कॉर्नियल एपिथेलियम की यांत्रिक और रासायनिक चोटों के लिए पूर्व विवो और विवो पशु मॉडल
Summary
यहां, माउस और खरगोश पर आधारित पशु मॉडल नए चिकित्सीय और अंतर्निहित तंत्र को स्क्रीन करने के लिए कॉर्नियल एपिथेलियम की यांत्रिक और रासायनिक चोट के लिए विकसित किए गए हैं।
Abstract
रासायनिक जलन और आघात सहित ओकुलर सतह पर कॉर्नियल चोट, गंभीर निशान, सिम्बलेफेरॉन, कॉर्नियल लिम्बल स्टेम कोशिकाओं की कमी का कारण बन सकती है, और इसके परिणामस्वरूप एक बड़ा, लगातार कॉर्नियल उपकला दोष हो सकता है। निम्नलिखित कॉर्नियल अस्पष्टता और परिधीय नियोवैस्कुलराइजेशन के साथ उपकला दोष के परिणामस्वरूप अपरिवर्तनीय दृश्य हानि होती है और भविष्य के प्रबंधन में बाधा आती है, विशेष रूप से केराटोप्लास्टी। चूंकि पशु मॉडल को एक प्रभावी दवा विकास मंच के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, माउस को कॉर्नियल चोट और खरगोश कॉर्नियल एपिथेलियम के लिए क्षार जलने के मॉडल यहां विकसित किए गए हैं। न्यूजीलैंड सफेद खरगोश का उपयोग क्षार जलने मॉडल में किया जाता है। सोडियम हाइड्रॉक्साइड की विभिन्न सांद्रता को इंट्रामस्क्युलर और सामयिक संज्ञाहरण के तहत 30 सेकंड के लिए कॉर्निया के केंद्रीय परिपत्र क्षेत्र पर लागू किया जा सकता है। प्रचुर मात्रा में आइसोटोनिक सामान्य खारा सिंचाई के बाद, अवशिष्ट ढीले कॉर्नियल एपिथेलियम को इस गोलाकार क्षेत्र के भीतर बोमन की परत तक कॉर्नियल बर्र के साथ हटा दिया गया था। घाव भरने को कोबाल्ट नीली रोशनी के तहत फ्लोरेसिन धुंधला करके प्रलेखित किया गया था। सी 57बीएल / 6 चूहों का उपयोग मुराइन कॉर्नियल एपिथेलियम के दर्दनाक मॉडल में किया गया था। मुराइन सेंट्रल कॉर्निया को 2 मिमी व्यास के त्वचा पंच का उपयोग करके चिह्नित किया गया था, और फिर स्टीरियोमाइक्रोस्कोप के तहत 0.5 मिमी के साथ कॉर्नियल रस्ट रिंग रिमूवर द्वारा डिब्रिड किया गया था। इन मॉडलों का उपयोग आंखों की बूंदों या स्टेम कोशिकाओं जैसे मिश्रित एजेंटों के चिकित्सीय प्रभाव को मान्य करने के लिए भावी प्रभाव से किया जा सकता है, जो संभावित रूप से कॉर्नियल उपकला पुनर्जनन की सुविधा प्रदान करते हैं। स्टीरियोमाइक्रोस्कोप और इमेजिंग सॉफ्टवेयर के साथ कॉर्नियल अस्पष्टता, परिधीय नियोवैस्कुलराइजेशन और नेत्रश्लेष्मला भीड़ का अवलोकन करके, इन पशु मॉडलों में चिकित्सीय प्रभावों की निगरानी की जा सकती है।
Introduction
मानव कॉर्निया में पांच प्रमुख परतें होती हैं और इंट्राओकुलर ऊतकों की रक्षा के लिए दृश्य तीक्ष्णता और संरचनात्मक अखंडता को बनाए रखने के लिए ओकुलर अपवर्तन में एक महत्वपूर्ण भूमिकानिभाता है। कॉर्निया का सबसे बाहरी हिस्सा कॉर्नियल एपिथेलियम है, जो कोशिकाओं की पांच से छह परतों से बना होता है जो क्रमिक रूप से बेसल कोशिकाओं से अलग होते हैं और ओकुलर सतह1 से बहने के लिए ऊपर की ओर बढ़ते हैं। मनुष्यों और न्यूजीलैंड खरगोशों में कॉर्निया की तुलना में, माउस कॉर्निया में एक समान कॉर्नियल संरचना होती है, लेकिन उपकला और स्ट्रोमा2 में कम मोटाई के कारण मध्य भाग की तुलना में पतली परिधि होती है। ओकुलर ऑप्टिक सिस्टम में इसकी अनूठी स्थिति के कारण, यांत्रिक चोट, जीवाणु टीकाकरण और रासायनिक एजेंट जैसे कई बाहरी अपमान आसानी से उपकला अखंडता को खतरे में डाल सकते हैं और आगे दृष्टि-धमकाने वाले उपकला दोष, संक्रामक केराटाइटिस, कॉर्नियल पिघलने और यहां तक कि कॉर्नियल वेध का कारण बन सकते हैं।
यद्यपि विभिन्न चिकित्सीय एजेंट, जैसे स्नेहक, एंटीबायोटिक्स, विरोधी भड़काऊ एजेंट, ऑटो-सीरम उत्पाद, और एमनियोटिक झिल्ली का उपयोग पहले से ही पुन: उपकलाकरण में सुधार और निशान को कम करने के लिए किया गया है, अन्य संभावित उपचार के तौर-तरीके जो घाव भरने, सूजन को कम करने और निशान गठन को दबाने में सक्षम हो सकते हैं, अभी भी विभिन्न प्लेटफार्मों पर विकसित और परीक्षण किए जा रहे हैं। कॉर्नियल एपिथेलियल घाव भरने के लिए विभिन्न पशु मॉडल प्रस्तावित किए गए हैं, जिनमें डायबिटिक माउस3 में कॉर्नियल रस्ट रिंग रिमूवर के साथ कॉर्नियल एपिथेलियम हटाने,बैक्टीरियल टीकाकरण के लिए बाँझ 25 जी सुई द्वारा माउस कॉर्नियल एपिथेलियम पर रैखिक खरोंच, कॉर्नियल रस्ट रिंग रिमूवर5 द्वारा कॉर्नियल एपिथेलियम का ट्रेफिन-असिस्टेड निष्कासन, कॉर्निया के आधे हिस्से से अधिक एपिथेलियल को हटाना और लिम्बस6 शामिल हैं। ट्रेफिन-सुविधा वाले खरगोश कॉर्नियल घर्षण एक सुस्त स्केलपेल ब्लेड7 द्वारा, और गोजातीय कॉर्निया की चोट तरल नाइट्रोजन8 में फ्लैश फ्रीजिंग द्वारा।
