Prélèvement sanguin de la veine sous-clavière chez des rats conscients
Summary
Nous présentons ici une combinaison de méthodes efficaces de restriction chez le rat et de ponction veineuse sous-clavière qui permettent une collecte de sang rapide, sûre et répétée chez le rat sans anesthésie.
Abstract
Il existe plusieurs méthodes établies pour obtenir des échantillons de sang répétés de rats, les méthodes les plus couramment utilisées étant le prélèvement latéral de la veine caudale sans anesthésie et le prélèvement de la veine jugulaire sous anesthésie. Cependant, la plupart de ces méthodes nécessitent une assistance et un matériel anesthésique et posent parfois des difficultés en termes de prélèvement sanguin ou de mauvaise qualité des prélèvements sanguins. De plus, ces méthodes de prélèvement sanguin consomment beaucoup de temps et de ressources humaines lorsque des prélèvements sanguins répétés sont nécessaires pour un grand nombre de rats. Cette étude présente une technique de prélèvement sanguin répétitif chez des rats non anesthésiés par un seul individu compétent. Des échantillons de sang très satisfaisants peuvent être obtenus en ponctionnant la veine sous-clavière. La méthode a démontré un taux de réussite global impressionnant de 95 %, avec un temps médian de seulement 2 minutes entre la contention du rat et la fin de la collecte de sang. De plus, le fait d’effectuer des prélèvements sanguins consécutifs dans la plage désignée n’inflige aucun dommage aux rats. Cette méthode mérite d’être encouragée pour la collecte de sang, en particulier dans les études pharmacocinétiques à grande échelle.
Introduction
Les rats sont l’un des animaux de laboratoire les plus courants, et il existe de nombreuses façons d’obtenir des échantillons de sang. Pour les expériences impliquant un seul prélèvement sanguin au stade final, une quantité suffisante de sang peut être obtenue par ponction cardiaque ou prélèvement sanguin de l’aorte abdominale1. Cependant, certaines études nécessitent des prélèvements sanguins répétés sur des rats pour des analyses sanguines ou biochimiques de routine, en particulier dans les études de pharmacocinétique et de toxicologie, où des prélèvements sanguins répétés sont nécessaires pour déterminer l’absorption, la distribution et le métabolisme des médicaments2.
À l’heure actuelle, bien que le prélèvement sanguin dans les veines caudales soit la méthode la plus courante pour le prélèvement sanguin chez les rats, bien qu’elle ne nécessite pas d’anesthésie, cette méthode peut être difficile pour les prélèvements répétés, et le volume de sang prélevé est relativement faible 3,4. De plus, bien que le sang puisse être prélevé dans les veines saphènes et péniennes, la quantité de sang obtenue est limitée et une anesthésie est nécessaire 1,5. De plus, les échantillons de sang prélevés dans le plexus veineux sous-maxillaire, ainsi que dans les veines sublinguales, jugulaires et sous-clavières fournissent des échantillons de meilleure qualité, mais nécessitent généralement une anesthésie ou l’assistance de plusieurs personnes 1,6,7,8,9. Enfin, le prélèvement sanguin des sinus et des canaux rétro-orbitaires nécessite non seulement une anesthésie, mais peut également causer des blessures et du stress aux rats9.
La qualité des échantillons de sang généralement obtenus à partir des principales veines est généralement de la plus haute qualité1. À l’heure actuelle, certaines études ont montré que le microéchantillonnage continu à travers la veine jugulaire est une méthode très appropriée pour la recherche toxicologique chez le rat, bien que cette méthode nécessite généralement un cathétérisme de la veine jugulaire 10,11,12. Par conséquent, il vaut la peine d’explorer comment obtenir des échantillons de sang de haute qualité conformément au principe des 3R de la recherche animale sans intervention chirurgicale. L’objectif de cette étude était de présenter une méthode permettant d’extraire efficacement le sang de la veine sous-clavière chez le rat. Cette technique permet de prélever rapidement des échantillons satisfaisants par le biais d’une procédure par une seule personne sans avoir besoin d’anesthésie.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bien que le prélèvement sanguin dans la veine caudale soit la méthode la plus courante pour les prélèvements sanguins répétés chez le rat, elle peut être influencée par les médicaments anesthésiques et, en raison de la petite taille de la veine caudale, la quantité de sang qui peut être prélevée en une seule fois est limitée, ce qui entraîne une durée de prélèvement sanguin plus longue 4,5. Bien que les systèmes de chromatographie liquide (H…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Cette étude a été financée par le projet Cuiying Plan du deuxième hôpital de l’Université de Lanzhou (Grant No. PR0121015) et le Laboratoire provincial clé de recherche sur les maladies de l’appareil urinaire du Gansu (subvention n° 0412D2).
