Myeloid doğuştan gelen sinyal yolu düzenleme MALT1 Paracaspase etkinlik tarafından
Summary
Doğuştan gelen bağışıklık MALT1 düzenleyen ama nasıl oluşur kötü tanımlanmış kalır. Biz doğuştan gelen sinyal MALT1 myeloid sitokinler, üretimini düzenler gösteren Toll benzeri veya C tipi lektin-benzeri reseptörler aşağı ve aşağı akım için MALT1 katkısını çözülmeye selektif MALT1 paracaspase inhibitörü MLT-827 kullanılan C tipi lektin benzeri reseptörlerinin seçerek.
Abstract
Çok sayıda çalışma tarafından ele onun fonksiyonu yanında lenfoid hücrelerde paracaspase MALT1 da doğuştan gelen hücrelerin aşağı desen tanıma reseptörleri önemli bir rol oynar. En iyi okudu bir SYK ve CARD9 art arda sıralı bir MALT1 bağlı şekilde NF-κB harekete geçirmek için önde gelen sinyal bağımlı neden Dectin-1 ve Dectin 2 C tipi lektin benzeri reseptör aile üyesidir. Buna karşılık, Toll benzeri reseptörler (TLR), TLR-4 gibi NF-κB harekete geçirmek ama bir MYD88/Irak-bağımlı cascade üzerinden sinyal yaymak. Yine de, ister MALT1 TLR-4 sinyal için katkıda belirsiz kalmıştır. Son kanıtlar ile MIT-827, güçlü ve selektif inhibitörü olan MALT1 paracaspase etkinlik, MALT1 olan TNF-üretim aşağı TLR-4 insan myeloid hücrelerin Dectin-1, bağımsız olarak MALT1, TNF-üretim akıntıya karşı olduğunu gösterir bağımlı. Burada, biz MALT1 seçici katılımı daha da algılama, insan ve fare hücresel ürünleri ve Dectin-1, MINCLE veya TLR-4 yolları uyarılması çeşitli kullanarak örüntü tanıma içinde ele. Biz de sitokinler ötesinde TNF-keşfetmek ve MIT-827 SYK inhibitörü (Cpd11) ve bir IKK inhibitörü (AFN700) karşılaştırma ek anlayışlar sağladı. Topluca, sağlanan verileri C tipi lektin benzeri reseptör MALT1-bağımlılık için daha fazla kanıt — buna karşılık TLR sinyalli için sinyal.
Introduction
MALT1 paracaspase etkinliği (mukoza ilişkili lenfoid doku Lenfoma translocation protein 1) 20081,2‘ ortaya koydu. O zamandan beri çalışmalar bir dizi kritik katkısının antijen reseptör yanıtları lenfositler bildirdin. Genetik modelleri T hücreleri, T-hücre bağımlı otoimmünite ve B hücreli lenfoma ayarları3,4önemli bir rol Farmakoloji veri desteği yanı sıra Mouse. Lenfosit, derleme antijen reseptör proksimal sinyal tarafından tetiklenen bir CARD11-BCL10-MALT1 karmaşık5‘ in üzerine MALT1 paracaspase etkinleştirme oluşuyor T veya B hücre reseptörü aşağı. Ayrıca benzer bir CARD9-BCL10-MALT1 kompleksi örneğin C tipi lektin-benzeri reseptörler (CLLR), akıntı yönünde sinyaller yayma için önemlidir yeterli kanıt olduğunu, Dectin-1, Dectin-2 ve MINCLE içinde myeloid hücrelerin6,7. Dectin-1, özellikle de bu yolu mantar enfeksiyonları8,9karşı ana savunma için önemli olduğundan çalışılmıştır. MALT1 dolaylı olarak Toll benzeri reseptör (TLR) yollar, ancak, tartışmalı10kalmıştır. Son kanıtlar insan myeloid hücrelerin TNF-üretim aşağı TLR-411tür ile MALT1 paracaspase etkinliği için doğrudan bir rol dışarı karar verdi.
