Avledning og differensiering av hjørnetann Ovarian Mesenchymal stamceller
Summary
Her, beskriver vi en metode for isolasjon, utvidelse og differensiering av mesenchymal stamceller fra hjørnetann ovarian vev.
Abstract
Interessert i stamceller (MSCs) har økt det siste tiåret på grunn av sin brukervennlighet isolasjon, utvidelse og kultur. Studier har nylig vist brede differensiering kapasitet som disse cellene har. Eggstokken representerer en lovende kandidat for cellen-basert behandling grunn av det faktum at den er rik på MSCs, og at det er ofte forkastet etter ovariectomy operasjoner som biologisk avfall. Denne artikkelen beskriver fremgangsmåter for isolering, utvidelse, og differensiering av MSCs avledet fra hjørnetann eggstokken, uten nødvendigheten av celle-sortering teknikker. Denne protokollen representerer et viktig verktøy for regenerativ medisin på grunn av bred anvendelse av disse svært deriverbare cellene i kliniske forsøk og terapeutiske bruker.
Introduction
Antall publiserte studier som fokus på stamceller har økt betydelig de siste ti årene, en forskningsarbeidet som har vært drevet av den kollektive mål å utforske kraftig regenerativ medisin terapier. Stilk celler har to primære definerende markører: self – renovering og differensiering. Stamceller er ansvarlig for vanlig vev omsetning og har en mer begrenset kapasitet av differensiering i forhold til embryonale stamceller1. Nylig mange studier har vist en rekke differensiering av MSCs, og et tema under diskusjon er om forskjellene mellom embryonale og voksen stamceller finnes på alle2.
Ovarium overflate epitel er en uengasjert lag av celler, relativt mindre differensiert, som uttrykker begge markører epitel og mesenchymal3, beholde evnen til å differensiere i ulike typer celler svar Miljøsignaler4. Den nøyaktige plasseringen av stamceller i eggstokken er ikke velkjente; imidlertid har det blitt foreslått at bipotential progenitors i tunica albuginea gi opphav til bakterie celler5. Immunologiske studier har en hypotese om at disse cellene har en stromal opprinnelse6 eller befinner deg i eller proksimale til eggstokkene overflaten7. Siden mesenchymal stamceller express mange reseptorer som spiller en viktig rolle i celle vedheft8, ble et eksperiment utviklet for å teste hypotesen at du velger en populasjon av celler med rask vedheft ville isolere en populasjon av celler klart characterizable som mesenchymal i naturen. Nylig rapportert vår gruppe avledning av MSCs fra eggstokkene vev basert på deres antall vedheft til plast overflaten av kultur parabol på den første 3 h av kultur, for å få en renset populasjon av celler viser rask vedheft9. Her beskriver vi utviklet metoden for mesenchymal stamceller isolert fra eggstokkene vevet.
Protocol
Representative Results
Discussion
Her gir vi bevis for at MSCs kan være isolert fra hjørnetann ovarian vev, som regnes biologisk avfall etter ovariectomy. På grunn av at mange celletyper kan bli funnet i eggstokken, foreslått vi en protokoll for å velge MSCs basert på deres raske tilslutning til plast, som ble valgt celler som vokste i en monolayer med en fibroblast-lignende morfologi.
Første rapport av avledning av MSCs fra benmargen var basert på typer kapasitet av MSCs under den første 48t kultur1…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Forfatterne bekrefter hjørnetann sterilisering programmet på UNESP-FCAV for vennlig å gi eggstokkene. Dette arbeidet ble støttet av tilskudd fra FAPESP (prosess nr 2013/14293-0) og KAPPER.
Materials
| DPBS | Thermo Fisher | 14190144 | |
| Collagenase I | Thermo Fisher | 17100017 | |
| Tissue flask | Corning | CLS3056 | |
| DMEM low glucose | Thermo Fisher | 11054020 | |
| FBS | Thermo Fisher | 12484-010 | |
| TrypLE express | Thermo Fisher | 12604021 | |
| StemPro Adipogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007001 | |
| StemPro Chondrogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007101 | |
| StemPro Osteogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007201 | |
| STEMdiff Definitive Endoderm Kit | StemCell | 5110 | |
| Penicillin-Streptomycin | Thermo Fisher | 15070063 | |
| CD45 | AbD Serotec | MCA 2035S | |
| CD34 | AbD Serotec | MCA 2411GA | |
| CD90 | AbD Serotec | MCA 1036G | |
| CD44 | AbD Serotec | MCA 1041 | |
| Nestin | Milipore | MAB353 | |
| β-Tubulin | Milipore | MAB1637 | |
| DDX4 | Invitrogen | PA5 -23378 | |
| IgG- FITC | AbD Serotec | STAR80F | |
| IgG- FITC | AbD Serotec | STAR120F |
References
- Gazit, Z., Pelled, G., Sheyn, D., Kimelman, N., Gazit, D., Atala, A., Lanza, R. Mesenchymal stem cells. Handbook of Stem Cells (2nd Edition). , 513-527 (2013).
- Zipori, D. The nature of stem cells: state rather than entity. Nature Reviews Genetics. 5 (11), 873-878 (2004).
- Auersperg, N., Wong, A. S., Choi, K. C., Kang, S. K., Leung, P. C. Ovarian surface epithelium: biology, endocrinology, and pathology. Endocrine Reviews. 22 (2), 255-288 (2001).
- Ahmed, N., Thompson, E. W., Quinn, M. A. Epithelial-mesenchymal interconversions in normal ovarian surface epithelium and ovarian carcinomas: an exception to the norm. Journal of Cellular Physiology. 213 (3), 581-588 (2007).
- Bukovsky, A., Svetlikova, M., Caudle, M. R. Oogenesis in cultures derived from adult human ovaries. Reproductive Biology and Endocrinology. 3 (1), 17 (2005).
- Gong, S. P., et al. Embryonic stem cell-like cells established by culture of adult ovarian cells in mice. Fertility and Sterility. 93 (8), 2594-2601 (2010).
- Johnson, J., Canning, J., Kaneko, T., Pru, J. K., Tilly, J. L. Germline stem cells and follicular renewal in the postnatal mammalian ovary. Nature. 428 (6979), 145 (2004).
- Deans, R. J., Moseley, A. B. Mesenchymal stem cells: biology and potential clinical uses. Experimental Hematology. 28 (8), 875-884 (2000).
- Trinda Hill, A. B. T., Therrien, J., Garcia, J. M., Smith, L. C. Mesenchymal-like stem cells in canine ovary show high differentiation potential. Cell Proliferation. 50 (6), 12391 (2017).
- Dominici, M. L. B. K., et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 8, 4315-4317 (2006).
- Friedenstein, A. J., Piatetzky-Shapiro, I. I., Petrakova, K. V. Osteogenesis in transplants of bone marrow cells. Development. 16 (3), 381-390 (1966).
- Kuznetsov, S. A., et al. Single-colony derived strains of human marrow stromal fibroblasts form bone after transplantation in vivo. Journal of Bone and Mineral Research. 12 (9), 1335-1347 (1997).
