В Vivo 2-Фотон изображений кальция на уровне 2 / 3 от мышей
Summary
Для того чтобы понять динамику сети микросхем в коре головного мозга, очень важно одновременно записывать активность большого числа нейронов. В естественных условиях двухфотонного кальция изображений является единственным методом, который позволяет регистрировать активность нейронов плотной населения с одноклеточных разрешения.
Abstract
Для того чтобы понять динамику сети микросхем в коре головного мозга, очень важно одновременно записывать активность большого числа нейронов. В естественных условиях двухфотонного кальция изображений является единственным методом, который позволяет регистрировать активность нейронов плотной населения с одноклеточных разрешения. Метод заключается в имплантации черепных окна изображения, потребители инъекционных флуоресцентного красителя показатель кальция, что может быть подхвачена большим количеством нейронов и, наконец, запись активности нейронов во времени изображений кальция промежуток использования в естественных условиях двухфотонного микроскопа. Сотрудничество инъекции астроцитов конкретных красителями позволяет дифференцировать нейронов из астроцитов. Техника может быть выполнена в мышей, экспрессирующих флуоресцентных молекул в конкретных субпопуляции нейронов, чтобы лучше понять сетевые взаимодействия различных групп клеток.
Protocol
Discussion
Преимущество этого метода по сравнению с электрофизиологических записей является то, что она менее инвазивных и позволяет записях деятельности в плотных нейронов нейронной сети. При выполнении этой процедуры важно помнить, принять крайнюю осторожность при выполнении трепанации черепа, чтобы н?…
Acknowledgements
Мы хотели бы выразить признательность Ольга Garaschuk за полезные обсуждения по оптимизации массовой загрузки кальция показателей.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Oregon Green BAPTA1-AM | Reagent | Invitrogen | O-6807 | |
| Fluo 4- AM | Reagent | Invitrogen | F-14201 | |
| Sulforhodamine 101 | Reagent | Invitrogen | S-359 | |
| Pluronic F-127 in DMSO | Reagent | Invitrogen | P-3000MP | |
| Centrifugal Filter (0.45 micron) | Reagent | Millipore | UFC3 0HV 0S |
References
- Garaschuk, O., Milos, R. I., Konnerth, A. Targeted bulk-loading of fluorescent indicators for two-photon brain imaging in vivo. Nat Protoc. 1, (2006).
- Stosiek, C., Garaschuk, O., Holthoff, K., Konnerth, A. In-vivo two-photon calcium imaging of neuronal networks. Proc Natl Acad Sci USA. 100, 7319-7324 (2003).
- Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes. Biomed Eng Online 2:13. Biomed Eng Online. 2, (2003).
