وترد أداة وأساليب لإعداد مجلدات الحجم نانولتر عينة مجهر إلكتروني. أية خطوات ورقة النشاف مطلوبة، وبالتالي تجنب العواقب الضارة وهذا يمكن أن يكون للبروتينات، إلى حد كبير الحد من فقدان عينة وتمكين تحليل خلية مفردة ليساتي البروتيوميات البصرية.
نظراً للتقدم التكنولوجي الأخيرة، الميكروسكوب الإلكتروني cryo (cryo-م) سرعان ما أصبح أسلوب قياسي للتحليل الهيكلي للبروتين المجمعات للقرار الذري. ومع ذلك، تظل البروتين العزلة تقنيات وأساليب إعداد نموذج لطب الطوارئ اختناق. عدد صغير نسبيا (100,000 إلى بضعة ملايين) من جزيئات البروتين الفردية بحاجة إلى تصويرها لتحليل البروتينات ذات الدقة العالية بالجسيمات واحد نهج م، مما يجعل عينة المنمنمة التعامل مع التقنيات والمبادئ موائع جزيئية ممكناً.
ويرد المنمنمة، ورقة النشاف خالية من م شبكة إعداد طريقة لتكييف قبل عينة وفتيلة شبكة م ومرحلة ما بعد المعالجة الذي يستهلك فقط نانولتر-حجم العينة. يستخدم الأسلوب الاستغناء عن نظام بدقة نانولتر الفرعية لامتصاص السائل التحكم وفتيلة الشبكة م، ومنصة للتحكم في درجة الحرارة الشبكة وبالتالي تحديد الرطوبة النسبية فوق الشبكة م، واختيار–يغرق-إليه للعينة التزجيج. للبرد-م، يتم وضع شبكة م في مرحلة التحكم في درجة الحرارة ويستنشق العينة إلى شعري. تلميح الشعرية هو المتمركزة بالقرب من سطح الشبكة، يتم تحميل الشبكة مع العينة وفائض يستنشق إعادة إلى ميكروكابيلاري. وفي وقت لاحق، استقر الفيلم عينة وضعفت قليلاً بتبخر المياه التي تسيطر عليها وينظم الإزاحة في درجة حرارة النظام الأساسي بالنسبة نقطة الندى. في نقطة معينة يتم تشغيل إليه اختيار ويغرق، سرعة نقل الشبكة م معبي في الإيثان السائل التزجيج عينة. وبدلاً من ذلك، تتوفر طرق تكييف نموذج إعداد مجلدات الحجم نانولتر عينة لوصمة سلبية (NS) م.
المنهجيات إلى حد كبير الحد من استهلاك عينة وتجنب النهج يمكن أن تكون ضارة للبروتينات، مثل النشاف ورق الترشيح المستخدمة في الطرق التقليدية. وعلاوة على ذلك، يسمح كمية ضئيلة من العينة المطلوبة استراتيجيات تجريبية الرواية، مثل عينة سريعة التكييف، مع تحلل الخلايا المفردة ل “البصرية البروتيوميات”، أو “ضياع” إعداد العينة الإجمالية للتحليل الكمي نماذج معقدة.
الأجهزة والبرامج للتحليل الهيكلي للبروتين المجمعات مجهر إلكتروني (TEM) تقدما هائلا خلال السنوات الأخيرة. التحسينات التي أدخلت على مهد الطريق إلى “قرار ثورة”1،2 ، وتغيرت جذريا الهيكلي للبحث. وبدأت الثورة مع ظهور البرد-إلكترون مجهرية (cryo-م)3،4، مما يتيح إعداد العينات البيولوجية تحت قريبة من الظروف الفسيولوجية في حين تناقص الحساسية الإشعاعية ومنع تبخر العينة في فراغ عالية من المجهر الإلكتروني انتقال5. في السنوات التالية، وزيادة التقدم التكنولوجي المتزايد تدريجيا أن القرار قابل للتحقيق. وكان من بين هذه الابتكارات تطبيق المدافع الميدانية-الانبعاثات6،7، وفي الآونة الأخيرة، تحسنت خوارزميات تحليل البيانات، مثل الحد الأقصى لاحتمال أساليب8،9. إلكترون مباشرة كاشف كاميرات10،11،،من1213، تصوير فيلم-الوضع ومصاحبة البرمجيات التطورات14،15، 16 , قدم 17، اختراق النهائية المطلوبة لتحقيق القرار الذري للعينات البيولوجية بتحليل الجسيمات واحد (لأنظر استعراض تشنغ، جريجوريف, et al. 18)-أهمية cryo-م اعترف مؤخرا بمنح جائزة نوبل للكيمياء لثلاثة من الرواد.
