이 연구는 급성 신장 손상 연구를 위한 양측 신장 허혈 재관류의 마우스 모델의 기술적 개선에 중점을 둔 프로토콜을 수립했습니다.
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이 논문에서
요약
초록
심정지는 공중 보건에 큰 부담을 줍니다. 급성 신장 손상(AKI)은 성공적인 심폐 소생술 후 자연 순환 복귀(ROSC)에 따른 심정지 생존자의 부작용 지표입니다. 반대로, AKI에서 신장 기능의 회복은 양호한 신경학적 결과와 퇴원을 예측하는 변수입니다. 그러나 ROSC 후 심정지로 인한 신장 손상을 예방하기 위한 효과적인 중재가 부족하여 추가적인 치료 전략이 필요한 것으로 나타났다. 신장 저관류와 재관류는 심정지 후 AKI를 유발하는 두 가지 병태생리학적 기전입니다. 양쪽 신장의 허혈-재관류 유도 AKI(IR-AKI) 동물 모델은 임상 환경에서 ROSC 후 AKI 환자와 유사합니다. 그러나 두 신장의 IR-AKI는 모델이 높은 사망률과 신장 손상의 광범위한 변동과 관련이 있어 분석에 영향을 미칠 수 있기 때문에 기술적으로 분석하기 어렵습니다. 경량 마우스를 선택하여 이소플루란으로 전신 마취를 하고 배측 접근법으로 수술을 하고 수술 중 체온을 유지하여 조직 손상을 줄이고 재현 가능한 급성 신장 IR-AKI 연구 프로토콜을 확립했습니다.
서론
미국에서는 매년 80,000회 이상 심정지가 발생합니다 1,2. 심정지의 사망률은 매우 높습니다 3,4,5,6. AKI는 ROSC 7,8,9,10,11,12,13 후 심정지 환자의 높은 사망률 및 열악한 신경학적 결과와 관련된 주요 위험 인자입니다. AKI로부터의 회복은 양호한 신경학적 결과와 퇴원에 대한 좋은 예측 변수이다14,15,16....
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프로토콜
모든 동물 실험은 미국 국립보건원(National Institutes of Health)에서 발행한 실험동물 관리 및 사용 가이드(NIH publication no. 85-23, 1996년 개정)에 따라 수행되었습니다. 연구 프로토콜은 Fu-Jen Catholic University의 Institutional Animal Care and Use Committee의 지침에 따라 승인되었습니다. 이 프로토콜에 사용된 모든 재료 및 도구에 대한 자세한 내용은 재료 표를 참조하십시오.
1. 마우스 준비
- 체중이 21-23g인 8주 된 C57BL/6 수컷 마우스를 선택합니다.
- 음식, 표준 쥐 사료 알갱이 및 수돗물에 자유롭게 접근할 수 있는 제어된 온도(21 ± 2°C)에서 12시간 동안 밝고 어두운 주기로 쥐를 수용하고 유지합니다.
2. 마취
- 수술용 마스크와 멸균 장갑을 착용하십시오.
- 유도 챔버에서 1L/min의 속도로 산소와 혼합된 2% 이소플루란으로 마우스를 마취시킵니다.
- 페달 반사로 마취 수준....
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결과
양측 신장 IR-AKI 수술의 질은 추가 현미경 또는 분자 분석 전에 평가되어야 합니다. 수술 중 신장 허혈은 신장 척추경을 미세혈관 클립으로 고정한 직후 신장의 색이 분홍색에서 짙은 빨간색으로 변했는지 여부를 확인하여 확인해야 합니다(그림 1). 수술 후 IR-AKI 수술로 인한 신장 손상은 생화학적 분석을 위한 턱밑 혈액 채취를 통해 몇 마이크로리터의 혈청으로 추가로 검증할 수 있으며, 그 결과 기준선에서 혈중 요소, 질소 및 크레아티닌 수치가 증가한 것으로 나타났습니다(그림 2).
그림 1:.......
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토론
제안된 양측 IR-AKI 프로토콜은 양쪽 신장의 저관류 및 재관류 손상 메커니즘을 조사하는 데 적합합니다. 이 프로토콜은 가벼운 마우스, 이소플루란을 사용한 전신 마취, 수술에 대한 배측 접근 및 수술 중 체온 유지가 관련 기술적 어려움을 완화하고 수술 기간을 단축하며 급성 양측 신장 IR-AKI 연구를 위한 절차의 일관성을 높일 것을 제안합니다.
양측 신장 IR-AKI 수술에서 신장 손상 중증도에 영향을 미치는 기술적 어려움33. 마우스 변형, 성별, 연령 및 가열 시스템(36,40,41,42,43,44) 외에도 혈관 클램프의 적절한 배치는 일관된 결과를 위해 필수적입니다.
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공개 사항
저자는 이 기사의 출판과 관련하여 이해 상충이 없음을 선언합니다.
감사의 글
이 모델은 대만 과학기술부(MOST 109-2320-B-030-006-MY3)의 재정 지원으로 개발되었습니다. 이 원고는 Wallace Academic Editing에서 편집했습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 흡수성 봉합사, 6-0 | Ethicon | J510G-BX | |
| 베타딘 용액 | Shineteh Istrument | ||
| Carprofen | Sigma | PHR1452 | |
| 면봉 | Shineteh Istrument | ||
| Graefe 집게 | 파인 사이언스 도구 | 11051-10 | |
| 가열 패드 | Shineteh Istrument | ||
| Isoflurane | Piramal Critical Care Inc. | 26675-46-7 | |
| Moria 용기 클램프 | 미세 과학 도구 | 18320-11 | |
| Olsen-Hegar 바늘 홀더 | 미세 과학 도구 | 12002 - 12 | |
| 식염수 | Shineteh Istrument | ||
| 메스 블레이드 | Shinva | s2646 | |
| 소동물 마취 기계 | Sheng-Cing Instruments Co. | STEP AS-01 | |
| 티슈 가위 | 파인 사이언스 도구 | 14072 - 10 |
참고문헌
- Holmberg, M. J., et al. Annual incidence of adult and pediatric in-hospital cardiac arrest in the United States. Circulation: Cardiovascular Quality and Outcomes. 12 (7), 005580(2019).
- Benjamin, E. J., et al.
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재인쇄 및 허가
