व्युत्पत्ति और कुत्ते डिम्बग्रंथि Mesenchymal स्टेम कोशिकाओं के भेदभाव
Summary
इस के साथ साथ, हम अलगाव, विस्तार, और कुत्ते डिंबग्रंथि ऊतक से mesenchymal स्टेम कोशिकाओं के भेदभाव के लिए एक विधि का वर्णन ।
Abstract
mesenchymal स्टेम सेल में ब्याज (MSCs) अलगाव, विस्तार, और संस्कृति के अपने आसानी के कारण पिछले एक दशक से अधिक बढ़ गया है । हाल ही में, अध्ययन व्यापक भिंनता क्षमता है कि इन कोशिकाओं के अधिकारी का प्रदर्शन किया है । अंडाशय कोशिका के लिए एक होनहार उंमीदवार का प्रतिनिधित्व करता है आधारित चिकित्सा तथ्य यह है कि यह MSCs में समृद्ध है और यह अक्सर जैविक अपशिष्ट के रूप में ovariectomy सर्जरी के बाद खारिज कर दिया है के कारण । यह लेख अलगाव, विस्तार, और कुत्ते अंडाशय से व्युत्पंन MSCs के अंतर के लिए प्रक्रियाओं का वर्णन करता है, कोशिका छंटाई तकनीक की आवश्यकता के बिना । यह प्रोटोकॉल नैदानिक परीक्षणों और चिकित्सीय उपयोगों में इन अत्यधिक differentiable कोशिकाओं की व्यापक प्रयोज्यता की वजह से अपक्षयी चिकित्सा के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण का प्रतिनिधित्व करता है ।
Introduction
प्रकाशित अध्ययनों कि स्टेम सेल पर ध्यान केंद्रित की संख्या काफी पिछले एक दशक से अधिक बढ़ गया है, एक अनुसंधान प्रयास है कि शक्तिशाली अपक्षयी चिकित्सा चिकित्सा की खोज के सामूहिक लक्ष्य से ईंधन दिया गया है । स्टेम सेल दो प्राथमिक परिभाषित मार्करों: स्व नवीकरण और भेदभाव है । Mesenchymal स्टेम सेल नियमित रूप से ऊतक कारोबार के लिए जिंमेदार है और भेदभाव की एक अधिक प्रतिबंधित क्षमता है जब भ्रूण स्टेम कोशिकाओं1की तुलना में । हाल ही में, कई अध्ययनों से पता चला है MSCs के भेदभाव की एक विस्तृत श्रृंखला है, और चर्चा के तहत एक विषय है कि क्या भ्रूण और वयस्क स्टेम कोशिकाओं के बीच मतभेद सभी2में मौजूद हैं ।
ovarium सतह उपकला कोशिकाओं की एक प्रतिबद्ध परत, अपेक्षाकृत कम विभेदित है, जो दोनों उपकला और mesenchymal मार्करों3व्यक्त करता है, के जवाब में कोशिकाओं के विभिन्न प्रकार में अंतर करने की क्षमता को बनाए रखने पर्यावरण सिग्नल4. अंडाशय में स्टेम कोशिकाओं का सही स्थान अच्छी तरह से ज्ञात नहीं है; तथापि, यह प्रस्ताव किया गया है कि tunica albuginea में bipotential progenitors रोगाणु कोशिकाओं को जन्म दे5. प्रतिरक्षा अध्ययनों की कल्पना की है कि इन कोशिकाओं को एक stromal मूल6 या में स्थित है या अंडाशय सतह7के लिए समीपस्थ हैं । के बाद से mesenchymal स्टेम सेल कई रिसेप्टर्स कि कोशिका आसंजन8में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभा व्यक्त करते हैं, एक प्रयोग की परिकल्पना है कि तेजी से आसंजन के साथ कोशिकाओं की आबादी का चयन कोशिकाओं की आबादी स्पष्ट रूप से अलग होगा का परीक्षण करने के लिए डिज़ाइन किया गया था प्रकृति में mesenchymal के रूप में characterizable । हाल ही में, हमारे समूह संस्कृति के पहले 3 ज में संस्कृति पकवान की प्लास्टिक की सतह के लिए आसंजन की उनकी क्षमता के आधार पर डिम्बग्रंथि ऊतक से MSCs के व्युत्पत्ति की सूचना दी, तेजी से आसंजन9प्रदर्शन कोशिकाओं की एक शुद्ध जनसंख्या प्राप्त करने के लिए । यहां, हम mesenchymal के लिए विकसित विधि का वर्णन डिम्बग्रंथि ऊतक से स्टेम सेल अलगाव ।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस के साथ साथ हम सबूत है कि MSCs कुत्ते डिंबग्रंथि ऊतक, जो ovariectomy के बाद जैविक अपशिष्ट माना जाता है से अलग किया जा सकता है प्रदान करते हैं । तथ्य यह है कि कई कोशिका प्रकार अंडाशय में पाया जा सकता है के कारण, हम एक…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखक UNESP में कुत्ते नसबंदी कार्यक्रम स्वीकार करते है FCAV के लिए कृपया अंडाशय प्रदान । यह काम FAPESP (प्रोसेस नो. 2013/14293-0) और CAPES से अनुदान द्वारा समर्थित था.
Materials
| DPBS | Thermo Fisher | 14190144 | |
| Collagenase I | Thermo Fisher | 17100017 | |
| Tissue flask | Corning | CLS3056 | |
| DMEM low glucose | Thermo Fisher | 11054020 | |
| FBS | Thermo Fisher | 12484-010 | |
| TrypLE express | Thermo Fisher | 12604021 | |
| StemPro Adipogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007001 | |
| StemPro Chondrogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007101 | |
| StemPro Osteogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007201 | |
| STEMdiff Definitive Endoderm Kit | StemCell | 5110 | |
| Penicillin-Streptomycin | Thermo Fisher | 15070063 | |
| CD45 | AbD Serotec | MCA 2035S | |
| CD34 | AbD Serotec | MCA 2411GA | |
| CD90 | AbD Serotec | MCA 1036G | |
| CD44 | AbD Serotec | MCA 1041 | |
| Nestin | Milipore | MAB353 | |
| β-Tubulin | Milipore | MAB1637 | |
| DDX4 | Invitrogen | PA5 -23378 | |
| IgG- FITC | AbD Serotec | STAR80F | |
| IgG- FITC | AbD Serotec | STAR120F |
References
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