Summary

Administración de fármacos basada en bomba osmótica para la investigación de la remielinización in vivo en el sistema nervioso central

Published: December 17, 2021
doi:

Summary

La desmielinización tiene lugar en múltiples enfermedades del sistema nervioso central. Es necesaria una técnica confiable de administración de medicamentos in vivo para remielinizar las pruebas de drogas. Este protocolo describe un método basado en bomba osmótica que permite la administración de fármacos a largo plazo directamente en el parénquima cerebral y mejora la biodisponibilidad del fármaco, con una amplia aplicación en la investigación de la remielinización.

Abstract

La desmielinización se ha identificado no solo en la esclerosis múltiple (EM), sino también en otras enfermedades del sistema nervioso central como la enfermedad de Alzheimer y el autismo. Como la evidencia sugiere que la remielinización puede mejorar eficazmente los síntomas de la enfermedad, hay un enfoque creciente en el desarrollo de fármacos para promover el proceso de regeneración de la mielina. Por lo tanto, se requiere una técnica de administración de medicamentos seleccionable por región y confiable en los resultados para probar la eficiencia y la especificidad de estos medicamentos in vivo. Este protocolo introduce el implante de bomba osmótica como un nuevo enfoque de administración de fármacos en el modelo de ratón de desmielinización inducida por lisolecitina. La bomba osmótica es un pequeño dispositivo implantable que puede eludir la barrera hematoencefálica (BBB) y administrar medicamentos de manera constante y directa a áreas específicas del cerebro del ratón. También puede mejorar eficazmente la biodisponibilidad de medicamentos como péptidos y proteínas con una vida media corta. Por lo tanto, este método es de gran valor para el campo de la investigación de la regeneración de mielina del sistema nervioso central.

Introduction

La bomba osmótica es un pequeño dispositivo implantable de liberación de soluciones. Se puede utilizar para el parto sistémico cuando se implanta por vía subcutánea o en la cavidad abdominal. La superficie de la bomba osmótica es una membrana semipermeable, y su lado interno es una capa permeable. La bomba osmótica funciona utilizando la diferencia de presión osmótica entre la capa osmótica y el entorno del tejido donde se implanta la bomba. La alta osmolalidad de la capa osmótica hace que el agua en el tejido fluya hacia la capa osmótica a través de la membrana semipermeable en la superficie de la bomba. La capa osmótica se expande y comprime el depósito flexible dentro de la bomba, desplazando así la solución del depósito flexible a una cierta velocidad durante una larga duración1. La bomba tiene tres volúmenes de depósito diferentes, 100 μL, 200 μL y 2 mL, con sus tasas de entrega que varían de 0,11 μL/h a 10 μL/h. Dependiendo del tipo de bomba seleccionado, el dispositivo puede funcionar desde 1 día hasta 6 semanas2. En este protocolo, se utiliza una bomba osmótica de 100 μL con una velocidad de transferencia de 0,25 μL/h que puede funcionar durante 14 días.

En la década de 1970, la bomba osmótica se había utilizado en la investigación de la neurociencia 3,4. Por ejemplo, Wei et al. adoptaron el enfoque de bomba osmótica para inyectar péptidos opioides en el ventrículo en un estudio de adicción a las drogas3. Después de la mejora continua, la bomba osmótica ahora se ha utilizado en el estudio de la administración controlada de miles de medicamentos, incluidos péptidos, factores de crecimiento, drogas adictivas, hormonas, esteroides, anticuerpos, etc. Además, con catéteres especiales (brain infusion kits) conectados, se puede usar para la infusión dirigida a tejidos u órganos específicos, incluyendo la médula espinal, el cerebro, el bazo y el hígado 5,6,7.

