Summary

Dans modèle de différenciation in Vitro des cellules de la mémoire humaine normale B à longue durée de vie des cellules de Plasma

Published: January 20, 2019
doi:

Summary

À l’aide de systèmes de culture de plusieurs étapes, les auteurs rapportent une in vitro de cellules B au modèle de différenciation de cellules de plasma.

Abstract

Plasmocytes (PCs) sécrètent de grandes quantités d’anticorps et se développent à partir des cellules de B qui ont été activés. SCP est rares cellules localisées dans la moelle osseuse ou de la muqueuse et assurent l’immunité humorale. En raison de leur faible fréquence et de l’emplacement, l’étude de la SCP est difficile chez l’homme. Nous avons signalé un B PC modèle de différenciation in vitro à l’aide de certaines combinaisons de cytokines et l’activation des molécules qui permettent de reproduire la différenciation des cellules séquentielles survenant in vivo. Dans ce modèle in vitro, mémoire des cellules B (MBCs) permet de différencier en pre plasmablasts (prePBs), plasmablasts PCs (PBs), au début et enfin, dans la longue durée de vie avec un phénotype PCs, fermer à leurs homologues chez les individus sains. Nous avons construit également un libre accès bioinformatique outils pour analyser les informations principales de données LGE liées à la différenciation de PC. Ces ressources peuvent être utilisées pour étudier les humain B à la différenciation de PC et dans la présente étude, nous avons étudié la régulation de l’expression génique des facteurs épigénétiques pendant B humaine à la différenciation de PC.

Introduction

La différenciation des cellules B à plasmocytes (PCs) est essentielle à l’immunité humorale et protéger l’hôte contre l’infection1. B à la différenciation de la PC est associée à des changements majeurs dans la capacité de la transcription et le métabolisme pour accueillir à la sécrétion d’anticorps. Les facteurs de transcription qui contrôlent B à la différenciation de PC ont été largement étudiées et révélées réseaux exclusifs y compris spécifiques PC et B transcription factors (TFs)2. Dans les cellules de B, PAX5, BCL6 et BACH2 TFs sont les gardiens des lymphocytes B identité2,3. Induction IRF4, PRDM1 , codant pour BLIMP1 et XBP1 PC TF va éteindre les gènes de cellules B et induire une coordonnée sécrétant des anticorps cellule programme transcriptionnel3,4,5. Ces changements de transcriptional coordonnés sont associés à Ig gènes transcription activation avec un passage de la forme liée à la membrane à la forme sécrétée des immunoglobulines chaîne lourde2,3, 4. B à la différenciation de la PC est lié à l’induction de gènes impliqués dans le réticulum endoplasmique et l’appareil de Golgi fonctionne concomitante avec l’activation de la protéine dépliée réponse (UPR) connue pour jouer un rôle clé dans le PC en accueillant la synthèse de sécrétion d’immunoglobulines6,7. Le TF XBP1 joue un rôle majeur dans cette adaptation cellulaire8,9,10.

Les cellules B et les PC est des acteurs clés de l’immunité humorale. Comprendre le biologique des processus qui contrôlent la production et la survie des cellules de plasma normales est essentiel dans les interventions thérapeutiques qui doivent assurer des réponses immunitaires efficaces et empêcher l’auto-immunité ou un déficit immunitaire. PC sont des cellules rares avec les premiers stades de différenciation se déroulant dans des lieux anatomiques qui entravent la caractérisation biologique complet, en particulier chez l’homme. À l’aide de systèmes de culture de plusieurs étapes, nous avons rapporté un B in vitro au modèle de différenciation de PC. Ce modèle reproduit la différenciation cellulaire séquentielle et la maturation qui se produisent dans les différents organes en vivo11,12,13. Dans un premier temps, les cellules B mémoire sont activés pendant quatre jours par CD40 ligand, oligodeoxynucleotides et cytokines combinaison et se différencient en preplasmablasts (PrePBs). Dans un second temps, preplasmablasts sont amenées à se différencier en plasmablasts (PBs) en supprimant la stimulation CD40L et oligodeoxynucleotides et changer la combinaison de cytokine. Dans une troisième étape, les plasmablasts sont induites à se différencier dans les premiers PC en changeant la cytokine combinaison11,12. Une quatrième étape a été introduite pour obtenir la pleine maturités PCs en cultivant ces premiers PCs avec milieu de la moelle osseuse des cellules stromales conditionnés ou sélectionné des facteurs de croissance,13. Ces PC mature pourrait survivre plusieurs mois in vitro et sécrètent des quantités élevées d’immunoglobuline (Figure 1). Fait intéressant, notre modèle in vitro récapitule les modifications de transcriptional coordonnées et le phénotype du B différent stades de PC qui peuvent être détectées in vivo11,12,13,14 ,,15. PC sont des cellules rares et notre modèle de différenciation in vitro permet d’étudier les humain B à la différenciation de PC.

Protocol

Le protocole suit les directives conformément à la déclaration d’Helsinki et l’accord du Centre hospitalier de l’Université de Montpellier pour les ressources biologiques. 1. dans le modèle de différenciation pour le plasmocyte Vitro normale Remarque : SCP est générés par une culture de quatre étapes11,12,13. Différencia…

Representative Results

La procédure globale de différenciation in vitro de PC normale est représentée dans la Figure 1. En utilisant le protocole présenté ici, nous pourrions produire une quantité suffisante de cellules qui ne peut pas être obtenu avec ex vivo des échantillons humains. Bien que le rôle du réseau complex de facteurs de transcription impliqués dans la différenciation de PC a été étudié, les mécanismes qui régissent les principaux réseaux de transc…

Discussion

Chez l’homme, PC sont rares cellules avec des stades de différenciation qui ont lieu dans des endroits anatomiques qui entravent la caractérisation biologique complet. Nous avons développé un B in vitro au modèle de différenciation de PC à l’aide de systèmes de culture de plusieurs étapes où les différentes combinaisons de molécules d’activation et de cytokines sont appliquées par la suite afin de reproduire la différenciation des cellules séquentielles qui se produisent dans la différents organes/t…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Ce travail a été soutenu par des subventions de Français INCA (Institut National du Cancer) Institut (PLBIO15-256), ANR (Tie-Skip) et ITMO Cancer (MM & TT).

Materials

anti-CD2 magnetic beads Invitrogen 11159D
Anti-CD138-APC Beckman-Coulter  B49219
Anti-CD19-APC BD 555415
Anti-CD20-PB Beckman-Coulter  B49208
Anti-CD27-PE BD 555441
Anti-CD38-PE Beckman-Coulter  A07779
Anti-histidine R&D Systems MAB050
CpG ODN(PT) Sigma T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*
G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T
human Transferin Sigma-Aldrich T3309
IFN-α Merck Intron A
IMDM Gibco 31980-022
Recombinan Human CD40L-hi R&D Systems 2706-CL
Recombinant Human APRIL R&D Systems 5860-AP-010
Recombinant Human IL-10 R&D Systems 217-IL-
Recombinant Human IL-15 Peprotech 200-15-10ug
Recombinant Human IL-2 Protein R&D Systems 202-IL-
Recombinant Human IL-6 Peprotech 200-06

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Cite This Article
Jourdan, M., de Boussac, H., Viziteu, E., Kassambara, A., Moreaux, J. In Vitro Differentiation Model of Human Normal Memory B Cells to Long-lived Plasma Cells. J. Vis. Exp. (143), e58929, doi:10.3791/58929 (2019).

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