Materials
| 0.75% normal saline | Gansu Fuzheng Pharmaceutical Technology Co., Ltd. | —— | Prepared heparin sodium solution |
| 1 mL Pasteur pipette | Biosharp | BS-XG-01-NS | Blood collection |
| 1 mL syringe (26 G, 0.45 mm x 12 mm) | Shinva Medical Instrument Co.,Ltd. | 0.45*12RWLB | Blood collection |
| 1.5 mL Eppendorf tube | Biosharp | BS-15-M | Blood storage and collection |
| 75% medical alcohol | Shandong Lircon Medical Technology Co., Ltd. | —— | Disinfection of rat blood collection site |
| Centrifuge tube holder | Biosharp | BS-05/15-SM60 | —— |
| Electronic scale | Shanghai PUCHUN Measure Instrument Co., Ltd. | JE1002 | Weigh |
| Heparin sodium injection | Hebei Changshan Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd. | —— | Rinse the syringe and EP tube; dilute with normal saline to 25 U/mL |
| Low temperature centrifuge | HuNan Xiang Yi Centrifuge Instrument Co., Ltd. | H1750R | Separation of serum |
References
- . Blood collection: The rat IACUC Guideline Available from: https://iacuc.ucsf.edu/sites/g/files/tkssra751/f/wysiwyg/GUIDELINE%20-%20Blood%20Collection%20-%20Rat.pdf (2022)
- Hattori, N., Takumi, A., Saito, K., Saito, Y. Effects of serial cervical or tail blood sampling on toxicity and toxicokinetic evaluation in rats. The Journal of Toxicological Sciences. 45 (10), 599-609 (2020).
- Liu, X., et al. Modified blood collection from tail veins of non-anesthetized mice with a vacuum blood collection system and eyeglass magnifier. Journal of Visualized Experiments. (144), e65513 (2019).
- Zou, W., et al. Repeated blood collection from tail vein of non-anesthetized rats with a vacuum blood collection system. Journal of Visualized Experiments. (130), e55852 (2017).
- Charlès, L., et al. Modified tail vein and penile vein puncture for blood sampling in the rat model. Journal of Visualized Experiments. (196), e65513 (2023).
- Wang, L., et al. Repetitive blood sampling from the subclavian vein of conscious rat. Journal of Visualized Experiments. (180), e63439 (2022).
- Yang, H., et al. Subclavian vein puncture as an alternative method of blood sample collection in rats. Journal of Visualized Experiments. (141), e58499 (2018).
- Tochitani, T., et al. Effects of microsampling on toxicity assessment of hematotoxic compounds in a general toxicity study in rats. The Journal of Toxicological Sciences. 47 (7), 269-276 (2022).
- Harikrishnan, V. S., Hansen, A. K., Abelson, K. S., Sørensen, D. B. A comparison of various methods of blood sampling in mice and rats: Effects on animal welfare. Laboratory Animals. 52 (3), 253-264 (2018).
- Yokoyama, H., et al. Lack of toxicological influences by microsampling (50 µL) from jugular vein of rats in a collaborative 28-day study. The Journal of Toxicological Sciences. 45 (6), 319-325 (2020).
- Korfmacher, W., et al. Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).
- Lu, W., et al. Microsurgical skills of establishing permanent jugular vein cannulation in rats for serial blood sampling of orally administered drug. Journal of Visualized Experiments. (178), e63167 (2021).
- National Research Council of the National Academies, Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. . Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , (2011).
- Perciedu Sert, N., et al. The ARRIVE guidelines 2.0: updated guidelines for reporting animal research. The Journal of Physiology. 598 (18), 3793-3801 (2020).
- Charan, J., Kantharia, N. D. How to calculate sample size in animal studies. Journal of Pharmacology & Pharmacotherapeutics. 4 (4), 303-306 (2013).
- Turner, P. V., Pang, D. S., Lofgren, J. L. A review of pain assessment methods in laboratory rodents. Comparative Medicine. 69 (6), 451-467 (2019).
- Kurata, M., Misawa, K., Noguchi, N., Kasuga, Y., Matsumoto, K. Effect of blood collection imitating toxicokinetic study on rat hematological parameters. The Journal of Toxicological Sciences. 22 (3), 231-238 (1997).
- Zeller, W., Weber, H., Panoussis, B., Bürge, T., Bergmann, R. Refinement of blood sampling from the sublingual vein of rats. Laboratory Animals. 32 (4), 369-376 (1998).