En el estudio de la remielinización, se ha demostrado que muchos fármacos promueven la regeneración de mielina in vitro, pero la mayoría de ellos no han logrado efectos significativos in vivo, posiblemente debido a la falta de un método de administración adecuado. Los métodos de administración tradicionales como la inyección intraperitoneal, la inyección subcutánea y la administración intragástrica tienen limitaciones en la biodisponibilidad de los medicamentos. Además, algunos medicamentos tienen una permeabilidad deficiente de la barrera hematoencefálica, lo que socava su acceso al parénquima cerebral. Juntas, estas limitaciones requieren un nuevo método de entrega eficiente. En combinación con los kits de infusión cerebral, las bombas osmóticas pueden eludir la barrera hematoencefálica y administrar medicamentos directamente al cuerpo calloso, lo que mejora efectivamente la biodisponibilidad de los medicamentos, especialmente para algunos medicamentos polipeptídicos y proteicos con una vida media corta. Por lo tanto, la bomba osmótica como una nueva técnica de administración de fármacos es de gran valor para el campo de la investigación de la regeneración de mielina del sistema nervioso central. La aplicación de esta técnica se presentará en detalle a continuación.

Protocol

Todos los procedimientos con animales se llevaron a cabo bajo lineamientos y protocolos institucionales aprobados por el comité de bienestar y ética animal de la Tercera Universidad Médica Militar. 1. Establecimiento del modelo de ratón de desmielinización inducida por lisolecitina Prepare una solución de lisolecitina al 1% (también llamada L-α-lisofosfatidilcolina) con PBS estéril. Esterilizar tijeras, fórceps, hemostático curvo y otros instrume…

Representative Results

Para verificar el efecto de la bomba osmótica en la investigación de la regeneración de mielina, se creó un modelo de desmielinización inducida por lisolecitina en ratones P56, seguido de la implantación de bombas osmóticas que contienen UM206 (1 mg en solución salina al 1,5 ml al 0,9%), un péptido con una vida media corta y una permeabilidad deficiente a BBB que se ha informado recientemente que promueve la remielinización10 . Se utilizó solución salina al 0,9% como control. Catorce d…

Discussion

Este protocolo describe la bomba osmótica como una nueva técnica de administración de fármacos para la investigación de la regeneración de mielina, que puede administrar medicamentos directamente al sitio de tratamiento y permitir la administración constante de fármacos durante un período prolongado, creando una concentración estable de fármacos en el microambiente del sistema nervioso central en toda la duración experimental. En comparación con otros métodos de administración de fármacos, la bomba osmót…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Este trabajo fue apoyado por subvenciones de la Fundación Nacional de Ciencias de la Naturaleza de China (NSFC 32070964, 31871045) a J.N. y la Fundación de Investigación Básica de Shenzhen (JCYJ20210324121214039) a Y.S.

Materials

Anesthesia Air Pump RWD R510-29 E05818-006
Brain Infusion kit 3 ALZET 0008851 1-3 mm
Carprofen Macklin C830557-1g 5 mg/kg every 24 h
Erythromycin eye ointment Along technology YCKJ-RJ-024780 Cover the surface of the eyeballs during anesthesia
Erythromycin ointment pythonbio RG180
Gas Evacuation Apparatus RWD R546W E05518-002
L-α-Lysophosphatidylcholine Sigma L0906 Dissolve at 1% with sterile PBS
Microliter Syringe Hamilton 65460-05 Syringe Series:1700, 10 µL, 33 gauge
Micro-smotic pump model 1002 ALZET 0004317 0.25 µL per hour, 14 days
PBS (pH = 7.3) ORIGENE ZLI-9061
Pentobarbital sodium Shanghai Civi CAS NO: 57-33-0 150-200 mg/kg intraperitoneal injection for euthanasia
Small Animal Anesthesia Machine RWD R520IE E05807-006 M
Stereotaxic Equipment RWD E06382
STERI 250 sterilizer Keller 31101 Rapid sterilization of surgical instruments
Surgical sutures Shanghai jinhuan F504 5-0
Syringe needle (1 mL) Shanghai KDL 6930197811018 26 gauge (0.45 mm x 16 mm)
Testing drug and solvent Experiment dependent N/A
ThermoStar Homeothermic Monitoring System RWD 69026 Maintain body temperature during anesthesia
Vetbond Tissue adhesive 3M 1469SB Secure the brain infusion cannula , Adhere the skin incision