Mevcut çalışma, biz çeşitli deneysel ayarları ve uyarıcı koşullarda insan ve fare myeloid hücrelerin belirli farmakolojik aracı inhibitörleri ve ölçüm sitokin üretiminin güvenerek doğuştan gelen sinyal yolları, soruşturma için kullandık.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu çalışmada, insan sinyal yolları ve fare doğuştan gelen hücreler çalışma ve kendi bağımlılık MALT1 proteolitik işlevi sorguya basit deneysel ayarları kullanılır. Önceki çalışma11tarihinde genişletilmesi, bizim çalışma MALT1 paracaspase etkinliği C tipi indüklenen lektin benzeri reseptör sitokin üretim, TNF-α da dahil olmak üzere denetler gösterdi. Buna ek olarak, TLR-4-indüklenen TNF-α her iki tür MALT1 bağımsız. Toplu olarak, bu veri hangi önceki çalış…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Elsevier burada Şekil 2A Unterreiner vd yeniden kendi yetkilendirme (lisans numarası 4334770630127) için teşekkür ederiz (2017).
Materials
| 100 µm nylon cell strainer | Sigma | CLS431752 | |
| 14 ml Falcon tube | BD Falcon | 352057 | |
| 15 mL Falcon tube | Falcon | 352090 | |
| 50 mL Falcon tube | Falcon | 352070 | |
| 6 well plates | Costar | 3516 | |
| 96 well flat-bottom plate, with low evaporation lid | Costar | 3595 | |
| 96 well V-bottom plate | Costar | 734-1798 | |
| Ammonium Chloride – NH4Cl | Sigma | A9434 | |
| Assay diluent RD1-W ELISA | R&D | 895038 | Assay diluent |
| Cell culture microplate, 384 well, black | Greiner | 781986 | |
| Depleted Zymosan | Invivogen | tlrl-dzn | now: tlrl-zyd |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma | D2650 | DMSO |
| EDTA-Na2 | Sigma | E5134 | Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt dihydrate |
| ELISA muTNF-α | R&D | SMTA00 | |
| Ficoll-Paque Plus | GE Healthcare | 17-1440-03 | |
| gentleMACS C tubes | MACS Miltenyi Biotec | 130-096-334 | |
| gentleMACS dissociator | MACS Miltenyi Biotec | 130-093-235 | |
| GM-CSF | Novartis | – | |
| Heat-inactivated Fetal bovine serum | Gibco | 10082 | FBS |
| HTRF hu IL-23 | CisBio | 62HIL23PEG | |
| HTRF hu TNF-α | CisBio | 62TNFPEC | |
| HTRF reconstitution buffer | CisBio | 62RB3RDE | 50mM Phosphate buffer, pH 7.0, 0.8M KF, 0.2% BSA |
| IFN-γ | R&D | L4516 | |
| IL-4 | Novartis | – | |
| Isoflurane | Abbott | Forene | |
| Lipopolysaccharides (LPS) | Sigma | L4391 | LPS used in human samples |
| Lipopolysaccharides | Sigma | L4516 | LPS used in murine samples |
| Lysis buffer | Self-made | – | 155 mM NH4Cl, 10 mM KHCO3, 1 mM EDTA, pH 7.4 |
| Magnet | Stemcell | 18001 | |
| Microplate, 384 well white | Greiner | 784075 | |
| Monocytes enrichment kit | Stemcell | 19059 | |
| Nalgene Mr. Frosty Cryo 1 °C Freezing Container | Nalgene | 5100-0001 | cooling device (containing Propanol-2) |
| PBS 1x pH 7.4 [-] CaCl2 [-] MgCl2 | Gibco | 10010 | Phosphate-buffered saline |
| Penicillin/Streptomycin | Gibco | 15140 | Pen/Strep |
| Potassium bicarbonate – KHCO3 | Sigma | P9144 | |
| PrestoBlue | Invitrogen | A13262 | Resazurin solution for viability assessment |
| Propanol-2 | Merck | 1.09634 | |
| Read buffer | MesoScale Discovery | R92TC-3 | Tris-based buffer containing tripropylamine |
| Recovery cell culture freezing medium | Gibco | 12648-010 | freezing medium |
| Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI) with Glutamax | Gibco | 61870 | + 10% FBS for iMoDCs + 10% FBS + 1 mM Sodium Pyruvate + 100 U/mL Pen/Strep + 5 µM β-mercaptoethanol for human PBMCs and monocytes + 10% FBS + Pen/Strep + 5 µM β-mercaptoethanol for murine splenocytes |
| Separation buffer | Self-made | – | PBS pH 7.4 + 2% FBS + 1 mM EDTA pH 8.0 |
| Sodium Pyruvate | Gibco | 11360 | |
| Trehalose-6,6-dibehenate | Invivogen | tlrl-tdb | TDB |
| Tween 20 | Sigma | P7949 | Polysorbate 20 |
| UltraPure 0.5 M EDTA pH 8.0 | Invitrogen | 15675 | Ethylenediaminetetraacetic acid |
| Viewseal sealer | Greiner BioOne | 676070 | |
| V-PLEX Proinflammatory Panel 1 Human Kit | MesoScale Discovery | K15049D | electrochemiluminescent multiplex assay (IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8) |
| β-Mercaptoethanol | Gibco | 31350 |
References
- Coornaert, B., et al. T cell antigen receptor stimulation induces MALT1 paracaspase-mediated cleavage of the NF-kappaB inhibitor A20. Nature immunology. 9 (3), 263-271 (2008).