कॉर्नियल एपिथेलियम के लिए यांत्रिक चोट के अलावा, रासायनिक एजेंट ओकुलर सतह, विशेष रूप से अम्लीय और क्षार एजेंटों के लिए भी आम अपमान हैं। सोडियम हाइड्रॉक्साइड (30-60 एस के लिए एनएओएच, 0.1-1 एन) कॉर्नियल रासायनिक बर्न 9,10,11,12,13 के मुराइन और खरगोश मॉडल में आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले रसायनों में से एक है। चूहे के रासायनिक जलने के मॉडल में कॉर्निया पर 100% इथेनॉल भी लागू किया गया था, इसके बाद सर्जिकल ब्लेड14 का उपयोग करके अतिरिक्त यांत्रिक स्क्रैपिंग की गई थी। चूंकि एक स्वस्थ ओकुलर सतह का रखरखाव कार्यात्मक इकाइयों पर निर्भर करता है, जिसमें पलकें, मेबोमियन ग्रंथियां, लैक्रिमल सिस्टम, नेत्रश्लेष्मला और कॉर्निया शामिल हैं, विवो पशु मॉडल में विवो सुसंस्कृत कॉर्निया उपकला कोशिकाओं या कॉर्नियल ऊतकों पर कुछ गुण हैं। इस लेख में, कॉर्नियल घर्षण घाव का माउस मॉडल, और कॉर्नियल क्षार जलने का खरगोश मॉडल प्रदर्शित किया गया है।
Protocol
Representative Results
Discussion
कॉर्नियल चोट के माउस और खरगोश मॉडल घाव भरने की निगरानी, नए चिकित्सीय परीक्षण और घाव भरने और उपचार मार्गों के अंतर्निहित तंत्र का अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी पूर्व विवो और विवो प्लेटफॉर्म प्रदा?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
अध्ययन को ताइवान की परमाणु ऊर्जा परिषद (अनुदान संख्या ए-आईई-01-03-02-02-02), विज्ञान और प्रौद्योगिकी मंत्रालय (अनुदान संख्या एनएमआरपीजी 3 ई 6202-3), और चांग गुंग मेडिकल रिसर्च प्रोजेक्ट (अनुदान संख्या सीएमआरपीजी 3 एच 1281) द्वारा वित्त पोषित किया गया था।
Materials
| 6/0 Ethicon vicryl suture | Ethicon | 6/0VICRYL | tarsorrhaphy |
| Barraquer lid speculum | katena | K1-5355 | 15 mm |
| Barraquer needle holder | Katena | K6-3310 | without lock |
| Barron Vacuum Punch 8.0 mm | katena | K20-2108 | for cutting filter paper |
| C57BL/6 mice | National Laboratory Animal Center | RMRC11005 | mouse strain |
| Castroviejo forceps 0.12 mm | katena | K5-2500 | |
| Corneal rust ring remover with 0.5 mm burr | Algerbrush IITM; Alger Equipment Co., Inc. Lago Vista, TX | CHI-675 | for debridement of the corneal epithelium |
| Filter paper | Toyo Roshi Kaisha,Ltd. | 1.11 | |
| Fluorescein sodum ophthalmic strips U.S.P | OPTITECH | OPTFL100 | staining for corneal epithelial defect |
| Ketamine hydrochloride | Sigma-Aldrich | 61763-23-3 | intraperitoneal or intramuscular anesthetics |
| New Zealand White Rabbits | Livestock Research Institute, Council of Agriculture,Executive Yuan | Rabbit models | |
| Normal saline | TAIWAN BIOTECH CO., LTD. | 100-120-1101 | |
| Proparacaine | Alcon | ALC2UD09 | topical anesthetics |
| Skin biopsy punch 2mm | STIEFEL | 22650 | |
| Sodium chloride (NaOH) | Sigma-Aldrich | 1310-73-2 | a chemical agent for alkali burn |
| Stereomicroscope | Carl Zeiss Meditec, Dublin, CA | SV11 | microscope for surgery |
| Westcott Tenotomy Scissors Medium | katena | K4-3004 | |
| Xylazine hydrochloride 23.32 mg/10 mL | Elanco animal health Korea Co., LTD. | 047-956 | intraperitoneal or intramuscular anesthetics |
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