Имитация метода Дина на мышечных повреждениях, индуцированных нотексином, у крыс

Summary

Этот протокол описывает простое устройство, которое имитирует метод Дина, создает модель травмы скелетных мышц на крысах и использует окрашивание гематоксилин-эозином для наблюдения за патологией поврежденных тканей и иммуноферментный анализ для обнаружения изменений в маркерах повреждения сыворотки.

Abstract

Метод ролла Дина является одной из наиболее часто используемых манипуляций в клиниках традиционного китайского массажа (Туйна) и одной из самых влиятельных современных манипуляций Туйна в Китае. Он основан на традиционном методе прокатки, обычно используемом в жанре однопальцевого дзен и названном методом ролла Дина. Благодаря своему противовоспалительному и стимулирующему кровообращение эффекту, роликовый метод Дина оказывает сильное терапевтическое воздействие на миопатию. Из-за большой площади силы, приложенной к человеческой коже, метод Дина трудно применить на экспериментальных животных с небольшими участками кожи, таких как крысы и кролики. Кроме того, сила Туины, применяемая к человеческому телу, отличается от силы, применяемой к экспериментальным животным, поэтому может случиться так, что сила будет слишком высокой или слишком низкой для достижения терапевтического эффекта Туины во время эксперимента. Этот эксперимент направлен на создание простого массажера, подходящего для крыс, на основе параметров манипуляций Дина (сила, частота, продолжительность Tuina). Устройство может стандартизировать манипуляции в экспериментах на животных и уменьшить вариации силы Туина, применяемой к разным животным из-за субъективных факторов. Была создана модель нотексин-индуцированного повреждения скелетных мышц на крысах, а маркеры плазменного повреждения креатинкиназы (КФК) и белка, связывающего жирные кислоты 3 (FABP3), были использованы для оценки терапевтического эффекта Туина при повреждении скелетных мышц. Результаты показали, что этот массажер Tuina может снизить уровни экспрессии CK и FABP3 и замедлить степень повреждения скелетных мышц. Таким образом, описанный здесь массажер Tuina, имитирующий метод Дина Дина, вносит свой вклад в стандартизацию манипуляций Tuina в экспериментальных исследованиях и является большим подспорьем для последующих исследований молекулярного механизма Tuina при миопатии.

Introduction

Мышечные повреждения являются распространенными травматическими повреждениями в клинической и повседневной жизни, вызванными внешними ударами (ушибами) или хроническим перенапряжением мышечных волокон (растяжениями) и т.д., приводящими к мышечной дисфункции и боли, даже серьезно влияющим на качество жизни пациента¹. Как можно более раннее начало реабилитации после острой травмы является ключом к сокращению времени возвращения к занятиям спортом² и уменьшению боли ^3,4. В современной западной медицине клиническая первая помощь при мышечных травмах следует принципам покоя, льда, сжатия и подъема (RICE) для остановки вредного кровотечения в мышечную^{ткань 5 и} нестероидных противовоспалительных препаратов для облегчения боли⁶. Открытие новых методов лечения, таких как экзосомы⁷ и тканевая инженерия⁸, стало потенциальными стратегиями лечения заболеваний скелетных мышц, компенсируя недостатки предыдущих фармакологических методов лечения. Однако это также может привести к увеличению стоимости лечения для пациентов, оказывая на них огромное финансовое давление⁹. Поэтому для лечения проблем опорно-двигательного аппарата рекомендуются альтернативные и дополнительные методы лечения¹⁰. Туйна широко используется клинически в Китае как традиционный медицинский метод и популярен среди пациентов благодаря своей эффективности и меньшему количеству побочных эффектов. Терапия Tuina при заболеваниях опорно-двигательного аппарата может облегчить боль и улучшить функцию^11,12,13. Г-н Дин Цзифэн, известный шанхайский практик туйна, основал метод Дина¹⁴. Это уникальная техника прокатки и дробления с большой площадью силы, равномерным и щадящим усилием и интенсивным проникновением.

Различные модели животных основаны на разной этиологии. У них есть свои преимущества и недостатки, и выбор правильных и подходящих моделей животных имеет большое значение для базовых экспериментов, что помогает понять клеточные и молекулярные сигнальные пути регенерации и восстановления после травмы скелетных мышц для разработки новых методов лечения заболеваний скелетных мышц. Широко используются химически индуцированные модели мышечных повреждений, при этом инъекции скелетных мышц вызывают некроз миоволокон и создают регенерированные области, которые могут эффективно регенерироваться в течение 2^{недель15}. Как нотексин, так и бупивакаин могут вызывать повреждение мышц. Тем не менее, нотексин может вызывать более серьезное миотоксическое повреждение скелетных мышц, чем бупивакаин, и естественное функциональное восстановление происходит относительно медленнее¹⁶. Внутримышечное литье препарата под давлением не только занимает меньше времени, но и имеет контролируемый эффект и степень повреждения скелетной мускулатуры. Этот количественный контроль делает успешное формование менее сложным^15,17.

