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면역학 및 감염병학

इन विट्रो में लंबे समय तक रहने वाले प्लाज्मा कोशिकाओं को मानव सामान्य स्मृति बी कोशिकाओं के भेदभाव मॉडल

Published: January 20, 2019
doi:
10.3791/58929
, , , ,
1IGH, CNRS,Univ Montpellier, 2Laboratory for Monitoring Innovative Therapies, Department of Biological Hematology,CHU Montpellier, 3UFR de Médecine,Univ Montpellier

Summary

बहु कदम संस्कृति प्रणालियों का उपयोग करना, हम इन विट्रो बी सेल प्लाज्मा सेल भेदभाव मॉडल के लिए एक रिपोर्ट ।

Abstract

प्लाज्मा कोशिकाओं (पीसीएस) एंटीबॉडी की बड़ी मात्रा में स्रावित और बी कोशिकाओं है कि सक्रिय किया गया है से विकसित । पीसी दुर्लभ अस्थि मज्जा या म्यूकोसा में स्थित कोशिकाओं और विनोदी उन्मुक्ति सुनिश्चित कर रहे हैं । उनके कम आवृत्ति और स्थान के कारण, पीसी का अध्ययन मानव में मुश्किल है । हम इन विट्रो भेदभाव मॉडल में पीसी के लिए एक बी की रिपोर्ट साइटोकिंस और सक्रियकरण अणुओं के चयनित संयोजनों कि vivo में होने वाली क्रमिक कोशिका भेदभाव पुन: पेश करने की अनुमति का उपयोग कर । इस में इन विट्रो मॉडल, स्मृति बी कोशिकाओं (MBCs) में अंतर होगा पूर्व plasmablasts (prePBs), plasmablasts (पंजाब), जल्दी पीसी और अंत में, लंबे समय में पीसी रहते थे, एक phenotype के साथ स्वस्थ व्यक्तियों में अपने समकक्षों के करीब। हम भी पीसी भेदभाव से संबंधित GEP डेटा से सबसे प्रमुख जानकारी का विश्लेषण करने के लिए एक खुला पहुँच bioinformatics उपकरण का निर्माण किया. इन संसाधनों के लिए मानव बी अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है पीसी भेदभाव और वर्तमान अध्ययन में, हम मानव बी के दौरान epigenetic कारकों के जीन अभिव्यक्ति विनियमन पीसी भेदभाव के लिए जांच की ।

Introduction

प्लाज्मा कोशिकाओं (पीसीएस) के लिए बी कोशिकाओं के भेदभाव विनोदी उन्मुक्ति के लिए आवश्यक है और1संक्रमण के खिलाफ मेजबान की रक्षा करना । बी करने के लिए पीसी भेदभाव प्रतिलेखन क्षमता और चयापचय में बड़े बदलाव के साथ जुड़ा हुआ है करने के लिए एंटीबॉडी स्राव को समायोजित । प्रतिलेखन कारकों है कि नियंत्रण बी पीसी भेदभाव करने के लिए बड़े पैमाने पर अध्ययन किया गया है और बी सहित विशेष नेटवर्क से पता चला और पीसी विशिष्ट प्रतिलेखन कारकों (TFs)2। बी कोशिकाओं में, PAX5, BCL6 और BACH2 TFs बी सेल पहचान2,3के रखवालों हैं । IRF4की प्रेरण, PRDM1 एंकोडिंग BLIMP1 और XBP1 पीसी TF बी सेल जीन बुझाने और एक समंवित एंटीबॉडी-स्रावी सेल transcriptional कार्यक्रम3,4,5प्रेरित करेगा । इन समंवित transcriptional परिवर्तन ़ जीन प्रतिलेखन सक्रियकरण के साथ जुड़े रहे है झिल्ली से एक स्विच के साथ immunoglobulin भारी श्रृंखला2,3के गुप्त रूप में फार्म का एक साथ, 4. B करने के लिए पीसी भेदभाव endoplasmic जालिका में शामिल जीन की प्रेरण के साथ जुड़ा हुआ है और Golgi उपकरण के संश्लेषण को समायोजित करने से पीसी में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाने के लिए जाना जाता है कि सामने आया प्रोटीन प्रतिक्रिया (UPR) सक्रियण के साथ सहवर्ती कार्यों स्रावित इम्युनोग्लोबुलिन6,7. TF XBP1 इस सेलुलर अनुकूलन8,9,10में एक प्रमुख भूमिका निभाता है ।