References

  1. Theeuwes, F., Yum, S. I. Principles of the design and operation of generic osmotic pumps for the delivery of semisolid or liquid drug formulations. Annals of Biomedical Engineering. 4 (4), 343-353 (1976).
  2. Herrlich, S., Spieth, S., Messner, S., Zengerle, R. Osmotic micropumps for drug delivery. Advanced Drug Delivery Reviews. 64 (14), 1617-1627 (2012).
  3. Wei, E., Loh, H. Physical dependence of opiate-like peptides. Science. 193 (4259), 1262-1263 (1976).
  4. Pettigrew, J. D., Kasamatsu, T. Local perfusion of noradrenaline maintains visual cortical plasticity. Nature. 271 (5647), 761-763 (1978).
  5. Wang, Y., et al. Reduced oligodendrocyte precursor cell impairs astrocytic development in early life stress. Advanced Science (Weinheim). 8 (16), 2101181 (2021).
  6. Tang, C., et al. Neural stem cells behave as a functional niche for the maturation of newborn neurons through the secretion of PTN. Neuron. 101 (1), 32-44 (2019).
  7. Watanabe, S., Komine, O., Endo, F., Wakasugi, K., Yamanaka, K. Intracerebroventricular administration of Cystatin C ameliorates disease in SOD1-linked amyotrophic lateral sclerosis mice. Journal of Neurochemistry. 145 (1), 80-89 (2018).
  8. DeVos, S. L., Miller, T. M. Direct intraventricular delivery of drugs to the rodent central nervous system. Journal of Visualized Experiments: JoVE. , e50326 (2013).
  9. Tang, C., Guo, W. Implantation of a mini-osmotic pump plus stereotactical injection of retrovirus to study newborn neuron development in adult mouse hippocampus. STAR Protocols. 2 (1), 100374 (2021).
  10. Niu, J., et al. Oligodendroglial ring finger protein Rnf43 is an essential injury-specific regulator of oligodendrocyte maturation. Neuron. 109 (19), 3104-3118 (2021).
  11. Breitschopf, H., Suchanek, G., Gould, R. M., Colman, D. R., Lassmann, H. In situ hybridization with digoxigenin-labeled probes: sensitive and reliable detection method applied to myelinating rat brain. Acta Neuropathologica. 84 (6), 581-587 (1992).
  12. Cree, B. A. C., et al. Clemastine rescues myelination defects and promotes functional recovery in hypoxic brain injury. Brain. 141 (1), 85-98 (2018).
  13. Eckenhoff, B., Yum, S. I. The osmotic pump: novel research tool for optimizing drug regimens. Biomaterials. 2 (2), 89-97 (1981).
  14. Thoenen, H., Sendtner, M. Neurotrophins: from enthusiastic expectations through sobering experiences to rational therapeutic approaches. Nature Neuroscience. 5, 1046-1050 (2002).
  15. Hagg, T. Intracerebral infusion of neurotrophic factors. Methods in Molecular Biology. 399, 167-180 (2007).
  16. Bittner, B., Thelly, T., Isel, H., Mountfield, R. J. The impact of co-solvents and the composition of experimental formulations on the pump rate of the ALZET osmotic pump. International Journal of Pharmaceutics. 205 (1-2), 195-198 (2000).
  17. Arnot, M. I., Bateson, A. N., Martin, I. L. Dimethyl sulfoxide/propylene glycol is a suitable solvent for the delivery of diazepam from osmotic minipumps. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 36 (1), 29-31 (1996).
  18. Gullapalli, R., et al. Development of ALZET osmotic pump compatible solvent compositions to solubilize poorly soluble compounds for preclinical studies. Drug Delivery. 19 (5), 239-246 (2012).
  19. White, J. D., Schwartz, M. W. Using osmotic minipumps for intracranial delivery of amino acids and peptides. Methods in Neurosciences. 21, 187-200 (1994).

Play Video

Cite This Article
Wang, X., Su, Y., Hu, X., Niu, J. Osmotic Pump-based Drug-delivery for In Vivo Remyelination Research on the Central Nervous System. J. Vis. Exp. (178), e63343, doi:10.3791/63343 (2021).

View Video