في فيفو 2 فوتون التصوير الكالسيوم في طبقة 2 / 3 من الفئران
Summary
لفهم ديناميات شبكة من رقائق في القشرة المخية الحديثة ، فإنه من الضروري في نفس الوقت لتسجيل نشاط عدد كبير من الخلايا العصبية. داخل الجسم الحي اثنين الفوتون التصوير الكالسيوم هو الأسلوب الوحيد الذي يسمح احد لتسجيل نشاط الخلايا العصبية من سكان كثيفة مع وحيدة الخلية القرار.
Abstract
لفهم ديناميات شبكة من رقائق في القشرة المخية الحديثة ، فإنه من الضروري في نفس الوقت لتسجيل نشاط عدد كبير من الخلايا العصبية. داخل الجسم الحي اثنين الفوتون التصوير الكالسيوم هو الأسلوب الوحيد الذي يسمح احد لتسجيل نشاط الخلايا العصبية من سكان كثيفة مع وحيدة الخلية القرار. طريقة تتمثل في زرع نافذة التصوير الجمجمة ، حقن صبغة الفلورسنت مؤشر الكالسيوم التي يمكن اتخاذها من قبل أعداد كبيرة من الخلايا العصبية وأخيرا تسجيل نشاط الخلايا العصبية مع مرور الوقت باستخدام التصوير الكالسيوم في الجسم الحي ، two المجهر الفوتون. شارك في حقن الأصباغ نجمية محددة يسمح احد لتمييز الخلايا العصبية من الخلايا النجمية. يمكن تنفيذ هذا الاسلوب في التعبير عن جزيئات الفلورسنت الفئران في مجموعات سكانية فرعية معينة من الخلايا العصبية لفهم أفضل للتفاعلات شبكة من مجموعات مختلفة من الخلايا.
Protocol
Discussion
ميزة هذا الأسلوب أكثر من التسجيلات الكهربية هو أنه أقل الغازية ويسمح للتسجيلات نشاط الخلايا العصبية في شبكات كثيفة العصبية. عندما تفعل هذا الإجراء فإنه من المهم أن نتذكر أن تأخذ الحذر الشديد عند أداء حج القحف لا يلحق الضرر الجافية. حتى كمية صغيرة من نزيف تحت الجافية مع غامضة إلى…
Acknowledgements
نود أن نعترف أولغا Garaschuk لإجراء مناقشات مفيدة حول الاستفادة المثلى من تحميل الجزء الأكبر من مؤشرات الكالسيوم.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Oregon Green BAPTA1-AM | Reagent | Invitrogen | O-6807 | |
| Fluo 4- AM | Reagent | Invitrogen | F-14201 | |
| Sulforhodamine 101 | Reagent | Invitrogen | S-359 | |
| Pluronic F-127 in DMSO | Reagent | Invitrogen | P-3000MP | |
| Centrifugal Filter (0.45 micron) | Reagent | Millipore | UFC3 0HV 0S |
References
- Garaschuk, O., Milos, R. I., Konnerth, A. Targeted bulk-loading of fluorescent indicators for two-photon brain imaging in vivo. Nat Protoc. 1, (2006).
- Stosiek, C., Garaschuk, O., Holthoff, K., Konnerth, A. In-vivo two-photon calcium imaging of neuronal networks. Proc Natl Acad Sci USA. 100, 7319-7324 (2003).
- Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes. Biomed Eng Online 2:13. Biomed Eng Online. 2, (2003).
