Summary

Implantation et suivi par PET/CT d'un modèle orthotopic du mésothéliome pleural humain chez les souris athymiques

Published: December 21, 2019
doi:

Summary

Cet article décrit la génération d’un modèle orthotopic de souris du mésothéliome pleural humain par l’implantation des cellules de mésothéliome de H2052/484 dans la cavité pleurale des souris athymiques immunocompromised. La surveillance longitudinale du développement des tumeurs intrapleural a été évaluée par la tomographie multimodal non-invasive[18F]-2-fluoro-2-deoxy-deoxy-D-glucose positron et la formation image de tomographie calculée.

Abstract

Le mésothéliome pleural malin (MPM) est une tumeur rare et agressive surgissant dans le mésothélium qui couvre les poumons, le coeur, et la cavité thoracique. Le développement de MPM est principalement associé à l’amiante. Les traitements n’assurent qu’une survie modeste puisque la moyenne médiane de survie est de 9 à 18 mois à partir du moment du diagnostic. Par conséquent, des traitements plus efficaces doivent être identifiés. La plupart des données décrivant de nouvelles cibles thérapeutiques ont été obtenues à partir d’expériences in vitro et doivent être validées dans des modèles précliniques in vivo fiables. Cet article décrit un tel modèle orthotopic fiable de MPM obtenu après injection d’une ligne humaine de cellules de MPM H2052/484 dans la cavité pleurale des souris athymiques immunodeficient. La transplantation dans le site orthotopic permet d’étudier la progression de la tumeur dans l’environnement naturel in vivo. La tomographie par émission de positrons/tomographie calculée (TEP/TC) imagerie moléculaire utilisant le radiotracer clinique [18F]-2-fluoro-2-deoxy-D-glucose ([18F]FDG) est la méthode de diagnostic de choix pour l’examen des patients atteints de MPM. En conséquence, [18F]FDG-PET/CT a été employé pour surveiller longitudinalement la progression de la maladie du modèle orthotopic de H2052/484. Cette technique a un potentiel 3R élevé(Réduquant le nombre d’animaux, Refine pour diminuer la douleur et l’inconfort, et Replace expérimentation animale avec des alternatives) puisque le développement de la tumeur peut être surveillé non-invasivement et le nombre d’animaux requis pourrait être considérablement réduite.

Ce modèle affiche un taux de développement élevé, une croissance tumorale rapide, est rentable et permet une traduction clinique rapide. En utilisant ce modèle orthotopic de xénogreffe MPM, les chercheurs peuvent évaluer des réponses biologiques d’un modèle fiable de MPM suivant des interventions thérapeutiques.

Introduction

Le mésothéliome pleural malin (MPM) est un cancer le plus souvent associé à l’exposition aux fibres d’amiante1,2,3. Bien que l’amiante a été interdit dans la plupart des pays occidentaux4,5,6, l’incidence de MPM est encore en augmentation de7,8. Récemment, l’exposition des souris aux nanotubes de carbone suggère qu’ils peuvent entraîner un risque important pour la santé chez l’homme9,10. Les données suggèrent que l’exposition à ces produits puisse induire l’inflammation chronique et les changements moléculaires (par exemple, perte des voies de tumeur-suppresseur) qui sous-tendent la progression au mésothéliome malin. À l’heure actuelle, les nanotubes de carbone multimurs sont l’un des produits les plus importants de la nanotechnologie et sont de plus en plus incorporés dans divers produits tels que les composites, les matériaux de stockage d’énergie, la médecine, l’électronique et les matériaux d’assainissement de l’environnement.

