우리는 빠른 필드 사이클 이완을 사용하여 동적 핵 편광에 의해 과분극 13C 농축 화합물의 스핀 격자 이완 시간의 자기장 의존성을 측정하는 프로토콜을 제시한다. 구체적으로, 우리는[1-13C] pyruvate로 이것을 입증했습니다, 그러나 프로토콜은 그밖 과극화한 기판으로 확장될 수 있었습니다.
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우리는 빠른 필드 사이클 이완을 사용하여 동적 핵 편광에 의해 과분극 13C 농축 화합물의 스핀 격자 이완 시간의 자기장 의존성을 측정하는 프로토콜을 제시한다. 구체적으로, 우리는[1-13C] pyruvate로 이것을 입증했습니다, 그러나 프로토콜은 그밖 과극화한 기판으로 확장될 수 있었습니다.
과분극 13C 농축 화합물의 생체 내 이미징 응용 프로그램에 대한 기본 제한은 유한 스핀 격자 이완 시간입니다. 버퍼 조성, 용액 pH, 온도 및 자기장과 같은 다양한 요인이 이완 속도에 영향을 미칩니다. 이 마지막 점에서, 스핀 격자 이완 시간은 임상 필드 강도에서 측정 될 수있다, 하지만 낮은 필드에서, 이러한 화합물은 편광판에서 분배하고 MRI로 이송, 이완은 더 빠르고 측정하기 어렵다. 수송 도중 손실된 자화의 양을 더 잘 이해하기 위하여는, 우리는 ~ 0.75 T에서 13C 핵의 자기 공명 검출과 함께 빠른 필드 사이클링 이완을 사용했습니다, 핵 자기 공명 분산을 측정하기 위하여, 과분극 [1-13C]피루바테의 스핀 격자 이완 시간. 용해 동적 핵 편광은 80 mmol/L 및 생리적 pH(~7.8)의 농도에서 피루브의 극극화된 샘플을 생성하는 데 사용되었다. 이러한 솔루션은 빠른 필드 사이클링 완화계로 빠르게 전달되어 시료 자화의 이완을 보정된 작은 플립 각도(3°-5°)를 사용하여 시간 함수로 측정할 수 있습니다. 피루바테의 C-1 분산을 매핑하기 위해 0.237 mT와 0.705 T 사이의 다양한 완화 필드에 대한 데이터를 기록했습니다. 이 정보를 통해 언급된 자기장 범위 내에서 극극화된 기판의 스핀 격자 이완을 추정하는 경험적 방정식을 결정했습니다. 이러한 결과는 운송 중에 손실되는 자화량을 예측하고 신호 손실을 최소화하기 위한 실험 설계를 개선하는 데 사용할 수 있습니다.
자기 공명 분광 화상 진찰 (MRSI)는 분광 화상 진찰에 의해 검출된 대사 산물의 공간 지도를 생성할 수 있습니다, 그러나 그것의 실제적인 사용은 수시로 그것의 상대적으로 낮은 감도에 의해 제한됩니다. 생체 내 자기 공명 영상 및 분광법의 이 낮은 감도는 체온과 합리적인 자기장 강도에서 달성 할 수있는 핵 자화의 작은 정도에서 비롯됩니다. 그러나 이러한 한계는 동적 핵 분극(DNP)을 사용하여 액체 기판의 체외 자화를 크게 향상시키고, 이후에 MRSI1,2를 사용하여 생체 내 대사를 프로브하기 위해 주입되는 것을 크게 향상시킴으로써 극복될 수 있다. , 3개 , 4. DNP는 제로 핵 스핀으로 대부분의 핵의 자화를 향상시킬 수 있으며 피루베트5,6,중탄산염과 같은 13 C 농축 화합물의 생체 MRSI 감도를 높이는 데 사용되었습니다. 7,8
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1. 견본 준비
참고: 1.1-1.8단계는 한 번만 수행됩니다.
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그림 2는 피루빅산을 위한 고해상도 풀레인지 마이크로웨이브 스윕의 예를 제시한다. 제시된 경우, 최적의 마이크로파 주파수는 그림 삽입에서 강조 표시된 94.128GHz에 해당합니다. 당사의 DNP 시스템은 일반적으로 93.750GHz ~ 94.241GHz 의 범위에서 작동할 수 있으며, 스텝 크기는 1MHz, 최대 600초의 편광 시간 및 최대 100mW의 전력입니다. 모든 주파수 범위는 새로운 기판에 대해서만 조사됩니다. 그러나 13C-피루브산에 대한 이전 경험을 바탕으로 최적의 주파수는 약 94.127GHz가 될 것으로 예상됩니다. 따라서 94.117GHz에서 94.137GHz 사이의 스캔 범위(1MHz의 스텝 크기와 50mW의 전력을 가진 300초의 샘플링 시간)가 일반적으로 사용됩니다.
