Идентификация, диагностика и классификация злокачественных опухолей оболочки периферических нервов на генетически модифицированных мышиных моделях
Summary
Мы разработали методику оценки того, точно ли новообразования нервной системы у генетически модифицированных мышей повторяют патологию своих собратьев человека. Здесь мы применяем эти гистологические методы, определяемые патологические критерии и методологии культивирования к нейрофибромам и злокачественным опухолям оболочки периферических нервов, возникающим на мышиной модели P 0-GGFβ3.
Abstract
У пациентов с синдромом предрасположенности к аутосомно-доминантной опухоли нейрофиброматозом 1 типа (НФ1) обычно развиваются плексиформные нейрофибромы (ПН), которые впоследствии трансформируются в высокоагрессивные злокачественные опухоли оболочки периферических нервов (МПНСТ). Понимание процесса, с помощью которого ПП трансформируется в МПНСТ, будет облегчено наличием генетически модифицированных мышиных моделей (GEM), которые точно воспроизводят прогрессию ПН-МПНСТ, наблюдаемую у людей с НФ1. К сожалению, модели GEM с абляцией Nf1 не полностью повторяют этот процесс. Это привело нас к разработке мышей P 0-GGFβ3, модели GEM, в которой гиперэкспрессия митогена нейрегулина-1 шванновских клеток (NRG1) в шванновских клетках приводит к развитию ПН, которые с высокой частотой превращаются в MPNST. Однако, чтобы определить, точно ли опухолегенез и опухолевая прогрессия у мышей P 0-GGFβ3 моделируют процессы, наблюдаемые у пациентов с NF1, мы должны были сначала доказать, что патология опухолей оболочки периферических нервов P0-GGFβ3 повторяет патологию их человеческих аналогов.
В данной статье мы описываем специализированные методики, используемые для точной диагностики и классификации новообразований периферической нервной системы в моделях GEM, с использованием P 0-GGFβ3 и P0-GGFβ3; В качестве примера можно привести мышей Trp53+/-. Описаны гистологические, иммуногистохимические и гистохимические методы, применяемые для диагностики ПН и МПНСТ, как отличить эти новообразования от других типов опухолей, имитирующих их патологию, и как классифицировать эти новообразования. Мы обсуждаем создание ранних пассажных культур из GEM MPNST, как характеризовать эти культуры с помощью иммуноцитохимии и как проверить их опухолегенность путем создания аллотрансплантатов. В совокупности эти методы характеризуют патологию ПН и МПНСТ, возникающих в моделях GEM, и критически сравнивают патологию этих мышиных опухолей с их человеческими аналогами.
Introduction
За последние три десятилетия многочисленные лаборатории пытались создать мышиные модели рака человека, вводя в геном мыши мутации, связанные с раком, или чрезмерно экспрессируя генный продукт, который чрезмерно экспрессируется в раковых опухолях человека. Полученные генетически модифицированные модели мышей (GEM) могут быть использованы для различных целей, таких как установление того, что вновь введенная геномная модификация инициирует опухолегенез, выявление других впоследствии происходящих генетических или эпигенетических изменений, которые способствуют прогрессированию опухоли, и определение ключевых сигнальных путей, которые управляют инициацией и прогрессированием опухоли. В отличие от ортотопических ксенотрансплантатов, которые основаны на использовании мышей с иммунодефицитом, модели рака GEM имеют полностью функциональную иммунную систему и, таким образом, более точно моделируют реакцию на потенциальные терапевтические агенты. Тем не менее, при использовании GEM-моделей рака для подобных целей важно, чтобы исследователи подтвердили, что наблюдения, сделанные с новообразованиями GEM, имеют отношение к их человеческим аналогам. Эта валидация должна включать в себя тщательную оценку патологии новообразований ГЭМ и определение того, повторяют ли патологические особенности новообразований ГЭМ патологию соответствующего типа опухоли человека.