الصورة في عينة بيولوجية من تيم، الطريقة المستخدمة في تحميل الشبكة م مع العينة (يشار إليها فيما بعد “إعداد الشبكة”) يجب أن تضمن توفير طبقة العينة الناتجة (ط) رقيقة ما يكفي (< 100 nm) تجنب الضوضاء واسعة بغير مرن أو ضرب المتناثرة الإلكترونات، (ثانيا) يقاوم الفراغ عالية من المجهر الإلكتروني، ويحمي (الثالث) الجزيئات الحيوية من أضرار الإشعاع. وتستخدم اثنين من الأساليب الرئيسية للوفاء بهذه التحفيزية: وصمة سلبية(NS)19،20 الإجراءات (الشكل 1أ) الجسميات العينة لفيلم الكربون رقيقة، وتضمين الجزيئات الحيوية في المعادن الثقيلة غير متبلور، ثم السماح للجمعية لتجف في الهواء. هذا بسيط وسريع، والشبكات م تحميل (يشار إليها فيما بعد “نموذج الشبكات”) سهلة لتخزين ويمكن أن تبقى لفترات طويلة من الزمن (عادة السنوات). في تيم، الأعمال التحضيرية معرض عالية التباين بسبب NS وتتسامح مع الجرعات إلكترون من البرد-الأعمال التحضيرية، ولكن القرار يقتصر على حوالي 20 Å Cryo-م إجراءات تدعم (الشكل 1ب) توظيف الكربون المخرمة. طبقة رقيقة من الحل عينة وامتدت عبر الثقوب والشبكة م وسقطت في كريوجين، الإيثان السائل عادة، لتهدئة سرعة أنها أقل-150 درجة مئوية. والنتيجة غير متبلور، الشركة إنتاج، 50 إلى 100 نانومتر سميكة السينمائي للحل في الثقوب الدعم. هذا الفيلم رقيقة، غير متبلور يقاوم الفراغ عالية في المجهر الإلكتروني، وفي الحالة المثالية، يحافظ على الهياكل البيولوجية في حالتها الأصلية. الإجراء الذي يسمح للعينات البيولوجية تصويرها في الاستبانة. ومع ذلك، الشبكة عينة يجب الاحتفاظ في درجات الحرارة أدناه-150 درجة مئوية في جميع الأوقات لتجنب ديفيتريفيكيشن. فإنه يمكن تصويرها باستخدام جرعات الإلكترون عالية نسبيا بسبب درجة الحرارة المنخفضة، ولكن على النقيض ومع ذلك نسبة الإشارة إلى الضوضاء منخفضة. ولذلك، تستخدم تقنيات حساب المتوسط لزيادة التباين، وشريطة أن يتم تصويرها العينة من زوايا مختلفة، ويمكن إعادة بنائها مخطط ثلاثي الأبعاد (3D) عالية الدقة. الأكثر شيوعاً وهي طريقة ناجحة للغاية للتعمير 3D حتى الآن النهج الجسيمات واحد. لاستعراض أجرى مؤخرا، راجع تشنغ في al.18.
وصمة سلبية تيم (م-م) مهم لفحص ومراقبة الجودة، وعند الحاجة إلى عالي التباين، أو عندما تتوفر كميات محدودة فقط من عينة (الامتزاز بالكربون الفيلم يركز عموما العينة). واحد الجسيمات cryo-م هو الأسلوب معيار الذهب إذا كانت تستهدف إعادة البناء ثلاثي الأبعاد عالية الدقة لهيكل البروتين ل.
