マウス肝組織における血管の多光顕微鏡観察
Summary
この実験では、マウスを血管を染色できるローダミンBイソチオシアネート-デキストランで尾静脈に注射します。肝臓が露出して固定された後、肝臓の特定の部分を選択して、多光子顕微鏡を用いて生体内の深部組織を観察することができる。
Abstract
マウス肝組織の血管内ダイナミクスを観察することで、マウス肝臓の組織関連疾患に関するさらなる詳細な観察と研究を行うことができます。マウスは、血管を汚すことができる染料を注入されます。生体内でマウス肝臓を観察するために、フレーム内に露出して固定する。肝臓組織における血管の2つの3次元画像は、多光子顕微鏡を用いて得られる。選択した部位の組織の画像は、長期的な変化を観察するために継続的に取得されます。肝臓組織の血管の動的変化も観察される。多光子顕微鏡は、深部組織切片または器官における細胞および細胞機能を観察するための方法である。多光子顕微鏡は組織の微細構造に対する感受性を有し、生体内で高い空間分解能での生体組織のイメージングを可能にし、組織の生化学的情報を捕捉する能力を提供する。多光子顕微鏡は肝臓の一部を観察するために使用されるが、画像をより安定させるために肝臓を固定することは問題である。この実験では、特別な真空吸引カップを使用して肝臓を固定し、顕微鏡下で肝臓のより安定した画像を得る。また、この方法は、色素でそのような物質をマークすることにより、肝臓の特定の物質の動的変化を観察するために使用することができます。
Introduction
血管は、人体の様々な臓器組織に栄養素を提供し、物質を交換することができます。同時に、多くのサイトカイン、ホルモン、薬物および細胞はまた、特定の場所への血管輸送を介して機能する。肝臓組織の血管変化を観察することは、肝臓組織の血流の分布および物質の輸送を理解するのに役立ち、また、ある血管関連疾患の解析に役立つ1,2。
マウスの肝臓の血管を観察する方法はたくさんあります。中でも、光学顕微鏡検査は、不透明血管組織3を観察する上で多くの制限を有する。多光子顕微鏡は、非侵襲的な高分解能4を有する生きた肝臓の血管を画像化するために使用することができる。血管の3次元画像が得られるだけでなく、この技術は、その中の生物学的効果を観察するために組織を整理するのにも役立ちます。さらに、コンピュータ断層撮影や磁気共鳴画像5のように、組織全体をマイクロ血管ではなく画像化することができる。
多光子顕微鏡検査は、より少ない光毒性6で、深部の生体組織における散乱蛍光シグナルを効果的に検出するために使用することができる。したがって、生体組織の活性を確保することができ、そして損傷の量を減らすことができる。多光子顕微鏡は共焦点顕微鏡よりも貫通力が優れ、より深い層を7個観察し、ユニークな3Dイメージングを提供します。多光子顕微鏡は現在、脳神経8のイメージングにしばしば使用され、生きたマウス9、10、11における神経動態の研究に拡張されている。
本実験では、マウス血管の蛍光標識後、肝臓をフレームに固定し、多光子顕微鏡を用いて生きた肝臓組織における血管の動態を見ることができる。この実験は、特定の物質をマークし、多光子顕微鏡を使用して組織内の位置を観察し、細胞間組織における細胞事象を観察し、光化学測定12、13、14を行い、生体組織15内の物質的ダイナミクスを観察する方法を示す。例えば、腫瘍内皮マーカー1(TEM1)は、多くの固形腫瘍において血管および間質に上調節された新規表面マーカーとして同定されており、TEM1に対して単鎖可変フラグメント(scFv)78をマーキングし、そしてその後、多光子顕微鏡をマウス血管腫の位置および腫瘍の評価に使用することができる。
Protocol
Representative Results
Discussion
特定の生体組織を観察することは、組織17内の物質の変化、局在、および生物学的影響を理解する有効な手段である。この実験では、呼吸や心拍による動きの問題を解決できる臓器イメージングフィクスチャで肝臓を固定し、観察に多光子顕微鏡を使用することが重要です。この方法を用いて、生体内の肝臓の内部組織を多光子顕微鏡で観察し、血管を蛍光標識してその位?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究は中国国立自然科学財団(81772133、 81902444)、広東自然科学基金(2020A1515010269、2020A15011367)、広州市民健康科学技術研究プロジェクト(201803010034、201903010072)、軍事医療イノベーションプロジェクト(170ZZ)
Materials
| 1 mL syringe x 2 | Hunan Pinan Medical Devices Technology | YA0551 | |
| 5 W heating pad | BiolinkOptics Technology | BL336 | |
| 75% absolute ethanol | Guangdong Guanghua Sci-Tech | 1.17113.023 | |
| Absorbent cotton ball | Healthy Sanitation Kingdom | ||
| Mouse surgical instrument | RWD Life Science | SP0001-G | Including scissors and tweezers |
| Multiphoton microscopy | Olympus | FV1200MPE | |
| Organ imaging fixture | BiolinkOptics Technology | BL336 | Including suction cup, hose, negative pressure pump and bracket |
| Rhodamine B isothiocyanate–Dextran | Sigma | R9379 | |
| Shaving machine | Lei Wa | RE-3201 | |
| Sodium pentobarbital | Sigma | P3761-25G |
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