Синдром предрасположенности к опухолям нейрофиброматоз 1 типа (НФ1) является наиболее распространенным генетическим заболеванием, поражающим нервную систему человека, встречающимся примерно у 1 из каждых 3000-3500 живорожденных 1,2,3. У людей, страдающих НФ1, развиваются множественные доброкачественные опухоли оболочки периферических нервов, известные как нейрофибромы, на коже (дермальные нейрофибромы) и в крупных нервах и нервных сплетениях (плексиформные нейрофибромы). В то время как как кожные и плексиформные нейрофибромы ухудшают качество жизни пациента, вызывая физические, поведенческие и/или социальные нарушения, плексиформные нейрофибромы (ПН) особенно опасны 4,5. Это связано с тем, что ПП часто трансформируются в злокачественные опухоли оболочки периферических нервов (МПНСТ), которые являются агрессивными веретеноклеточными новообразованиями с исключительно низкой выживаемостью 1,2. В значительной степени такая низкая выживаемость объясняется тем, что радио- и химиотерапевтические схемы, которые в настоящее время используются для лечения МПНСТ, неэффективны. Тем не менее, разработка новых, более эффективных методов лечения является сложной задачей. Это связано с тем, что, несмотря на то, что MPNST часто встречаются у пациентов с НФ1, они все еще являются редкими новообразованиями. В результате очень трудно получить большое количество опухолей человека для изучения; Кроме того, сложно набрать достаточное количество пациентов с МПНСТ для клинических испытаний. Для преодоления этих ограничений было создано несколько моделей GEM с целью получения более глубокого представления об аномалиях, лежащих в основе патогенеза нейрофибромы и прогрессирования PN-MPNST, а также для содействия доклиническим испытаниям потенциальных терапевтических агентов.
У пациентов с НФ1 наблюдаются инактивирующие мутации в одной копии гена НФ1. Патогенез нейрофибромы запускается, когда в клетке шванновской клеточной линии происходит инактивирующая мутация в оставшемся функциональном гене NF1. Удивительно, однако, что когда у мышей были получены мутации Nf1, инактивирующие зародышевую линию, у них не развились нейрофибромы 6,7. Последующая демонстрация того, что мыши с Nf1-нулевыми шванновскими клетками и гаплонедостаточностью Nf1 во всех других типах клеток (Krox20-Cre;У мышей Nf1flox/- развились плексиформные нейрофибромы, что позволило предположить, что для патогенеза нейрофибромы требуется снижение дозы гена Nf1 в дополнительных типах клеток8. Даже в этом случае плексиформные нейрофибромы в Krox20-Cre; Мыши Nf1flox/- не прогрессировали, чтобы стать MPNST, и поэтому лишь частично имитировали биологию своих человеческих собратьев. Патогенез MPNST действительно возникал, когда мутации Nf1 сочетались с мутациями в дополнительных генах-супрессорах опухолей, таких как Trp539 или Cdkn2a10, но MPNST в этих моделях GEM развивались de novo или из атипичных нейрофиброматозных новообразований с неопределенным биологическим потенциалом (ANNUBPs)11,12, а не из ранее существовавших доброкачественных плексиформных нейрофибром (см.13,14 за отличные обзоры этих моделей, а также других моделей, вводящих дополнительные мутации с потерей функции MPNST, связанные с потерей функции в генах, таких как Suz12 и Pten15).
Эти мышиные модели были неоценимы для установления роли таких генов, как NF1, TP53 и CDKN2A, в патогенезе NF1-ассоциированных новообразований периферической нервной системы, а также для доклинических испытаний потенциальных терапевтических агентов. Тем не менее, у нас все еще есть неполное понимание процесса, посредством которого плексиформные нейрофибромы прогрессируют, превращаясь в атипичные нейрофиброматозные новообразования с неопределенным биологическим потенциалом (ANNUBPs 16), а затем в MPNST. Недавно был достигнут некоторый прогресс в понимании этого процесса, в связи с недавним сообщением о том, что у мышей с делециями в Nf1 и Arf развиваются ANNUBP, которые прогрессируют, чтобы стать MPNST11. Тем не менее, мышиных моделей, основанных на мутации Nf1, которые полностью повторяют процесс прогрессирования плексиформной нейрофибромы-MPNST, наблюдаемого у людей, пока не существует. Кроме того, неясно, существует ли несколько различных путей, которые приводят к развитию MPNST. Учитывая это, вполне возможно, что описанные выше ГЭМ моделируют только подмножество нескольких различных путей, которые приводят к прогрессированию нейрофибромы-МПНСТ и патогенезу МПНСТ. Этот момент подчеркивается тем фактом, что MPNST также встречаются спорадически и что некоторые спорадические MPNST, по-видимому, не имеют мутаций NF1 17,18.