الشكل 1: إعداد الشبكة “مبادئ تيم” والمقارنة بين نهج موائع جزيئية (لوحة ج، د) والكلاسيكي (لوحة أ، ب). A) م NS الكلاسيكية إعداد الشبكة: هي بيبيتيد عن 3 ميليلتر من العينة باليد على شبكة م مغطاة بفيلم الكربون مستمر (يشار إليها فيما بعد شبكة NS-م) (ط). بعد حضانة لما يقارب 10 ق، ورق الترشيح يستخدم للطخة بعيداً من السائل الزائد من الجانب (ثانيا)، ترك في الممتزة الجزيئات الحيوية في فيلم مياه رقيقة. وفي وقت لاحق، هو المحتضنة البروتين في الحل الملح المعادن الثقيلة، مثلخلات اليورانيل 2%، مقابل 20 s (ثالثا)، ومرة أخرى السائل يتم إزالة بواسطة النشاف من الجانب باستخدام ورق الترشيح (رابعا). وأخيراً، يتم ترك م-الشبكة لتجف في الهواء. ب) م البرد الكلاسيكية إعداد الشبكة: هي بيبيتيد عن 3 ميليلتر من العينة يد على فيلم الكربون المخرمة. تشكيل فيلم عينة رقيقة، تتم إزالة السائل الفائض من الورق النشاف الوجه-على من أحد أو كلا الجانبين (ثانيا). وأخيراً، سقطت الشبكة سرعة الإيثان السائل التزجيج (ثالثا). ج) NS-م إعداد الشبكة باستخدام الإعداد كريووريتير: nL 5 ألف وحدة التخزين ويستنشق من المخزون العينة باستخدام ميكروكابيلاري (ط). لتكييف عينة، هو مغمورة نصيحة ميكروكابيلاري في الحل تكييف، مثلاً، خلات الأمونيوم 2%. ويتم تبادل الأيونات والجزيئات الصغيرة التي نشرها (ثانيا). علما بأن أبعاد ميكروكابيلاري ضمان أن العملية برمتها نشر مدفوعة. البروتينات كثير ثوابت نشر أقل من أيونات الملح وهي لم تفقد إلى حد كبير24. وأخيراً، العينة المتوافرة على الشبكة ويسمح الجاف (ثالثا). د) مبادئ cryo-م إعداد الشبكة باستخدام الأسلوب القائم على كريووريتير: الشبكة EM مغطاة بفيلم المخرمة الكربون هو وضعها على سطح منصة التحكم في درجة الحرارة وعقدت بملاقط. يتم التحكم في درجة الحرارة من المنصة في إزاحة من درجة حرارة نقطة الندى لبيئة الشبكة. يتم نقل الشبكة بالنسبة ميكروكابيلاري التي تحتوي على العينة وخفضت ميكروكابيلاري حتى يتم عدد قليل ميكرومتر أعلاه الشبكة. وفي وقت لاحق، الاستغناء نانوليتيرس عدد قليل من عينة منه بينما يتم نقل المرحلة في نمط دوامة؛ السائل الزائد إعادة يستنشق (ط). بعد م الشبكة فتيلة، يتم سحب ميكروكابيلاري وتظل الشبكة على منصة التحكم درجة الحرارة (المشار إليه فيما بعد مرحلة نقطة الندى (DP)) لفترة قصيرة للسماح لكمية التي تسيطر عليها من العينة تتبخر. ليغرق تجميد، الشبكة سرعة انسحبت من مرحلة استخدام الملقط (ثانيا)، وانقلبت 90 ° إلى الموضع العمودي، وسقطت في حمام كريوجين (iii) (يشار إليها فيما بعد إليه ‘بيك ويغرق’). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
ولسوء الحظ، أساليب إعداد الشبكة يستخدم NS والبرد-م لم تتحسن إلى حد كبير نظراً لأنها اخترعت. العيوب الحالية هي استهلاك عينة عالية (حوالي 3 ميليلتر من البروتين 1 ملغ/مل) وخسرت مبلغ كبير (> 99%) من عينة (الشكل 1أ، ب). وعلاوة على ذلك، الطريقة الكلاسيكية التي استخدمت لإعداد شبكات للبرد-م إجراءات قاسية للبروتينات: أولاً، أنها تنطوي على واسعة الوجه على ورق النشاف خطوة (الشكل 1ب، والثاني)، وثانيا، يتعرض البروتين إلى واجهة الهواء والماء قدرا كبيرا من الوقت21. هنا، يرد أسلوب بديل لنموذج قبل التكييف، نموذج الشبكة إعداد وتجهيز (شبكة التجفيف أو التزجيج) NS-م (الشكل 1ج) أو البرد-م (الشكل 1د). يستخدم برنامج الإعداد بني داخلية، تسمى “كريووريتير”، عينة المنمنمة التعامل مع التكنولوجيا وموائع جزيئية مبادئ نضح، الشرط والاستغناء عن عينة، تجنب الورق النشاف تماما، وتوفير طرق بديلة لعينات رقيقة م البرد. أنها إلى حد كبير يقلل من الاستهلاك عينة ويحسن عنصر تحكم المستخدم على إعداد العينة ككل. وعلاوة على ذلك، يسمح الأسلوب رواية تطبيقات تجريبية؛ مثل إعداد المكونات البيولوجية معزولة من خلايا فردية في إطار نهج يسمى “خلية مفردة البروتيوميات البصرية”22،،من2324،25.
