Modèle transuté d’occlusion trachéale foetale chez la souris
Summary
Divers modèles animaux d’hernie diaphragmatique congénitale et d’occlusion trachéale fœtale présentent des avantages et des inconvénients en ce qui concerne les questions éthiques, le coût, la difficulté chirurgicale, la taille, les taux de survie et la disponibilité des outils génétiques. Ce modèle fournit un nouvel outil pour étudier l’impact de l’occlusion trachéale et de la pression luminaire accrue sur le développement pulmonaire.
Abstract
L’occlusion trachéale foetale (TO), une modalité établie de traitement, favorise la croissance et la survie foetales de poumon dans l’hernie diaphragmatique congénitale grave (CDH). Après to, la rétention du fluide épithélial sécrété augmente la pression luminaire et induit la croissance pulmonaire. Divers modèles animaux ont été définis pour comprendre la pathophysiologie du CDH et du TO. Tous ont leurs propres avantages et inconvénients tels que la difficulté de la technique, la taille de l’animal, le coût, les taux de mortalité élevés, et la disponibilité des outils génétiques. Ci-après, un nouveau modèle transuté de to fœtal murin est décrit. Les souris enceintes ont été anesthésiés, et l’utérus exposé par une laparotomie de midline. La trachée des foetus choisis ont été ligated avec une suture transutéine simple placée derrière la trachée, une artère carotide, et une veine jugulaire. Le barrage a été fermé et a été autorisé à récupérer. Des foetus ont été rassemblés juste avant la parturition. Le rapport poumon/poids corporel chez les fœtus TO était plus élevé que celui des fœtus de contrôle. Ce modèle fournit aux chercheurs un nouvel outil pour étudier l’impact de la to et de la pression luminaire accrue sur le développement pulmonaire.
Introduction
L’hernie diaphragmatique congénitale (CDH) se produit dans 1:2500 grossesses et a comme résultat l’hypoplasie pulmonaire et l’hypertension pulmonairenéonatale 1,2,3,4,5,6. L’occlusion trachéale foetale (TO) est une thérapie prénatale établie dans les patients graves de CDH impliquant la fetoscopy dans la semaine gestationnelle 26-30e dans laquelle un ballon est placé juste au-dessus de la carina et puis enlevé dans la semaine gestationnelle de 32nd. Ce TO temporaire induit la croissance pulmonaire fœtale et améliore la survie. Le syndrome congénital d’obstruction de voie aérienne élevée est une condition mortelle liée à l’hyperplasie pulmonaire, qui a inspiré des chirurgiens pour exécuter l’occlusion artificielle de la trachée pour favoriser la conservation du fluide épithélial sécrété. Cette occlusion a augmenté la pression luminaire et induit la croissance pulmonaire7. Cependant, l’occlusion devrait être inversée pour permettre la maturation épithéliale de cellules.
Divers modèles animaux de CDH et TO – ovine, lapin, rat et souris – ont été développés pour comprendre la pathophysiologie du CDH et du TO. Tous ont leurs propres avantages et inconvénients tels que la difficulté de la technique, la taille de l’animal, le coût, les taux de mortalité élevés, et la disponibilité des outils génétiques. Bien que la technique chirurgicale utilisée pour le modèle de l’ovine soit très similaire à celle utilisée chez l’homme et pourrait être inversée, les principaux inconvénients de ce modèle sont les dépenses de l’animal, la longue période gestationnelle et le nombre limité de chirurgies possibles. Le modèle lapin a une période gestationnelle plus courte et est moins cher que le modèle de mouton. Cependant, le modèle de lapin est irréversible8,9. Le modèle murin a le coût le plus bas, le plus grand nombre de foetus par grossesse, le génome le mieux caractérisé, et des outils largement disponibles pour des analyses cellulaires et moléculaires. Cependant, un inconvénient clé est le manque de réversibilité du TO, empêchant la pleine compréhension de l’impact de TO. Dans ce cas, une méthode est présentée qui combine tous les avantages des modèles mentionnés précédemment et crée un modèle facile, potentiellement réversible, et peu envahissant de rongeur TO.
Protocol
Representative Results
Discussion
Cette méthode décrit une procédure chirurgicale d’occlusion trachéale foetale chez la souris et son impact sur le développement de poumon. Il y a quelques étapes critiques dans le protocole qui devraient être soigneusement exécutées pour réussir TO. La chaleur de la plate-forme sur laquelle la chirurgie a lieu et la solution saline introduite dans la cavité péritonéale est cruciale pour la progression de la grossesse. En outre, une légère pression doit être appliquée sur la tête des chiots pour assure…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Cette recherche n’a reçu aucune subvention spécifique d’organismes de financement des secteurs public, commercial ou sans but lucratif. Tous les auteurs ont apporté des contributions substantielles à la conception et à la conception de l’étude, à l’acquisition, à l’analyse et à l’interprétation des données, à la rédaction de l’article et à sa révision pour le contenu intellectuel important et l’approbation finale de la version à soumettre. Les auteurs remercient Can Sabuncuoğlu pour ses efforts aimables sur la production de l’œuvre d’art de la technique chirurgicale.
Materials
| Buprenorphine | Par Pharmaceutical | NDC 42023-179-05 | For regional anesthesia |
| Isoflurane | Halocarbon Life Sciences | NDC 66794-017-25 | For general anesthesia |
| Magnification glasses | USA Medical-Surgical | SLR-250LBLK | At least 2.5x |
| Nikon 90i microscope | Nikon | 3417 | Motorized Fluorescence |
| Nucleospin Tissue Kit | Macherey-Nagel, Düren, Germany | 740952.5 | DNA isolation |
| Pierce BCA Protein Assay Kit | Thermo Fisher, IL, USA | 23225 | Protein quantification |
| Polyglactin suture | Ethicon | VCP451H | 4-0, 24 mm, cutting |
| Polylysine slides | VWR | 48382-117 | Microscope adhesion slides |
| Polypropylene suture | Ethicon | Y432H | 6-0, 13 mm 1/2c Taperpoint |
| RIPA buffer | Sigma-Aldrich, Missouri, USA | R0278-50ml | Protein isolation |
| Silk suture | Ethicon | VCP682G | 4-0, 24 mm, cutting |
| Trizol | Invitrogen | 15596026 | RNA isolation |
References
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