Несмотря на то, что последнее утверждение было оспорено недавним предположением Magollon-Lorenz et al. о том, что, по крайней мере, некоторые спорадические MPNST, лишенные мутаций NF1 , являются меланомами или другим типом саркомы19, мы недавно сообщили о спорадическом MPNST и клеточной линии, полученной из этой опухоли (клетки 2XSB), которая была NF1 дикого типа20. При характеристике родительской опухоли и клеточной линии 2XSB мы систематически исключали альтернативные диагностические возможности, включая меланому и множество других типов саркомы, которые обычно рассматриваются в дифференциальной диагностике спорадической злокачественной опухоли оболочки периферических нервов20. Кроме того, мы отмечаем, что Magollon-Lorenz et al. признали, что их результаты в трех спорадических клеточных линиях MPNST, которые они изучали, не могут быть обобщены, чтобы указать, что все опухоли, идентифицированные как спорадические MPNST, не являются MPNST.
Для построения модели GEM, в которой патогенез нейрофибромы и MPNST не обязательно зависел от специфических мутаций генов-супрессоров опухолей, мы создали трансгенных мышей, у которых гиперэкспрессия мощного митогенного нейрегулина-1 (NRG1) из шванновских клеток была обусловлена промотором шванновского клеточного миелинового белка ноль (P0) (мыши P 0-GGFβ3)21. Ранее мы показали, что нейрофибромы человека, MPNST и клеточные линии MPNST экспрессируют несколько изоформ NRG1 вместе с тирозинкиназами рецептора erbB (erbB2, erbB3 и erbB4), которые опосредуют передачу сигналов NRG1, и что эти рецепторы erbB конститутивно активированы22. Мы также продемонстрировали, что фармакологические ингибиторы киназ erbB мощно ингибируют пролиферацию MPNST22, выживаемость23 и миграцию24. В соответствии с нашими наблюдениями на людях, у мышей с P 0-GGFβ3 развиваются плексиформные нейрофибромы25, которые прогрессируют в MPNST с высокой частотой21,25. Мы показали, что P0-GGFβ3 MPNST, как и их человеческие аналоги, обычно развивают мутации Trp53 и Cdkn2a, а также множество других геномных аномалий, которые потенциально способствуют опухолегенезу25. MPNST, возникающие у мышей P 0-GGFβ3, не имеют инактивирующих мутаций Nf1. Однако, используя генетическую комплементацию, мы показали, что NRG1 способствует опухолегенезу у мышей P 0-GGFβ3 преимущественно через те же сигнальные каскады, которые изменяются при потере Nf1 26; Этот вывод основан на нашем выводе о том, что замена гиперэкспрессии NRG1 на потерю Nf1 в присутствии гаплонедостаточности Trp53 (P 0-GGFβ3;Trp53+/- мышей) продуцирует животных, у которых MPNST развиваются de novo, как это наблюдается у цис-Nf1+/-; Trp53+/- мыши27.
Для получения этой и другой информации, демонстрирующей, что мыши с P 0-GGFβ3 точно моделируют процессы патогенеза нейрофибромы и прогрессирования нейрофибромы-MPNST, наблюдаемые у людей с НФ1, нами были разработаны специализированные методики обработки тканей этих животных, точной диагностики их опухолей, классификации МПНСТ, возникающих у этих мышей, установления и характеристики раннего пассажа P0-GGFβ3 и P0-GGFβ3; Культуры Trp53+/- MPNST и критическое сравнение патологии P0-GGFβ3 PNs и MPNST и P0-GGFβ3; Trp53+/- MPNST к их человеческим аналогам. Многие из этих методологий могут быть обобщены на другие модели неоплазии нервной системы GEM. Кроме того, некоторые из этих методологий более широко применимы к моделям GEM, в которых новообразования возникают в других органах. Следовательно, здесь мы приводим подробное описание этих методологий.
Protocol
Representative Results
Discussion
Представленные здесь гистологические и биохимические методы обеспечивают основу для диагностики и характеристики GEM-моделей нейрофибромы и патогенеза MPNST. На протяжении многих лет мы обнаружили, что эти методики весьма полезны для оценки патологии опухолей оболочки периферических н?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана грантами Национального института неврологических заболеваний и инсульта (R01 NS048353 и R01 NS109655 S.L.C.; R01 NS109655-03S1 в D.P.J.), Национальный институт рака (R01 CA122804 в S.L.C.) и Министерство обороны (X81XWH-09-1-0086 и W81XWH-12-1-0164 в S.L.C.).
