마우스 간 조직에서 혈관의 다광 현미경 관찰
Summary
이 실험에서 마우스는 혈관을 얼룩지게 할 수있는 로다민 B 이소티오카네이트 -dextran과 꼬리 정맥에 주입됩니다. 간이 노출되고 고정된 후에, 간의 특정 부분은 다광 현미경 검사를 사용하여 살아있는 바디에 있는 깊은 조직을 관찰하기 위하여 선택될 수 있습니다.
Abstract
마우스 간 조직의 내트라바산 역학을 관찰하면 마우스 간의 조직 관련 질병에 대한 심층관찰 및 연구를 더욱 심층적인 관찰할 수 있습니다. 마우스는 혈관을 얼룩지게 할 수 있는 염료를 주입합니다. 생체 내에서 마우스 간을 관찰하기 위해, 그것은 노출되어 프레임에 고정된다. 간 조직에서 혈관의 2 차원 및 3 차원 이미지는 다광 현미경을 사용하여 수득된다. 선택한 사이트의 조직의 이미지는 장기적인 변화를 관찰하기 위해 지속적으로 획득됩니다. 간 조직에 있는 혈관의 동적 변경은 또한 관찰됩니다. 다광현미경검사는 깊은 조직 단면 또는 기관에서 세포 및 세포 기능을 관찰하는 방법입니다. 다광 현미경 검사는 조직 미세 구조에 감도를 가지며 생체 내에서 높은 공간 해상도에서 생물학적 조직의 이미징을 가능하게하여 조직의 생화학 적 정보를 캡처 할 수있는 기능을 제공합니다. 다광현미경검사는 간 일부를 관찰하는 데 사용되지만 간을 고정하여 이미지를 보다 안정적으로 만드는 것은 문제가 된다. 이 실험에서, 특수 진공 흡입 컵은 간을 고치고 현미경의 밑에 간보다 안정적인 심상을 얻기 위하여 이용됩니다. 또한, 이 방법은 염료로 이러한 물질을 표시하여 간에서 특정 물질의 동적 변화를 관찰하는 데 사용할 수 있습니다.
Introduction
혈관은 인체의 다양한 장기 조직에 영양분을 제공하고 물질을 교환 할 수 있습니다. 동시에, 많은 사이토카인, 호르몬, 약물 및 세포는 또한 특정 위치로 혈관 수송을 통해 기능. 간 조직의 혈관 변화를 관찰하면 간 조직에서혈량의 분포와 물질의 운반을 이해하는 데 도움이 될 수 있으며, 특정 혈관 관련 질환의 분석을돕는다 1,2.
마우스에서 간 혈관을 관찰 하는 많은 방법이 있다. 그 중에서도 광학 현미경 검사법은 불투명혈관 조직3을관찰하는 데 많은 한계를 가지고 있다. 다광 현미경 검사는 비침습적 고해상도4를가진 살아있는 간의 혈관을 이미지하기 위하여 이용될 수 있습니다. 뿐만 아니라 혈관의 3 차원 이미지를 얻을 수 있습니다., 하지만 기술은 또한 그 안에 생물학적 효과를 관찰 하는 조직을 구성 하는 데 도움이 사용할 수 있습니다.; 더욱이, 전체 조직은 계산된 단층 촬영 및 자기 공명 화상 진찰5에서와같이 마이크로혈관만이 아니라 심영상될 수 있다.
다광 현미경 검사는 광독성6이적은 깊은 살아있는 조직에서 산란된 형광 신호를 효과적으로 검출하는 데 사용될 수 있다. 따라서 살아있는 조직의 활성을 보장할 수 있으며 손상의 양을 줄일 수 있습니다. 다광 현미경 검사는 공초점 현미경 검사법보다 더 나은 관통 전력을 가지고 있으며, 더 깊은 층을 관찰 할 수 있게7,독특한 3D 이미징을 제공합니다. 다광현미경검사는 이제 종종 이미징 두개골 신경8에 사용되며 살아있는 마우스9,10,11에서신경 역학의 연구로 확장되었다.
이 실험에서는 마우스 혈관의 형광 라벨링 후, 간은 프레임에 고정되고, 살아있는 간 조직에서 혈관의 역학은 다광산 현미경을 사용하여 볼 수 있다. 본 실험은 특정 물질을 표시하고, 다광현미경을 사용하여 조직 내의 위치를 관찰하고, 세포간 조직에서 세포 간 사건을 관찰하고, 광화학 적측정(12,13,14)을하고, 살아있는조직(15)내부의 물질 역학을 관찰하는 방법을 보여 준다. 예를 들어, 종양 내피 마커 1(TEM1)은 많은 고형 종양에서 혈관 및 기질상에 상응한 새로운 표면 마커로 확인되었으며, TEM1에 대한 단일 연쇄 가변 단편(scFv) 78을 표시한 다음, 다중광 현미경 검사법은 마우스 혈관진종 위치 및 종양16의평가에 사용될 수 있다.
Protocol
Representative Results
Discussion
특정 살아있는 조직을 관찰하는 것은 조직 내부의 물질의 변화, 국소화 및 생물학적 효과를 이해하는 효과적인수단이다(17) 이 실험에서 중요한 단계는 호흡과 심장 박동으로 인한 운동 유물의 문제를 해결할 수있는 장기 이미징 기구로 간을 고정하고 관찰을위한 다광자 현미경을 사용하는 것입니다. 이 방법을 이용하여, 생체 내 간의 내부 조직은 다광 현미경을 통해 관찰되고, …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 중국 국립 자연과학 재단(81772133)의 지원을 받았습니다. 8190244), 광동자연과학기금(2020A1515010269, 2020A1515011367), 광저우시민건강과학기술연구프로젝트(201803010034, 201903010072), 군사의료혁신사업(108X7).
Materials
| 1 mL syringe x 2 | Hunan Pinan Medical Devices Technology | YA0551 | |
| 5 W heating pad | BiolinkOptics Technology | BL336 | |
| 75% absolute ethanol | Guangdong Guanghua Sci-Tech | 1.17113.023 | |
| Absorbent cotton ball | Healthy Sanitation Kingdom | ||
| Mouse surgical instrument | RWD Life Science | SP0001-G | Including scissors and tweezers |
| Multiphoton microscopy | Olympus | FV1200MPE | |
| Organ imaging fixture | BiolinkOptics Technology | BL336 | Including suction cup, hose, negative pressure pump and bracket |
| Rhodamine B isothiocyanate–Dextran | Sigma | R9379 | |
| Shaving machine | Lei Wa | RE-3201 | |
| Sodium pentobarbital | Sigma | P3761-25G |
References
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