MPM est un cancer avec le pronostic pauvre, et la plupart des patients meurent dans les deux ans après diagnostic dû à une efficacité limitée des modalités actuelles de traitement11. Le choix du traitement pour MPM dépend du stade du cancer. Pour la plupart des MPM à un stade précoce (stade 1 et peut-être quelques tumeurs de stade 2 ou 3), l’approche clinique est une thérapie multimodale comprenant la résection chirurgicale des tumeurs, associée à la radiothérapie et à la chimiothérapie12. Une chimiothérapie combinée avec le cisplatine et le pemetrexed est indiquée pour le traitement de la plupart des patients diagnostiqués avec la maladie localement invasive avancée, qui n’est pas favorable à la résection chirurgicale, ou qui autrement ne sont pas des candidats pour la chirurgie curative13,14. Il est donc urgent de développer des traitements plus efficaces pour les patients atteints de MPM. Cependant, il y a peu de modèles animaux in vivo validés qui reflètent la pertinence clinique de MPM. Plusieurs modèles murine MPM ont été développés, mais la plupart d’entre eux ne récapitulent pas fidèlement les aspects complexes de la tumeur MPM microenvironnement15,16,17,18. L’utilisation de MPM induite par l’amiante chez la souris, les modèles de souris Génétiquement modifiés ou les modèles de transplantation syngénique des lignées cellulaires murines mpm sont limités par des différences phénotypiques et fonctionnelles fondamentales et, par conséquent, traduisent mal de nouvelles découvertes à la clinique. D’autres modèles précliniques de MPM murine s’appuient principalement sur les xénogreffes sous-cutanées ou péritonéales des lignées cellulaires humaines chez les souris immunodéficientes. Bien que ces modèles soient faciles à surveiller et à fournir des données fondamentales, le microenvironnement de ces xénogreffes n’est pas comparable aux tumeurs humaines qui altèrent la puissance translationnelle de la plupart de ces études précliniques17,19. Inversement, les xénogreffes orthopiques reflètent mieux le comportement et la réponse de tumeur patiente au traitement car ils sont entourés d’un microenvironnement semblable à celui trouvé dans le site de tumeur original16.

L’imagerie moléculaire par [18F]FDG-PET/CT est la méthode de choix pour surveiller longitudinalement la progression de la maladie chez les patients atteints de MPM20,21. Par conséquent, le recours à cette méthode d’imagerie non invasive favorise grandement la traduction des études précliniques aux essais cliniques16,22. En outre, il contribue à réduire le nombre requis d’animaux car chaque animal représente son propre contrôle dans le temps.

Dans cet article, nous présentons un modèle orthotopic fiable de xénograft MPM obtenu après injection de la ligne humaine de cellules de MPM H2052/484 dans la cavité pleurale des souris athymiques. Couplé à [18F]FDG-PET/CT imaging, ce modèle est une méthode précieuse et reproductible pour étudier les effets fonctionnels et mécanistes de nouvelles stratégies diagnostiques et traitements pour la MPM humaine.

Protocol

Toutes les procédures décrites ci-dessous ont été approuvées par le comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux et par le bureau d’État vétérinaire de Genève, En Suisse (Autorisation GE/106/16). La lignée cellulaire MPM H2052/484 a été établie et caractérisée dans notre laboratoire comme détaillé dans l’article de Colin DJ et coll.23. En bref, la ligne cellulaire De2052/484 a été établie à partir d’une tumeur thoracique obtenue après une injection intrapleura…

Representative Results

Le modèle orthotopic H2052/484Les modèles orthotopiques de MPM par injection intra-thoracique des cellules cancéreuses cultivées, particulièrement les cellules h2052/484 sont relativement faciles à installer. Les différentes étapes décrites ci-dessus ne nécessitent que des connaissances modestes sur la culture cellulaire et les étapes de chirurgie sont accessibles aux expérimentateurs d’animaux modérément formés. Les souris nues et les cellules doivent être manipulées dans des condit…

Discussion

Cet article décrit un modèle orthotopic original des cellules de MPM H2052/484 injectées dans la cavité pleurale des souris athymiques et une méthode de surveillance par la formation image de PET/CT de petit animal. Ce modèle peut être mis en œuvre avec des compétences modérées de manipulation et de chirurgie des animaux et affiche un très bon taux de développement. Il permet une grande fenêtre expérimentale d’environ 10 semaines chez les souris non traitées et la détection longitudinale non invasive des…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Cette recherche a été financée par la Ligue Genevoise contre le Cancer (à V.S.-B.) et par le Centre d’Imagerie Biomédicale (CIBM) des Universités et Hôpitaux de Genève et Lausanne (à D.J.C., O.B. et S.G.).