Воспалительная реакция является важной биологической реакцией, которая была широко изучена в контексте миопатии^18,19. На ранних стадиях повреждения скелетных мышц некроз миоволокна нарушает локальный гомеостаз мышц, и многие воспалительные клетки проникают в место повреждения, секретируя множество провоспалительных цитокинов¹⁹. Креатинкиназа (КФК) является традиционным сывороточным биомаркером для оценки повреждений скелетных мышц. Однако ему не хватает тканевой специфичности²⁰ и чувствительности²¹, что ограничивает его способность оценивать степень вызванного лекарственными препаратами повреждения мышц и косвенно сообщать о степени восстановления мышц после травмы. Новые биомаркеры, в том числе белок, связывающий жирные кислоты 3 (FABP3), недавно показали относительно высокую тканевую специфичность и чувствительность в моделях повреждений скелетных мышц у грызунов. FABP3 представляет собой семейство связывающих белков, экспрессируемых в основном в клетках сердца и скелетных мышц и участвующих в метаболизме жирных кислот, транспорте и передаче сигналов²². Поэтому мы выбрали комбинацию двух биомаркеров, CK и FABP3, для оценки степени индуцированного нотексином повреждения скелетных мышц и восстановления после лечения.

У грызунов мышцы неглубокие, а площадь кожи небольшая, что также обуславливает то, что различные параметры массажа у грызунов не будут такими же, как у людей, например, в анималотерапии, массажист должен обрабатывать их с меньшей силой, используя метод валика Дина, и может не способствовать работе этой техники из-за небольшого размера травмированного участка, что в конечном итоге может привести к снижению эффективности массажа. Таким образом, в эксперименте использовался роликовый массажер собственного производства, который соответствует характеристикам валкового метода Дина, чтобы вмешаться и оценить терапевтический эффект модели травмы скелетных мышц, индуцированной нотексином, у крыс, что помогает стандартизировать параметры Tuina в экспериментальных исследованиях на животных с целью глубокого изучения молекулярного механизма действия Tuina. метод лечения заболеваний опорно-двигательного аппарата традиционной китайской медицины.

Protocol

Процедуры с участием животных были одобрены Комитетом по уходу и использованию в учреждениях Хунаньского университета китайской медицины. 1. Сборка роликового массажера Выберите массажер, состоящий из резинового валика, держателя вилки, пружины, ограничи…

Representative Results

С целью наблюдения за морфологическими свойствами скелетной мускулатуры крыс после травмы икроножную мышцу окрашивали гематоксилином и эозином, а окрашенные изображения считывали с помощью аналитического программного обеспечения, как описано в протоколе для 8 крыс в группе. У крыс с …

Discussion

В данной работе мы описали протокол лечения травмы скелетных мышц у крыс по методу Tuina, а затем проанализировали степень повреждения скелетных мышц после лечения, чтобы убедиться в эффективности метода. Примечательно, что модели повреждений скелетных мышц крыс, включая, помимо прочего,…

Materials

1 mL syringe	JIANGXI FENGLIN	20220521
1.5 microtubes	Servicebio	EP-150X-J
15 mL centrifuge tube	Servicebio	EP-1501-J
30G needle	CONPUVON	220318
5 mL blood collection tube	Servicebio	QX0023
Acrylic handle	Guangdong Guangxingwang Plastic Materials Co., Ltd	65643645
Adjustment splint	CREROMEM	20220729
Cotton Swab	INOHV	22080215
Enzyme-labeled Instrument	Rayto	RT-6100
Ethanol	INOHV	211106
Fork holder	Yongkang Kangzhe Health Technology Co., Ltd	JL001
Hair removal cream	Veet, France	LOTC190922002
Hematoxylin dyeing solution set	Wuhan Google Biotech	G1005
Imaging system	Nikon, Japan	Nikon DS-U3
IODOPHOR disfecting solution	Hale&Hearty	20221205
Light microscope	Nikon, Japan	Nikon Eclipse E100
Limit baffle	CREROMEM	20220724
Notexin	Latoxan S.A.S.	L8104-100UG
Pentobarbital sodium	Merck KGaA	P3761
Rat creatine kinase (CK) ELISA kit	LunChangShuoBiotech	YD-35237
Rat fatty acid-binding protein 3 (FABP3) ELISA kit	LunChangShuoBiotech	YD-35730
Rubber roller	Hebei Mgkui Chemical Technology Co.,Ltd	202207
Screw	Weiyan Hardware	B05Z122
Sprague Dawley rats	Hunan Slake Kingda Laboratory Animal Co.	SYXK2019-0009
Spring	Bingzhang Hardware	TH001
Surgical blade	Covetrus	#23
Weigh controller	Iyoys	HY-XSQ