Apparato per la raccolta del tessuto microcolonne
Summary
Qui descriviamo un protocollo per la produzione di raccolta aghi che possono essere utilizzati per raccogliere il tessuto della pelle di pieno-spessore senza causare donatore sito cicatrici. Gli aghi possono essere combinati con un sistema di raccolta semplice raggiungere alti volumi di raccolta.
Abstract
Questo manoscritto descrive il processo di produzione per un apparecchio da laboratorio, costituito da componenti standard, che possono essere utilizzati per raccogliere microcolonne del tessuto della pelle di pieno-spessore. Le piccole dimensioni delle microcolonne permettono donatore siti di guarire rapidamente senza causare sito donatore cicatrici, durante la raccolta del tessuto di pieno-spessore consente l’inserimento di tutti i componenti cellulari ed extracellulari del tessuto della pelle, compresi quelli associato con aree cutanee più profonde e le strutture adnexal della pelle, che devono ancora essere riprodotto con successo mediante tecniche di ingegneria tissutale convenzionali. Le microcolonne possono essere applicate direttamente sulle ferite di pelle per aumentare la guarigione, o può essere utilizzati come origine delle cellule/tessuto autologo per altri approcci di ingegneria dei tessuti. Il raccolto aghi sono fatti modificando gli aghi ipodermici standard, e può essere usati da solo per la raccolta di piccole quantità di tessuto o accoppiati con un sistema di raccolta basato su aspirazione semplice (anche fatto da forniture di laboratorio comunemente disponibili) per volumi elevati di raccolta per facilitare studi in modelli animali di grandi dimensioni.
Introduction
Innesto cutaneo autologo è il cardine della riparazione della ferita, ma è limitato dalla scarsità di sito donatore e morbosità, che conduce a sforzi concertati negli ultimi decenni per sviluppare nuove opzioni terapeutiche per sostituire convenzionali l’innesto di pelle1,2 . Recentemente abbiamo sviluppato un metodo alternativo di raccolta della pelle per sfruttare i vantaggi dell’innesto di pelle di pieno-spessore, riducendo al minimo la morbilità del sito donatore. Attraverso la raccolta di pelle di pieno-spessore sotto forma di piccolo (~0.5 mm di diametro) “microcolonne”, sono in grado di guarire rapidamente e senza lasciare cicatrici in circostanze normali siti donatori (per possibili eccezioni, vedere la sezione di discussione qui sotto)3. Microcolonne può essere applicato direttamente nel letto della ferita per accelerare la chiusura della ferita, ridurre la contrazione3e ripristinare una vasta gamma di tipi delle cellule epidermiche e cutanee e funzionali strutture adnexal4, molti dei quali sono privi di l’innesto di pelle di spaccare-spessore convenzionale o corrente bioingegnerizzati pelle sostituti5. La capacità di microcolonne per aumentare la guarigione e dei loro siti donatori di guarire senza cicatrici sono entrambi in modo indipendente validati da altri gruppi di ricerca6,7.
In precedenza abbiamo sviluppato un sistema di raccolta del laboratorio per consentire la raccolta di microcolonne a scala8; Tuttavia, questo sistema è composto da molti componenti personalizzati che non sono ampiamente disponibili. Qui, descriviamo in dettaglio il processo per produrre raccolta aghi, nonché sistemi di raccolta semplice, fatta da principalmente componenti normalizzati, che possono essere utilizzati per raggiungere alti volumi di raccolta. L’apparecchiatura descritta in questo manoscritto è adatto per in vitro e lavoro animale, ma non per uso in esseri umani. Un dispositivo clinico con autorizzazione della FDA per l’applicazione di questa tecnica in esseri umani è disponibile in commercio, ma non sarà discusso in dettaglio qui.
Protocol
Representative Results
Discussion
I metodi descritti qui sono destinati a consentire la raccolta di tessuto microcolonne in quantità sufficienti per in vivo grandi studi sugli animali, utilizzando strumenti realizzati da forniture di laboratorio disponibili in commercio. Questo apparecchio è stato utilizzato in precedenza nella raccolta del tessuto da pelle umana asportata4,9 , nonché suini vivi pelle3. I parametri specifici descritti sono quelli che sono stati…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato supportato in parte di esercito, Marina, NIH, aeronautica, VA e Health Affairs per sostenere lo sforzo di AFIRM II, con il Premio n. W81XWH-13-2-0054. L’US Army Medical acquisizione attività di ricerca, 820 Chandler Street, Fort Detrick, MD 21702-5014 è l’ufficio di acquisizione di aggiudicazione e amministrazione. Opinioni, interpretazioni, conclusioni e raccomandazioni sono quelle dell’autore e non sono necessariamente approvati dal dipartimento della difesa.
Materials
| Diamond wheel | Dremel | 545 | |
| Hypodermic needle (19G) | Fisher Scientific | 14-840-98 | Other needle sizes could be used, depending on experimental needs |
| Stome wheel | Dremel | 540 | |
| Syringe (20mL with luer lock) | Fisher Scientific | 22-124-967 | |
| Suction adapter | Tulip Medical | PA20BD | Optional, for high volume harvesting |
| Suction canister | Fisher Scientific | 19-898-212 | Optional, for high volume harvesting. Sterilize before use. |
| Suction tubing | Medline | DYND50216H | Optional, for high volume harvesting |
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