- Rebeaud, F., et al. The proteolytic activity of the paracaspase MALT1 is key in T cell activation. Nature immunology. 9 (3), 272-281 (2008).
- Jaworski, M., Thome, M. The paracaspase MALT1: Biological function and potential for therapeutic inhibition. Cellular and Molecular Life Sciences. 73 (3), 459-473 (2016).
- Meininger, I., Krappmann, D. Lymphocyte signaling and activation by the CARMA1-BCL10-MALT1 signalosome. Biological Chemistry. 397 (12), 1315-1333 (2016).
- Qiao, Q., et al. Structural architecture of the CARMA1/Bcl10/MALT1 signalosome: nucleation-induced filamentous assembly. Molecular cell. 51 (6), 766-779 (2013).
- Gross, O., et al. Card9 controls a non-TLR signalling pathway for innate anti-fungal immunity. Nature. 442 (7103), 651-656 (2006).
- Chiffoleau, E. C-type lectin-like receptors as emerging orchestrators of sterile inflammation represent potential therapeutic targets. Frontiers in Immunology. 9 (FEB), 1-9 (2018).
- Taylor, P. R., et al. Dectin-1 is required for beta-glucan recognition and control of fungal infection. Nature Immunology. 8 (1), 31-38 (2007).
- Lanternier, F., et al. Primary immunodeficiencies underlying fungal infections. Current opinion in pediatrics. 25 (6), 736-747 (2013).
- Thome, M. Multifunctional roles for MALT1 in T-cell activation. Nature reviews. Immunology. 8 (7), 495-500 (2008).
- Unterreiner, A., Stoehr, N., Huppertz, C., Calzascia, T., Farady, C. J., Bornancin, F. Selective MALT1 paracaspase inhibition does not block TNF-α production downstream of TLR-4 in myeloid cells. Immunology Letters. , 48-51 (2017).
- Strasser, D., et al. Syk Kinase-Coupled C-type Lectin Receptors Engage Protein Kinase C-δ to Elicit Card9 Adaptor-Mediated Innate Immunity. Immunity. 36 (1), 32-42 (2012).
- Jaworski, M., et al. Malt1 protease inactivation efficiently dampens immune responses but causes spontaneous autoimmunity. The EMBO journal. 33 (23), 2765-2781 (2014).
- Yu, J. W., et al. MALT1 protease activity is required for innate and adaptive immune responses. PLoS ONE. 10 (5), 1-20 (2015).
- Bardet, M., et al. The T-cell fingerprint of MALT1 paracaspase revealed by selective inhibition. Immunology and Cell Biology. 96 (1), 81-99 (2018).
- Thoma, G., et al. Discovery and profiling of a selective and efficacious syk inhibitor. Journal of Medicinal Chemistry. 58 (4), 1950-1963 (2015).
- Bauer, B., Steinle, A. HemITAM: A single tyrosine motif that packs a punch. Science Signaling. 10 (508), 1-10 (2017).
- Gringhuis, S. I., et al. Selective c-Rel activation via Malt1 controls anti-fungal TH-17 immunity by dectin-1 and dectin-2. PLoS Pathogens. 7 (1), (2011).
- Dufner, A., Schamel, W. W. B cell antigen receptor-induced activation of an IRAK4-dependent signaling pathway revealed by a MALT1-IRAK4 double knockout mouse model. Cell Communication and Signaling. 9 (1), 6 (2011).
- Phelan, J. D., et al. A multiprotein supercomplex controlling oncogenic signalling in lymphoma. Nature. , (2018).