Materials

3-mice bed Minerve bed for mice imaging
Athymic Nude-Foxn1n nu/nu Envigo, Huntingdon, UK 6907F immunodeficient mouse
Betadine Mundipharma Medical Company, CH 111131 polyvidone iodine solution
Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline (DPBS) ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA 14190094 Buffer for cell culture
Fetal bovine serum (FBS) PAA Laboratories, Pasching, Austria A15-101 cell culture medium supplement
Insulin syringes BD Biosciences, San Jose, CA, USA 324826 syringe for cell injection
Penicillin/Streptomycin ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA 15140122 antibiotics for cell culture medium
RPMI 1640 ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA 61870010 basal cell culture medium
Temgesic (Buprenorphin 0.3 mg/mL) Alloga SA, CH 700320 opioid analgesic product
Triumph PET/SPECT/CT Trifoil, Chatsworth, CA, USA imaging equipment
Trypsin ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA 25050014 enzymatic cell dissociation buffer
Virkon S 2% Milian, Vernier, CH 972472 disinfectant
Vivoquant Invicro, Boston, MA, USA

References

  1. Grishman, E., Cohen, S., Salomon, M. I., Churg, J. Renal lesions in acute rheumatic fever. The American Journal of Pathology. 51 (6), 1045-1061 (1967).
  2. Mossman, B. T., Gee, J. B. Asbestos-related diseases. The New England Journal of Medicine. 320 (26), 1721-1730 (1989).
  3. Pass, H. I., et al. Asbestos exposure, pleural mesothelioma, and serum osteopontin levels. The New England Journal of Medicine. 353 (15), 1564-1573 (2005).
  4. Allen, L. P., Baez, J., Stern, M. E. C., Takahashi, K., George, F. Trends and the Economic Effect of Asbestos Bans and Decline in Asbestos Consumption and Production Worldwide. The Journal of Environmental Research and Public Health. 15 (3), (2018).
  5. LaDou, J., et al. The case for a global ban on asbestos. Environmental Health Perspectives. 118 (7), 897-901 (2010).
  6. Soeberg, M., Vallance, D. A., Keena, V., Takahashi, K., Leigh, J. Australia’s Ongoing Legacy of Asbestos: Significant Challenges Remain Even after the Complete Banning of Asbestos Almost Fifteen Years Ago. The Journal of Environmental Research and Public Health. 15 (2), (2018).
  7. Glynn, M. E., Keeton, K. A., Gaffney, S. H., Sahmel, J. Ambient Asbestos Fiber Concentrations and Long-Term Trends in Pleural Mesothelioma Incidence between Urban and Rural Areas in the United States (1973-2012). Risk Analysis. 38 (3), 454-471 (2018).
  8. Zhao, J., et al. Epidemiology and trend analysis on malignant mesothelioma in China. The Chinese Journal of Cancer Research. 29 (4), 361-368 (2017).
  9. Chernova, T., et al. Long-Fiber Carbon Nanotubes Replicate Asbestos-Induced Mesothelioma with Disruption of the Tumor Suppressor Gene Cdkn2a (Ink4a/Arf). Current Biology. 27 (21), 3302-3314 (2017).
  10. Fukushima, S., et al. Carcinogenicity of multi-walled carbon nanotubes: challenging issue on hazard assessment. The Journal of Occupational Health. 60 (1), 10-30 (2018).
  11. Robinson, B. W., Musk, A. W., Lake, R. A. Malignant mesothelioma. The Lancet. 366 (9483), 397-408 (2005).
  12. Ricciardi, S., et al. Surgery for malignant pleural mesothelioma: an international guidelines review. The Journal of Thoracic Diseases. 10, 285-292 (2018).
  13. Hiddinga, B. I., Rolfo, C., van Meerbeeck, J. P. Mesothelioma treatment: Are we on target? A review. The Journal of Advanced Research. 6 (3), 319-330 (2015).
