Este protocolo descreve um modelo de rato com aneurisma da aorta abdominal induzido por fosfato de cálcio (AAA) para estudar as características patológicas e os mecanismos moleculares dos AAAs.
Um aneurisma da aorta abdominal (AAA) é uma doença cardiovascular com risco de vida que ocorre em todo o mundo e é caracterizada por dilatação irreversível da aorta abdominal. Atualmente, vários modelos de AAA murino quimicamente induzidos são usados, cada um simulando um aspecto diferente da patogênese do AAA. O modelo AAA induzido por fosfato de cálcio é um modelo rápido e custo-efetivo em comparação com os modelos AAA induzidos por angiotensina II e elastase. A aplicação de cristais de CaPO4 na aorta do rato resulta em degradação de fibras elásticas, perda de células musculares lisas, inflamação e deposição de cálcio associada à dilatação da aorta. Este artigo apresenta um protocolo padrão para o modelo AAA induzido por CaPO4. O protocolo inclui o preparo do material, a aplicação cirúrgica do CaPO4 na adventícia da aorta abdominal infrarrenal, a colheita de aortas para visualização de aneurismas da aorta e análises histológicas em camundongos.
Um aneurisma da aorta abdominal (AAA) é uma doença cardiovascular letal caracterizada por dilatação permanente da aorta abdominal, com altas taxas de mortalidade uma vez que ocorre a ruptura. O AAA está associado ao envelhecimento, tabagismo, sexo masculino, hipertensão arterial e hiperlipidemia1. Vários processos patológicos demonstraram contribuir para a formação de AAA, incluindo proteólise de fibra de matriz extracelular, infiltração de células imunes e perda de células musculares lisas vasculares. Atualmente, os mecanismos patológicos do AAA permanecem elusivos, e não há medicamentos comprovados para o tratamento do AAA1. A pesquisa em AAA humano é limitada devido à existência de poucas amostras de aorta humana; assim, vários modelos de AAA animal induzidos por modificação química foram estabelecidos e amplamente adotados, incluindo infusão subcutânea de angiotensina II (AngII), incubação de elastase perivascular ou intraluminal e aplicação de fosfato de cálcio perivascular2. Um modelo de camundongo comumente utilizado é a aplicação de fosfato de cálcio (CaPO4) na adventícia da aorta abdominal infrarrenal, que é custo-efetiva e não requer modificação genética.
A aplicação direta de CaCl2 na artéria carótida de coelhos para induzir alteração aneurismática foi inicialmente relatada por Gertz et al.3 e posteriormente aplicada nas aortas abdominais de camundongos. O modelo foi desenvolvido por Yamanouchi et al. para acelerar a dilatação da aorta utilizando cristais CaPO 4 em camundongos4. A infiltração de CaPO4 em aortas de camundongos recapitula muitas características patológicas observadas em AAAs humanos, incluindo infiltração profunda de macrófagos, degradação da matriz extracelular e deposição de cálcio. Os fatores de risco do AAA humano, como a hiperlipidemia, também aumentam o AAA induzido por CaPO4 em camundongos5. Em contraste com o AAA induzido por perfusão AngII em camundongos ApoE-/- ou LDLR-/-, o AAA induzido por CaPO 4 ocorre na região aórtica infrarrenal, que imita o AAA humano. Atualmente, esse método tem sido amplamente aplicado para avaliar a suscetibilidade ao desenvolvimento de AAA em camundongos geneticamente modificados e avaliar os efeitos anti-AAA de fármacos 6,7.
A aplicação periaórtica de CaPO4 é uma abordagem robusta para induzir AAA em camundongos. Vários estudos têm utilizado o modelo CaPO4 e consistentemente relatado que este é um método rápido e reprodutível para estudar AAA em camundongos 7,9. Este modelo é considerado para recapitular parte das características do aneurisma da aorta humana e fornecer insights mecanicistas sobre a patogênese AAA, incluindo inflamação e degradaç?…
Esta pesquisa foi apoiada pelo financiamento da Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (NSFC, 81730010, 91839302, 81921001, 31930056 e 91529203) e do Programa Nacional de P & D de Chaves da China (2019YFA 0801600).
CaCl2 | MECKLIN | C805225 | |
NaCl | Biomed | SH5001-01 | |
PBS | HARVEYBIO | MB5051 | |
Small animal ventilator | RWD | H1550501-012 |