レイヤーin vivoでの2光子カルシウムイメージングマウスの2 / 3

Summary

新皮質のマイクロ回路のネットワークのダイナミクスを理解するために、それは同時に、神経細胞の多数のアクティビティを記録することが不可欠です。のin vivo二光子カルシウムイメージングは​​1つが、単一セルの分解能で緻密な神経集団の活動を記録できるようにする唯一の方法です。

Abstract

新皮質のマイクロ回路のネットワークのダイナミクスを理解するために、それは同時に、神経細胞の多数のアクティビティを記録することが不可欠です。のin vivo二光子カルシウムイメージングは​​1つが、単一セルの分解能で緻密な神経集団の活動を記録できるようにする唯一の方法です。方法は、神経細胞の多数により取り込まれ、最終的に生体内で二光子顕微鏡を用いて時間経過のカルシウムイメージングによる神経細胞の活動を記録することができる蛍光カルシウム指示薬を注入し、頭蓋イメージングウィンドウを注入で構成されています。アストロサイト特異的染料の同時注入は1つがアストロサイトからニューロンを区別することができます。技術はより良い細胞の異なるグループのネットワークの相互作用を理解するニューロンの特定の亜集団に蛍光分子を発現するマウスで行うことができます。

Protocol

蛍光カルシウム指示薬溶液を準備します。我々は短いために染料をアセトキシメチルエステルの染料を使用し、またはAM。これらは、細胞外に注入すると細胞に取り込まれることができる色素です。我々は通常、1mMの濃度でオレゴングリーンBAPTA – 1 AMまたはAMにみたFluo – 4を使用してください。 AMの染料は、50マイクログラムのバイアルにInvitrogenから入手できます。まず、DMSOでプルロニックF – 127の20％溶?…

Discussion

電気生理学的記録に比べてこの方法の利点は低侵襲であり、緻密な神経回路網の活動の記録を可能にすることです。この手順を行う際には、硬膜を傷つけないように開頭術を行う際に細心の注意を取ることを覚えておくことが重要S。と硬膜下出血の少量でも非常にイメージングを不明瞭。

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Oregon Green BAPTA1-AM	Reagent	Invitrogen	O-6807
Fluo 4- AM	Reagent	Invitrogen	F-14201
Sulforhodamine 101	Reagent	Invitrogen	S-359
Pluronic F-127 in DMSO	Reagent	Invitrogen	P-3000MP
Centrifugal Filter (0.45 micron)	Reagent	Millipore	UFC3 0HV 0S