وترد أداة ‘كريووريتير’ والبروتوكولات المطلوبة لإعداد شبكات عينة م NS والبرد من أحجام العينة الإجمالية nL الحجم وتجنب تماما الخطوة النشاف الورق الكلاسيكية. يتم الجمع بين مبادئ موائع جزيئية ونظام ذبابة في كريووريتير لجعل هذا ممكناً.
تبين تجربتنا أنه عندما تستخدم أساليب المنمنمة التي عرضت في هذه المخطوطة، مساحة المعلمة لإعداد الشبكة م-أكبر من الأساليب الكلاسيكية، وتحت رقابة المستخدم. الأهم من ذلك، زيادة إمكانية تكرار نتائج تحقيقها يجعل من الممكن للفحص المسبق مع نظام المخزن المؤقت عينة، تستكمل مع بروتين اختبار متاحة بسهولة، لتحديد المعلمات الأمثل قبل إجراء التجربة الفعلية. وهذا يبقى استهلاك العينة من الفائدة للمطلق الحد الأدنى وينصح بشدة. الخطوات الأساسية لإعداد الشبكة م NS والبرد على حد سواء،: (ط) فتيلة نظام مضخة؛ للاستغناء عن حجم نانولتر الفرعية، يجب أن يكون ديجاسيد نظام السائل (الماء) وفقاعة مجاناً. (ثانيا) دقة السيطرة توهج التفريغ أو البلازما التنظيف خطوة؛ خصائص الشبكة م السطحية حاسمة بالنسبة للنتائج استنساخه. (الثالث) تكييف نموذج؛ الوقت اللازم لتكييف، مثلاً، مع NS، يعتمد على نوع المخزن المؤقت، ومحتوى الملح وتركيز (الشكل 3)، وكذلك في هندسة فوهة ميكروكابيلاري24. (رابعا) معدلات التبخر NS م التحضير لكمية م؛ أثر القهوة-خاتم يمكن حظر التحليل الكمي للأعمال التحضيرية NS-م، ويجب قمعها بمعدلات التبخر بطيئة يسيطر DP-المرحلة.
يمكن دمج الجوانب المختلفة لأساليب إعداد الشبكة المعروضة بحرية مما يتيح وضع بروتوكولات متعددة لعينات محددة. ستكون الأمثلة النموذجية على إزالة مادة تمنع م عالية الاستبانة، مثلاً، الجلسرين، بخطوة تكييف قبل إعداد الشبكة للبرد-م؛ إدخال جزيئات الوسيط، مثل يغاندس، بتكييف قبل أن يتم إعداد الشبكات؛ أو النظر في خلية مفردة قبل NS أو البرد-م (الشكل 6).