그림 3의 왼쪽 기둥은 [1-13 C] pyruvic aci.......
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DNP를 사용하여 신호 수집을 향상시키는 것은 동물 주사에 사용되는 것과 같이 제한된 농도에서 13C 핵에서 사용할 수있는 불충분한 자기 공명 신호에 대한 기술적 인 해결책이지만 다른 실험 적 과제를 제시합니다. 도 7에 나타낸 각 이완 측정은 재측정을 위해 용해 후 재편분화될 수 없기 때문에 고유하게 준비된 샘플의 측정을 나타낸다. 이것은 필연적으로 샘플의 계량 및 용해 매체 의 무게 또는 용해 공정 자체의 변화, 예 : 불완전한 추출 및 시료의 철저한 혼합과 같은 샘플 준비의 사소한 차이로 인해 실험 적 가변성을 유도합니다. 용해 매체와 함께. 이러한 가변성은 이완 후 각 피루브액의 pH를 측정하여 부분적으로 평가될 수 있다. 에 관계없이 육수 pyruvate / 라디칼 혼합물및 용해 매체의 주의 깊은 계량에 관계없이 밀리그램보다 더 나은 DNP 장치에 삽입하기 전에, 우리의 실험에서 pHs는 5.5에서 8.3까지 범위. 우리는 pH 범위 7.6 ~ 8.......
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저자는 아무런 공개가 없습니다.
저자는 암 연구를 위한 온타리오 연구소, 화상 진찰 번역 프로그램 및 이 연구 자금을 위한 캐나다의 자연 과학 및 공학 연구 위원회를 감사하고 싶습니다. 우리는 또한 알버트 첸, GE 헬스케어, 토론토, 캐나다, 지아니 페란테, Stelar s.r.l., 이탈리아, 윌리엄 맨더, 옥스포드 인스트루먼트, 영국과 유용한 토론을 인정하고 싶습니다.
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| [1-13C]피루브산 | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA | 677175 | |
| 10mm NMR Tube | Norell, Inc., Morganton NC, USA | 1001-8 | |
| 탈이온수 | |||
| 에틸렌디아민테트라아세트산 디소듐 염 이수화물(EDTA) | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA | E5134 | |
| HyperSense Dynamic Nuclear Polarizer | Oxford Instruments, Abingdon, UK | 는 다음을 포함한다: 전체 DNP 편광자를 제어하고 모니터링하기 위해 사용되는 "DNP-NMR Polarizer" 소프트웨어; 고체 상태 편광 레벨을 모니터링하기 위해 사용되는 "RINMR"; 고체 상태 편광 레벨을 모니터링하는 RINMR 소프트웨어와 DNP 소프트웨어를 통신하는 데 사용되는 "HyperTerminal". 또한 자체 RINMR 소프트웨어 | |
| MATLAB R2017b | MathWorks, Natick, MA | 있습니다. 시간 경과에 따른 자화 붕괴의 비선형 피팅 및 과분극 피루브산의 T1 NMRD 분석을 위한 스크립트를 포함합니다. | |
| OX063 트리아릴메틸 라디칼 | 옥스포드 인스트루먼트, Abingdon, 영국 | ||
| pH 측정기 - SympHony | VWR International, Mississauga, ON., Canada | SB70P | |
| ProHance | Bracco Diagnostics Inc. | Gadoteridol, Gd-HP-DO3A | |
| 순수 에탄올 (100% 순수) | 상업용 알코올, 토론토, 온타리오, 캐나다 | P016EAAN | |
| Shim Coil | 자체 개발 | ||
| 나트륨 | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA | S7653 | |
| Sodium Hydroxide | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA | S8045 | |
| SpinMaster FFC2000 1T C/DC | Stelar s.r.l., Mede (PV) Italy | 실험 매개변수를 설정하고, RF 코일의 튜닝 및 매칭을 모니터링하고, 다른 펄스 시퀀스를 로드하고, 플립 각도를 보정하고, 데이터 수집 및 곡선 피팅을 수행하는 데 사용되는 소프트웨어 "AcqNMR"이 포함되어 있습니다. 또한 깊이 게이지, 일부 무게 및 깊이 스토퍼가 포함되어 있습니다. | |
| Trizma Pre-Set Crystals (pH 7.6) | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA | T7943 |
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