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Abstract
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면역학 및 감염병학

通常記憶 B 細胞の長命の形質細胞への分化モデル

Published: January 20, 2019
doi:
10.3791/58929
, , , ,
1IGH, CNRS,Univ Montpellier, 2Laboratory for Monitoring Innovative Therapies, Department of Biological Hematology,CHU Montpellier, 3UFR de Médecine,Univ Montpellier

Summary

In vitro における B 細胞を形質細胞分化モデルに報告多段階培養システムを使用して。

Abstract

形質細胞 (Pc) 抗体の大量分泌し、活性化されている B 細胞から発生します。Pc は骨髄や粘膜に位置する希少な細胞、体液性免疫を確保します。それらの低周波と場所のため Pc の研究が困難な人間に。我々 は PC に B を報告選択した生体内で発生した連続細胞分化を再現することができるサイトカインや活性化の分子の組み合わせを用いた in vitro 分化モデル。この in vitro モデル、メモリー B 細胞 (MBCs) が前の plasmablasts (prePBs) plasmablasts に (PBs)、早く Pc を区別するために、最終的に、長命に Pc、表現型を閉じる健常者.の対応するまた、オープン アクセス バイオインフォマティクス PC 分化に関連する GEP データから最も顕著な情報を分析するためのツールを建てた。PC 分化し現在の研究ではヒトの B を勉強するこれらのリソースを使用することができます、PC 分化ヒト B 中に後成の要因の遺伝子発現制御を検討しました。

Introduction

B 細胞の形質細胞 (Pc) への分化は、体液性免疫に欠かせない感染症1に対してホストを保護します。PC 分化する B 抗体の分泌に合わせて転写能力と代謝に大きな変化に関連付けられます。B を PC の分化を制御する転写因子が広く研究されているし、明らかに排他的なネットワーク B および PC 特異的転写因子 (TFs)2。B 細胞の PAX5、BCL6 および BACH2 TFs が B 細胞アイデンティティ2,3の保護者です。IRF4、 PRDM1エンコード BLIMP1 およびXBP1 PC TF の誘導が B 細胞遺伝子を消すし、調整された抗体分泌細胞転写プログラム3,4,5を誘発します。これら協調的な転写変更は膜結合型フォームから免疫グロブリン重鎖2,3,の分泌された形態への切り替えと Ig 遺伝子転写活性化に関連付けられています。4. PC 分化する B が小胞体に関与する遺伝子の誘導とリンクされ、ゴルジ装置関数の合成を収容し PC で重要な役割を再生する知られている小胞体ストレス応答 (UPR) アクティベーションを併用免疫グロブリンは、6、7を分泌します。TF XBP1 は、この細胞の適応8,9,10の主要な役割を果たしています。

B 細胞と Pc は、体液性免疫の主要選手です。生物学を理解する生産と通常のプラズマ細胞の生存効率的な免疫応答を確保し、自己免疫疾患や免疫不全を防止する必要がある治療上の介在の重要ですコントロールを処理します。PC は、完全生物学的特性、特に人間を妨げる解剖位置で行われる初期の分化段階で希少な細胞です。多段階培養システムを使用して、PC の差別化モデルに体外 B を報告した.このモデルを再現した連続細胞分化と成熟 vivo11,12,13.別の臓器に発生します。最初のステップでメモリー B 細胞は最初に 4 日間の CD40 リガンド、オリゴデオキシヌクレオチドおよびサイトカインの組み合わせによってアクティブ化され、preplasmablasts (PrePBs) に分化します。2 番目のステップでは、preplasmablasts plasmablasts (PBs) に分化する CD40L とオリゴデオキシヌクレオチド刺激の取り外しとサイトカインの組み合わせを変更することによって引き起こされます。3 番目のステップでは、plasmablasts は、初期 Pc にサイトカイン組み合わせ11,12を変更することによって区別するために引き起こされます。4 番目のステップは、培養骨髄間質細胞のエアコンの中でこれらの初期の Pc によって完全に成熟した Pc を取得する導入されたか、成長因子13を選択しました。これらの成熟した Pc 数ヶ月体外を生き残るため、免疫グロブリン (図 1) を大量に分泌します。興味深いことに、私たちの in vitro モデルを繰り返す、協調的な転写変更と検出された生体内で11,12,13,14 をすることができます PC の段階に別の B の表現型 ,15。Pc は、希少な細胞と in vitro 分化モデル PC 分化ヒト B を勉強することができます。

Protocol

ヘルシンキ宣言と生物資源のモンペリエ大学病院センターの契約に基づきガイドラインをプロトコルに従います。 1. 培養正常形質細胞分化のモデルで 注:Pc は、4 つのステップ文化11,12,13を通じて生成されます。 B 細胞の増幅と分化 記憶 B ?…

Representative Results

生体外で通常 PC 分化の全体的な手順は、図 1で表されます。ここで提示されたプロトコルを使用して、ex vivo ひと試料で得られなかった細胞の十分な量を生成可能性があります。PC の分化に関与する転写因子の複雑なネットワークの役割を行ったキー PC 分化の転写ネットワークを規定しているメカニズムのあまり知られていないままです。細胞?…

Discussion

人間で PC は稀な細胞分化段階を完全に生物学的特性を妨げる解剖学的場所で行われています。体外 B 活性化分子とサイトカインのさまざまな組み合わせは、その後で発生した連続細胞分化を再現するために適用される多段階培養システムを用いた PC 分化モデルを開発した、異なる臓器・組織 vivo11,12,13。

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Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

この作品はフランスのインカ (Institut 国立デュがん) からの助成金によって支えられた研究所 (PLBIO15-256)、ANR (ネクタイ スキップ)、機械がん (ミリ ・ TT)。

Materials

anti-CD2 magnetic beads Invitrogen 11159D
Anti-CD138-APC Beckman-Coulter  B49219
Anti-CD19-APC BD 555415
Anti-CD20-PB Beckman-Coulter  B49208
Anti-CD27-PE BD 555441
Anti-CD38-PE Beckman-Coulter  A07779
Anti-histidine R&D Systems MAB050
CpG ODN(PT) Sigma T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*
G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T
human Transferin Sigma-Aldrich T3309
IFN-α Merck Intron A
IMDM Gibco 31980-022
Recombinan Human CD40L-hi R&D Systems 2706-CL
Recombinant Human APRIL R&D Systems 5860-AP-010
Recombinant Human IL-10 R&D Systems 217-IL-
Recombinant Human IL-15 Peprotech 200-15-10ug
Recombinant Human IL-2 Protein R&D Systems 202-IL-
Recombinant Human IL-6 Peprotech 200-06
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References

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Jourdan, M., de Boussac, H., Viziteu, E., Kassambara, A., Moreaux, J. In Vitro Differentiation Model of Human Normal Memory B Cells to Long-lived Plasma Cells. J. Vis. Exp. (143), e58929, doi:10.3791/58929 (2019).
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