neurodegenerative diseases. BMB Rep. 50 (1), 5-11 (2016).
- Baloyannis, S. J.
- Masliah, E., Terry, R. D., Alford, M., DeTeresa, R., Hansen, L. A. Cortical and subcortical patterns of synaptophysinlike immunoreactivity in Alzheimer's disease. Am J Pathol. 138 (1), 235-246 (1991).
- Wayman, G. A., et al. Activity-dependent dendritic arborization mediated by CaM-kinase I activation and enhanced CREB-dependent transcription of Wnt-2. Neuron. 50 (6), 897-909 (2006).
- Rosso, S. B., Sussman, D., Wynshaw-Boris, A., Salinas, P. C. Wnt signaling through Dishevelled, Rac and JNK regulates dendritic development. Nat Neurosci. 8 (1), 34-42 (2005).
- Grueber, W. B., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Different levels of the homeodomain protein cut regulate distinct dendrite branching patterns of Drosophila multidendritic neurons. Cell. 112 (6), 805-818 (2003).
- Sugimura, K., Satoh, D., Estes, P., Crews, S., Uemura, T. Development of morphological diversity of dendrites in Drosophila by the BTB-zinc finger protein abrupt. Neuron. 43 (6), 809-822 (2004).
- Jan, Y. N., Jan, L. Y. Branching out: mechanisms of dendritic arborization. Nat Rev Neurosci. 11 (5), 316-328 (2010).
- Sears, J. C., Broihier, H. T. FoxO regulates microtubule dynamics and polarity to promote dendrite branching in Drosophila sensory neurons. Dev Biol. 418 (1), 40-54 (2016).
- Li, A., et al. Silencing of the Drosophila ortholog of SOX5 leads to abnormal neuronal development and behavioral impairment. Hum Mol Genet. 26 (8), 1472-1482 (2017).
- Misra, M., et al. A Genome-Wide Screen for Dendritically Localized RNAs Identifies Genes Required for Dendrite Morphogenesis. G3 (Bethesda). 6 (8), 2397-2405 (2016).
- Emoto, K., et al. Control of dendritic branching and tiling by the Tricornered-kinase/Furry signaling pathway in Drosophila sensory neurons. Cell. 119 (2), 245-256 (2004).
- Olesnicky, E. C., et al. Extensive use of RNA-binding proteins in Drosophila sensory neuron dendrite morphogenesis. G3 (Bethesda). 4 (2), 297-306 (2014).
- Parrish, J. Z., Xu, P., Kim, C. C., Jan, L. Y., Jan, Y. N. The microRNA bantam functions in epithelial cells to regulate scaling growth of dendrite arbors in drosophila sensory neurons. Neuron. 63 (6), 788-802 (2009).
- Schindelin, J., et al. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
- Corty, M. M., Matthews, B. J., Grueber, W. B. Molecules and mechanisms of dendrite development in Drosophila. Development. 136 (7), 1049-1061 (2009).
- Jinushi-Nakao, S., et al. Knot/Collier and cut control different aspects of dendrite cytoskeleton and synergize to define final arbor shape. Neuron. 56 (6), 963-978 (2007).
- Crozatier, M., Vincent, A. Control of multidendritic neuron differentiation in Drosophila: the role of Collier. Dev Biol. 315 (1), 232-242 (2008).
- Copf, T. Importance of gene dosage in controlling dendritic arbor formation during development. Eur J Neurosci. 42 (6), 2234-2249 (2015).
- Rosso, S. B., Inestrosa, N. C. WNT signaling in neuronal maturation and synaptogenesis. Front Cell Neurosci. 7, 103 (2013).
- Engel, T., Hernandez, F., Avila, J., Lucas, J. J. Full reversal of Alzheimer's disease-like phenotype in a mouse model with conditional overexpression of glycogen synthase kinase-3. J Neurosci. 26 (19), 5083-5090 (2006).
- Longair, M. H., Baker, D. A., Armstrong, J. D. Simple Neurite Tracer: open source software for reconstruction, visualization and analysis of neuronal processes. Bioinformatics. 27 (17), 2453-2454 (2011).
- Pool, M., Thiemann, J., Bar-Or, A., Fournier, A. E. NeuriteTracer: a novel ImageJ plugin for automated quantification of neurite outgrowth. J Neurosci Methods. 168 (1), 134-139 (2008).