  14. Kim, J., Bhagwandin, S., Labow, D. M. Malignant peritoneal mesothelioma: a review. Annals of Translational Medicine. 5 (11), 236 (2017).
  15. Ampollini, L., et al. Immuno-chemotherapy reduces recurrence of malignant pleural mesothelioma: an experimental setting. The European Journal of Cardiothoracic Surgery. 35 (3), 457-462 (2009).
  16. de Jong, M., Essers, J., van Weerden, W. M. Imaging preclinical tumour models: improving translational power. Nature Reviews Cancer. 14 (7), 481-493 (2014).
  17. Mak, I. W., Evaniew, N., Ghert, M. Lost in translation: animal models and clinical trials in cancer treatment. The American Journal of Translational Research. 6 (2), 114-118 (2014).
  18. Mazzocchi, A. R., Rajan, S. A. P., Votanopoulos, K. I., Hall, A. R., Skardal, A. In vitro patient-derived 3D mesothelioma tumor organoids facilitate patient-centric therapeutic screening. Scientific Reports. 8 (1), 2886 (2018).
  19. Gengenbacher, N., Singhal, M., Augustin, H. G. Preclinical mouse solid tumour models: status quo, challenges and perspectives. Nature Reviews Cancer. 17 (12), 751-765 (2017).
  20. Kanemura, S., et al. Metabolic response assessment with 18F-FDG-PET/CT is superior to modified RECIST for the evaluation of response to platinum-based doublet chemotherapy in malignant pleural mesothelioma. The European Journal of Radiology. 86, 92-98 (2017).
  21. Truong, M. T., Viswanathan, C., Godoy, M. B., Carter, B. W., Marom, E. M. Malignant pleural mesothelioma: role of CT, MRI, and PET/CT in staging evaluation and treatment considerations. Seminars in Roentgenology. 48 (4), 323-334 (2013).
  22. MacArthur Clark, J. The 3Rs in research: a contemporary approach to replacement, reduction and refinement. The British Journal of Nutrition. 120, 1-7 (2018).
  23. Colin, D. J., et al. Experimental Model of Human Malignant Mesothelioma in Athymic Mice. The International Journal of Molecular Sciences. 19 (7), (2018).
  24. Fueger, B. J., et al. Impact of animal handling on the results of 18F-FDG PET studies in mice. The Journal of Nuclear Medicine. 47 (6), 999-1006 (2006).
  25. Devaud, C., et al. Tissues in different anatomical sites can sculpt and vary the tumor microenvironment to affect responses to therapy. Molecular Therapy. 22 (1), 18-27 (2014).
  26. Belizário, J. E. Immunodeficient mouse models: An overview. The Open Immunology Journal. 2, 79-85 (2009).
  27. Jackaman, C., Yeoh, T. L., Acuil, M. L., Gardner, J. K., Nelson, D. J. Murine mesothelioma induces locally-proliferating IL-10(+)TNF-alpha(+)CD206(-)CX3CR1(+) M3 macrophages that can be selectively depleted by chemotherapy or immunotherapy. Oncoimmunology. 5 (6), 1173299 (2016).
  28. James, M. L., Gambhir, S. S. A molecular imaging primer: modalities, imaging agents, and applications. Physiological Reviews. 92 (2), 897-965 (2012).
  29. Kenny, L. M., Aboagye, E. O. Clinical translation of molecular imaging agents used in PET studies of cancer. Advances in Cancer Research. 124, 329-374 (2014).

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Colin, D. J., Bejuy, O., Germain, S., Triponez, F., Serre-Beinier, V. Implantation and Monitoring by PET/CT of an Orthotopic Model of Human Pleural Mesothelioma in Athymic Mice. J. Vis. Exp. (154), e60272, doi:10.3791/60272 (2019).

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