استخدام ميكروفلويديكس وكميات العينة الحد الأدنى في أساليب عرض يزيل تماما الحاجة إلى اتخاذ خطوات ورقة النشاف. هذا ميزة كبيرة، نظراً لأن الورق النشاف معاملة قاسية للبروتينات واحتمال تلويث العينة مع أيونات غير المرغوب فيها وطبيعتها مما يؤدي إلى فقدان عينة واسعة النطاق. من ناحية أخرى، لا يتم تجنب الآثار المحتملة الناجمة عن واجهة الهواء والماء من الفيلم عينة رقيقة شكلت عندما يتم إعداد العينات cryo-م بطريقة كلاسيكية عندما يستخدم في كريووريتير. يمكن إعداد شبكات مناسبة للبرد-م مع وقت انتظار أقل من 0.2 s بين نموذج التطبيق والتزجيج (البيانات لا تظهر). ومع ذلك، البروتينات السفر بضعة أعشار نانومتر في بضعة نانو ثانية قبل نشرها، لا يزال هناك ما يكفي من الوقت لكي تتصادم مع واجهة الهواء والماء من العينة سميكة nm 100 فيلم عدة مرات. بيد أن كمية البروتينات التي تتمسك بواجهة الهواء والماء قد خفض إلى حد كبير بهذه الثغرات في وقت قصير وقد منع تمسخ البروتين أو مقيدة باتجاه الجسيمات. آخر النهج الواعدة التي قد تحمي البروتينات الحساسة من واجهة الهواء والماء لتغطية الفيلم عينة من المواد سطحها منخفض الوزن الجزيئي. يمكن إدخال هذه المركبات سريعاً بخطوة تكييف في كريووريتير قبل إعداد الشبكة. ارتفاع نسبة السطح إلى الحجم من نظم موائع جزيئية قيد مزيد من كريووريتير، كما يحتمل أن يمكن أن تضيع بغير محدد الامتزاز على السطح ميكروكابيلاري عينة وتخل بالتحليل الكمي عن طريق العد الجسيمات. يتم معالجة المشكلة بطريقتين: أولاً، العينة عدم السفر مسافات طويلة داخل ميكروكابيلاري. في الواقع، يظل حجم العينة نانولتر في تلميح الشعرية طوال التجهيز. الثانية، وأيضا في تخفيض على السطح إلى نسبة الحجم باستخدام ميكروكابيلاريس بأقطار داخلية كبيرة نسبيا، مثلاً، 180 ميكرون. وثالثاً، يمكن تخميل أسطح ميكروكابيلاريس سهولة إذا لزم الأمر، مثلاً، بالتعامل معهم مع بوليليسيني المتاحة تجارياً املؤسسه الإيثانول (PLL-الربط).
تحليل الاستبانة من البروتينات بنهج واحد الجسيمات المستخدمة في طب الطوارئ يتطلب فقط 100,000 إلى عدد قليل من الصور مليون من جزيئات البروتين الفردية. وهذا يعني أن تقنيات موائع جزيئية يمكن أن توفر ما يكفي من البروتين المجمعات للتحقيق في الهيكلية. وقد وضعت طريقة المنمنمة المناعية-ترسيب لعزله بسرعة من مجمعات البروتين (حوالي 1 ساعة) من المبالغ خلية الحد الأدنى (حوالي 40,000 الخلايا) سابق28. الآن سوف يكون هذا الأسلوب ارتباطاً مباشرا بمرحلة إعداد عينة المنمنمة كريووريتير. والهدف النهائي هو وضع أنبوب موائع جزيئية متكاملة للبروتين فائقة السرعة والعزلة والبرد-م الشبكة إعداد يتطلب أقل من ساعتين في جميع. وعلاوة على ذلك، كما يتضح من الشكل 6، كمية دقيقة وحجم المواد اللازمة لإعداد نموذج وتكييف تقريبا ضياع وإجراءات إعداد الشبكة يتحقق باستخدام كريووريتير، تجعل من الممكن لدراسة البروتين مجمعات خلايا الفردية. معا، طريقة المنمنمة المناعية-ترسيب وكريووريتير إرساء الأساس لأسلوب البروتيوميات جديد يسمى “خلية مفردة البروتيوميات البصرية”، كما أثبتنا مؤخرا للحرارة-الصدمة تجارب24. ويجري حاليا اختبار خوارزميات تحليل البيانات الموجهة لتحليل الصور “البروتيوميات البصرية”.
The authors have nothing to disclose.
الكتاب أود أن أشكر حلقة عمل بيوزينتروم “أزل الجامعي” لدعمها، س. مولر أ للمناقشات الحاسمة والقراءة بعناية المخطوطة، ألف فيكتو-ليفيفر للمساعدة التقنية مع م، ريكاردو أدايكسو، وفرانك ليمان لبروتين غشائي اختبار عينات (كل من ج-سينا، بيوزينتروم، وجامعة بازل) وانجيل أ، أزل جامعة فخريا لمحادثاته الملهم. وقدمت عينات الاختبار يرجى ب. رينجلير، أ. م. ماهي، وت. Schwede (بيوزينتروم، جامعة بازل), P. ليمان (مختبر البيولوجيا الهيكلية والفيزياء الحيوية، لوزان) و R. دياز-أفالوس (نيويورك مركز علم الأحياء الهيكلية، الولايات المتحدة الأمريكية). كان يدعمها المشروع معهد علم السويسري (الشركة، مشروع P1401، أرجوفيا المشروع ميبيس) ومؤسسة العلوم الوطنية السويسرية (الجبهة الوطنية الصومالية، 200021_162521 المشروع).