Materials
| 100 mm Tissue Culture Plates | Corning Falcon | 353003 | |
| 3, 3'- Diaminobensidine (DAB) | Vector Laboratories | SK-400 | |
| 6- well plates | Corning Costar | 3516 | |
| Acetic Acid | Fisher Scientific | A38-212 | |
| Alexa Fluor 488 Secondary (Goat Anti-Mouse) | Invitrogen | A11029 | |
| Alexa Fluor 568 Secondary (Goat Anti-Mouse) | Invitrogen | A21043 or A11004 | |
| Alexa Fluor 568 Secondary (Goat Anti-Rabbit) | Invitrogen | A11036 | |
| Ammonium Chloride (NH4Cl) | Fisher Scientific | A661-500 | |
| BCA Protein Assay Kit | Thermo Scientific | 23225 | |
| Bovine Serum Albumin | Fisher Scientific | BP1600-100 | |
| Caldesmon | ABCAM | E89, ab32330 | |
| CD117 | Cell Marque | 117R-18-ASR | |
| CD163 | Leica | NCL-L-CD163 | |
| CD31 | ABCAM | ab29364 | |
| CD34 | ABCAM | ab81289 | |
| CD86 | ABCAM | ab53004 | |
| Cell Scraper | Sarstedt | 83.183 | |
| Cell Stripper | Corning | 25-056-CI | |
| Circle Coverslip | Fisher Scientific | 12-545-100 | |
| Citrisolve Hybrid (d-limonene-based solvent) | Decon Laboratories | 5989-27-5 | |
| Critic Acid | Fisher Scientific | A104-500 | |
| Cytokeratin | ABCAM | C-11, ab7753 | |
| Desmin | Agilent Dako | clone D33 (M0760) | |
| Diaminobensizdine (DAB) Solution | Vector Laboratories | SK-4100 | |
| DMEM | Corning | 15-013-CV | |
| Eosin Y | Thermo Scientific | 7111 | |
| Ethanol (200 Proof) | Decon Laboratories | 2716 | |
| Fetal Calf Serum | Omega Scientific | FB-01 | |
| Forksolin | Sigma-Aldrich | F6886 | |
| Glycerol | Sigma-Aldrich | G6279 | |
| Hank's Balanced Salt Solution (HBSS) | Corning | 21-022-CV | |
| Harris Hematoxylin | Fisherbrand | 245-677 | |
| Hemacytometer | Brightline-Hauser Scientific | 1490 | |
| Hydrochloric Acid | Fisher Scientific | A144-212 | |
| Hydrogen Peroxide | Fisher Scientific | 327-500 | |
| Iba1 | Wako Chemicals | 019-19741 | |
| ImmPRESS HRP (Peroxidase) Polymer Kit ,Mouse on Mouse | Vector Laboratories | MP-2400 | |
| ImmPRESS HRP (Peroxidase) Polymer Kit, Horse Anti-Rabbit | Vector Laboratories | MP-7401 | |
| Incubator | Thermo Scientific | Heracell 240i CO2 incubator | |
| Isoflurane | Piramal | NDC 66794-017-25 | |
| Isopropanol | Fisher Scientific | A415 | |
| Ki-67 | Cell Signaling | 12202 | |
| Laminin | Thermo Fisher Scientific | 23017015 | |
| Liquid Nitrogen | |||
| MART1 | ABCAM | M2-9E3, ab187369 | |
| Microtome | |||
| Nestin | Millipore | Human: MAD5236 (10C2), Human:MAB353 (Rat-401) | |
| Neuregulin 1 beta | In house | Made by S.L.C. (also available as 396-HB-050/CF from R&D Systems) | |
| Neurofibromin | Santa Cruz Biotechnology | sc-67 | |
| NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ mice | Jackson Laboratory | 5557 | |
| Nonfat Dry Milk | Walmart | Great Value Brand | |
| P0-GGFβ3 mice | In house | ||
| Paraffin Wax | Leica | Paraplast 39601006 | |
| Parafilm M | Sigma-Aldrich | PM-999 | |
| Paraformaldehyde (4%) | Thermo Scientific | J19943-K2 | |
| Permount (Xylene Mounting Medium) | Fisher Scientific | SP15-100 | |
| pH Meter | Mettler Toldedo | Seven Excellence, 8603 | |
| Phosphate Buffered Saline (Dulbecco's) | Corning | 20-031-CV | |
| PMEL | ABCAM | EP4863(2), ab137078 | |
| Poly-L-Lysine Hydrobromide | Sigma-Aldrich | P5899-5MG | |
| Portable Isoflurance Machine | VetEquip Inhalation Anesthesia Systems | ||
| PVA-DABCO (Aqueous Mounting Medium) | Millipore Sigma | 10981100ML | |