बी कोशिकाओं और पीसी विनोदी उन्मुक्ति के प्रमुख खिलाड़ी हैं । जैविक प्रक्रियाओं है कि उत्पादन नियंत्रण और सामांय प्लाज्मा कोशिकाओं के अस्तित्व को समझना चिकित्सीय हस्तक्षेप है कि कुशल प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को सुनिश्चित करने और प्रतिरक्षा या प्रतिरक्षा की कमी को रोकने की जरूरत में महत्वपूर्ण है । पीसी जल्दी अंतर शारीरिक स्थानों में जगह ले रही है कि पूर्ण जैविक लक्षण वर्णन, विशेष रूप से मानव में होने के चरणों के साथ दुर्लभ कोशिकाओं रहे हैं । बहु कदम संस्कृति प्रणालियों का उपयोग करना, हम एक में सूचना दी है इन विट्रो बी पीसी विभेद मॉडल के लिए । यह मॉडल क्रमिक सेल भेदभाव और vivo11,12,13में विभिन्न अंगों में होने वाली परिपक्वता reproduces. पहले चरण में, स्मृति बी कोशिकाओं को पहले चार दिनों के लिए सक्रिय कर रहे हैं CD40 ligand, oligodeoxynucleotides और cytokine संयोजन और preplasmablasts (PrePBs) में अंतर. एक दूसरे चरण में, preplasmablasts CD40L और oligodeoxynucleotides उत्तेजना को हटाने और cytokine संयोजन को बदलने के द्वारा plasmablasts (पंजाब) में अंतर करने के लिए प्रेरित कर रहे हैं । एक तीसरे चरण में, plasmablasts cytokine संयोजन11,12बदलकर जल्दी पीसी में अंतर करने के लिए प्रेरित कर रहे हैं । एक चौथा कदम अस्थि मज्जा stromal कोशिकाओं वातानुकूलित मध्यम या चयनित विकास कारकों13के साथ इन जल्दी पीसी संवर्धन द्वारा पूरी तरह से परिपक्व पीसी पाने के लिए पेश किया गया था । ये परिपक्व पीसी इन विट्रो में कई महीनों जीवित रह सकता है और immunoglobulin (चित्रा 1) की उच्च मात्रा स्रावित । मजे की बात है, हमारे इन विट्रो मॉडल recapitulates समंवित transcriptional परिवर्तन और अलग बी के लिए पीसी चरणों कि vivo11,12,13,14 में पता लगाया जा सकता है की phenotype ,15. पीसी दुर्लभ कोशिकाओं रहे है और हमारे इन विट्रो भेदभाव मॉडल के लिए मानव बी अध्ययन करने की अनुमति देता है पीसी भेदभाव ।

Protocol

प्रोटोकॉल हेलसिंकी और जैविक संसाधनों के लिए मोंटेपेल्लियर विश्वविद्यालय अस्पताल केंद्र के समझौते की घोषणा के अनुसार दिशा निर्देशों का पालन । 1. इन विट्रो में सामान्य प्लाज्मा सेल विभेद मॉड…

Representative Results

इन विट्रो में की समग्र प्रक्रिया सामान्य पीसी भेदभाव चित्रा 1में प्रतिनिधित्व किया है. यहां प्रस्तुत प्रोटोकॉल का प्रयोग, हम कोशिकाओं है कि पूर्व vivo मानव नमूनों के साथ प्राप्त न…

Discussion

मानव में, पीसी भेदभाव शारीरिक स्थानों में जगह ले रही है कि पूर्ण जैविक लक्षण वर्णन में बाधा चरणों के साथ दुर्लभ कोशिकाओं रहे हैं । हम एक में विकसित किया है इन विट्रो बी करने के लिए पीसी विभेद मॉडल बहु का ?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

इस काम के लिए फ्रेंच इंका (Institut नेशनल ड्यूल कैंसर) इंस्टीट्यूट (PLBIO15-256), ANR (टाई-स्किप) और ITMO कैंसर (एमएम & टीटी) से अनुदान का समर्थन किया गया था.

Materials

anti-CD2 magnetic beads Invitrogen 11159D
Anti-CD138-APC Beckman-Coulter  B49219
Anti-CD19-APC BD 555415
Anti-CD20-PB Beckman-Coulter  B49208
Anti-CD27-PE BD 555441
Anti-CD38-PE Beckman-Coulter  A07779
Anti-histidine R&D Systems MAB050
CpG ODN(PT) Sigma T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*
G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T
human Transferin Sigma-Aldrich T3309
IFN-α Merck Intron A
IMDM Gibco 31980-022
Recombinan Human CD40L-hi R&D Systems 2706-CL
Recombinant Human APRIL R&D Systems 5860-AP-010
Recombinant Human IL-10 R&D Systems 217-IL-
Recombinant Human IL-15 Peprotech 200-15-10ug
Recombinant Human IL-2 Protein R&D Systems 202-IL-
Recombinant Human IL-6 Peprotech 200-06
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References

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Jourdan, M., de Boussac, H., Viziteu, E., Kassambara, A., Moreaux, J. In Vitro Differentiation Model of Human Normal Memory B Cells to Long-lived Plasma Cells. J. Vis. Exp. (143), e58929, doi:10.3791/58929 (2019).
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