Liquid handling | |||
Microcapillary tip | New Objective | FS360-100-30-N-20 | SilicaTips 30 µm tip ID, 100 µm ID , pk. 20 |
FS360-150-30-N-20 | SilicaTips 30 µm tip ID, 150 µm ID , pk. 20 | ||
Conductive sleeve | New Objective | CONGAS-1 | Conductive Elastomer for HV contact, 12" long |
Fused silica tubing | BGB-Analytik | TSP-150375 | TSP Standard FS Tubing, 150 µm ID, 363 µm OD, 5 meter |
PressFit Connector | BGB-Analytik | 2525LD | Deact. PressFit Connector 0.25 to 0.25 mm ID, pk. 25 |
Syringe 10 µl | BGB-Analytik | HA-80001 | Hamilton 1701 LT – Luer Tip (needle not included) |
Syringe pump controller | Cetoni | A3921000093 | neMESYS controller |
Syringe pump dosing unit | Cetoni | A3921000095 | neMESYS dosing unit |
Temperature control | |||
Dew point sensor | Meltec | UFT75-AT | Humidity/Temperature sensor, dew point calculation, USB and embedded DLL |
Temperature sensor | Sensorshop24.ch | LS7-PT1000-1.0-3L | Surface mountable temperature sensor Pt1000 |
Peltier controller | Cooltronic | TC2812 | PID temperature controller for activation of Peltier driven systems with constant voltage output |
Peltier element | Distrelec.ch | PE-127-14-15-S | 40×40 mm |
Water-cooling block | – | – | Water cooling block for 40×40 mm peltier element, copper base |
Water pump | Digitec.ch | 294877 | XSPC X20 750 Dual 5.25 Bay Reservoir Pump Black V4 |
Water heat exchanger block | – | – | Water heat exchanger block with 2 fans to cool down circulating water |
Small water coolers | PCHC.ch | 223050 | Alphacool MCX ram copper edition 2 pcs |
Small peltier elements | Distrelec.ch | PE-031-10-15-S | Laird 15×15 mm 3.4 A 8.1 W 3.8 V 74 °C, 2 pcs |
Mechanics | |||
Linear stage z-axis | Dyneos AG | M-404.2PD | High-load precision translational stage, 50 mm travel range, DC motor |
Stage controller | Dyneos AG | C-863 | Mercury Servo Controller |
Microscope xy-axis stage | Prior Scientific | H117EIL5 | Motorized stage for Zeiss Axiovert 200 inverted microscope |
Small permanent magnets | Supermagnete | S-05-08-N | Rod magnet Ø 5 mm, height 8.47 mm, neodymium, N45, nickel-plated, pk. 10 |
Small electromagnet | Schramme | EG1025A02/110 | Electromagnet 24V 220 N 150 N 2,5 W |
Controller electromagnet | Conrad.ch | MST-1630.001 7 | Electromagnet control PCB board |
Solenoid hub | Distrelec.ch | HD8286-R-F-24V100% | Kuhnke Solenid Hub 30 mm 16 N 2 N 16 W |
Mini tweezers | Electron Microscopy Sciences | 0302-M5S-PS | Dumont Type 5 mini, super thin tips |
Various optomechanical parts | Thorlabs | – | – |
Various mechanical parts | Workshop Biozentrum, University Basel | – | Custom designed adapter plates, holders, etc. see attached CAD files |
Optics | |||
Laser diode | Thorlabs | CPS780S | 780 nm laser diode module 2.5 mW |
Photo detector | Thorlabs | PDA100A-EC | Si Switchable Gain Detector, 320-1100 nm, 2.4 MHz BW, 100 mm2 |
EM grids | |||
DURASIN FILM TEM | emsdiasum.com | DTF-03523 | 30 nm DuraSiN™ silicon nitride membranes for TEM, pack of 5 |
Quantifoil Cu 200 mesh R 2/1 | Quantifoil Micro Tools GmbH | ||
Quantifoil Cu 200 mesh R 1.2/1.3 | Quantifoil Micro Tools GmbH | ||
Buffers / Neg. stain | |||
PBS | Sigma | D8537 SIGMA | Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline |
NanoVan 2% | nanoprobes.com | Negative stain vanadium based | |
NanoW 2% | nanoprobes.com | Negative stain tungsten based | |
Software | |||
openBEB | The openBEB 2 framework is avaible upon request, version 3 will be downloadable | ||
CryoWriter control software (openBEB plugin) | Avaible upon request, extra fees for 3rd party driver software might apply. |