| Rice Cooker | Beech Hamilton | ||
| S100B | Agilent Dako | Z0311 (now GA504) | |
| SMA | Ventana Medical Systems | clone 1A4 | |
| Sodium Chloride | Fisher Scientific | S640 | |
| Sodium Citrate (Dihydrate) | Fisher Scientific | BP327-1 | |
| Sox10 | ABCAM | ab212843 | |
| Steel histology mold | |||
| Superfrost Plus Microscope Slides | Fisher Scientific | 12-550-15 | |
| TCF4/TCFL2 | Cell Signaling | (CH48H11) #2569 | |
| Tissue Cassette | |||
| Toluidine Blue | ACROS Organics | 348600050 | |
| Triton X-100 | Fisher Scientific | BP151-500 | |
| TRIzol | Invitrogen | 15596026 | |
| Trypsin | Corning | 25-051-31 |
References
- Carroll, S. L. Molecular mechanisms promoting the pathogenesis of Schwann cell neoplasms. Acta Neuropathologica. 123 (3), 321-348 (2012).
- Longo, J. F., Weber, S. M., Turner-Ivey, B. P., Carroll, S. L. Recent advances in the diagnosis and pathogenesis of neurofibromatosis type 1 (NF1)-associated peripheral nervous system neoplasms. Advances in Anatomic Pathology. 25 (5), 353-368 (2018).
- Longo, J. F., Carroll, S. L. The RASopathies: Biology, genetics and therapeutic options. Advances in Cancer Research. 153, 305-341 (2022).
- Boyd, K. P., Korf, B. R., Theos, A. Neurofibromatosis type 1. Journal of the American Academy of Dermatology. 61 (1), 1-16 (2009).
- Rad, E., Tee, A. R. Neurofibromatosis type 1: Fundamental insights into cell signalling and cancer. Seminars in Cell and Developmental Biology. 52, 39-46 (2016).
- Brannan, C. I., et al. Targeted disruption of the neurofibromatosis type-1 gene leads to developmental abnormalities in heart and various neural crest-derived tissues. Genes and Development. 8 (9), 1019-1029 (1994).
- Jacks, T., et al. Tumour predisposition in mice heterozygous for a targeted mutation in Nf1. Nature Genetics. 7 (3), 353-361 (1994).
- Zhu, Y., Ghosh, P., Charnay, P., Burns, D. K., Parada, L. F. Neurofibromas in NF1: Schwann cell origin and role of tumor environment. Science. 296 (5569), 920-922 (2002).
- Cichowski, K., et al. Mouse models of tumor development in neurofibromatosis type 1. Science. 286 (5447), 2172-2176 (1999).
- Joseph, N. M., et al. The loss of Nf1 transiently promotes self-renewal but not tumorigenesis by neural crest stem cells. Cancer Cell. 13 (2), 129-140 (2008).
- Rhodes, S. D., et al. Cdkn2a (Arf) loss drives NF1-associated atypical neurofibroma and malignant transformation. Human Molecular Genetics. 28 (16), 2752-2762 (2019).
- Chaney, K. E., et al. Cdkn2a loss in a model of neurofibroma demonstrates stepwise tumor progression to atypical neurofibroma and MPNST. 암 연구학. 80 (21), 4720-4730 (2020).
- Mohamad, T., Plante, C., Brosseau, J. P. Toward understanding the mechanisms of malignant peripheral nerve sheath tumor development. International Journal of Molecular Science. 22 (16), 8620 (2021).
- Somatilaka, B. N., Sadek, A., McKay, R. M., Le, L. Q. Malignant peripheral nerve sheath tumor: models, biology, and translation. Oncogene. 41 (17), 2405-2421 (2022).
- Keng, V. W., et al. Conditional inactivation of Pten with EGFR overexpression in Schwann cells models sporadic MPNST. Sarcoma. 2012, 620834 (2012).
- Miettinen, M. M., et al. Histopathologic evaluation of atypical neurofibromatous tumors and their transformation into malignant peripheral nerve sheath tumor in patients with neurofibromatosis 1-a consensus overview. Human Pathology. 67, 1-10 (2017).
- Lee, W., et al. PRC2 is recurrently inactivated through EED or SUZ12 loss in malignant peripheral nerve sheath tumors. Nature Genetics. 46 (11), 1227-1232 (2014).
- Zhang, M., et al. Somatic mutations of SUZ12 in malignant peripheral nerve sheath tumors. Nature Genetics. 46 (11), 1170-1172 (2014).
- Magallon-Lorenz, M., et al. Deep genomic analysis of malignant peripheral nerve sheath tumor cell lines challenges current malignant peripheral nerve sheath tumor diagnosis. iScience. 26 (2), 106096 (2023).
- Longo, J. F., et al. Establishment and genomic characterization of a sporadic malignant peripheral nerve sheath tumor cell line. Scientific Reports. 11 (1), 5690 (2021).
- Huijbregts, R. P., Roth, K. A., Schmidt, R. E., Carroll, S. L. Hypertrophic neuropathies and malignant peripheral nerve sheath tumors in transgenic mice overexpressing glial growth factor beta3 in myelinating Schwann cells. Journal of Neuroscience. 23 (19), 7269-7280 (2003).
- Stonecypher, M. S., Byer, S. J., Grizzle, W. E., Carroll, S. L. Activation of the neuregulin-1/ErbB signaling pathway promotes the proliferation of neoplastic Schwann cells in human malignant peripheral nerve sheath tumors. Oncogene. 24 (36), 5589-5605 (2005).
- Kohli, L., et al. The pan erbB inhibitor PD168393 enhances lysosomal dysfunction-induced apoptotic death in malignant peripheral nerve sheath tumor cells. Neuro-Oncology. 14 (3), 266-277 (2012).
- Eckert, J. M., Byer, S. J., Clodfelder-Miller, B. J., Carroll, S. L. Neuregulin-1 beta and neuregulin-1 alpha differentially affect the migration and invasion of malignant peripheral nerve sheath tumor cells. Glia. 57 (14), 1501-1520 (2009).
- Kazmi, S. J., et al. Transgenic mice overexpressing neuregulin-1 model neurofibroma-malignant peripheral nerve sheath tumor progression and implicate specific chromosomal copy number variations in tumorigenesis. American Journal of Pathology. 182 (3), 646-667 (2013).
- Brosius, S. N., et al. Neuregulin-1 overexpression and Trp53 haploinsufficiency cooperatively promote de novo malignant peripheral nerve sheath tumor pathogenesis. Acta Neuropathologica. 127 (4), 573-591 (2014).
- Vogel, K. S., et al. Mouse tumor model for neurofibromatosis type 1. Science. 286 (5447), 2176-2179 (1999).
- Reuss, D. E., et al., Louis, D. N., et al. Malignant peripheral nerve sheath tumour (MPNST). WHO Classification of Tumours of the Central Nervous System, Revised 4th Edition. , 226-229 (2016).
- Landuzzi, L., Ruzzi, F., Lollini, P. L., Scotlandi, K. Synovial sarcoma preclinical modeling: integrating transgenic mouse models and patient-derived models for translational research. Cancers. 15 (3), 588 (2023).
- Cohen, P. R., Rapini, R. P., Farhood, A. I. Expression of the human hematopoietic progenitor cell antigen CD34 in vascular and spindle cell tumors. Journal of Cutaneous Pathology. 20 (1), 15-20 (1993).
- Weiss, S. W., Nickoloff, B. J. CD-34 is expressed by a distinctive cell population in peripheral nerve, nerve sheath tumors, and related lesions. American Journal of Surgical Pathology. 17 (10), 1039-1045 (1993).
- Longo, J. F., Brosius, S. N., Carroll, S. L. Defining gene functions in tumorigenesis by ex vivo ablation of floxed alleles in malignant peripheral nerve sheath tumor cells. Journal of Visualized Experiments. (174), (2021).
- Hoffman, G. E., Murphy, K. J., Sita, L. V. The importance of titrating antibodies for immunocytochemical methods. Current Protocols in Neuroscience. 76, 2.12.1-2.12.37 (2016).
- Brossier, N. M., Carroll, S. L. Genetically engineered mouse models shed new light on the pathogenesis of neurofibromatosis type I-related neoplasms of the peripheral nervous system. Brain Research Bulletin. 88 (1), 58-71 (2012).
