In Vivo 2-Photon Imaging di calcio a livello 2 / 3 dei topi
Summary
Per capire le dinamiche della rete di microcircuiti nella neocorteccia, è essenziale per registrare contemporaneamente l'attività di un gran numero di neuroni. In vivo a due fotoni di imaging del calcio è l'unico metodo che permette di registrare l'attività di una densa popolazione neuronale con cella singola risoluzione.
Abstract
Per capire le dinamiche della rete di microcircuiti nella neocorteccia, è essenziale per registrare contemporaneamente l'attività di un gran numero di neuroni. In vivo a due fotoni di imaging del calcio è l'unico metodo che permette di registrare l'attività di una densa popolazione neuronale con cella singola risoluzione. Il metodo consiste nel impiantare una finestra del cranio di imaging, l'iniezione di un colorante fluorescente indicatore di calcio che può essere occupato da un gran numero di neuroni e, infine, registrare l'attività dei neuroni, con immagini di calcio lasso di tempo utilizzando un in-vivo due microscopio fotone. Co-iniezione di astrociti specifici coloranti permette di differenziare i neuroni da astrociti. La tecnica può essere eseguita in topi che esprimono molecole fluorescenti in specifiche sottopopolazioni di neuroni per comprendere meglio le interazioni di rete dei vari gruppi di cellule.
Protocol
Discussion
Il vantaggio di questo metodo rispetto registrazioni elettrofisiologiche è che è meno invasivo e permette le registrazioni di attività nel fitto reti neuronali neuronali. Nel fare questa procedura s importante ricordarsi di prendere la massima cura quando si esegue la craniotomia non danneggiare la dura. Anche una piccola quantità di sanguinamento subdurale con molto oscuro l'imaging.
Acknowledgements
Vorremmo ringraziare Olga Garaschuk per le discussioni utili su come ottimizzare il caricamento di massa degli indicatori di calcio.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Oregon Green BAPTA1-AM | Reagent | Invitrogen | O-6807 | |
| Fluo 4- AM | Reagent | Invitrogen | F-14201 | |
| Sulforhodamine 101 | Reagent | Invitrogen | S-359 | |
| Pluronic F-127 in DMSO | Reagent | Invitrogen | P-3000MP | |
| Centrifugal Filter (0.45 micron) | Reagent | Millipore | UFC3 0HV 0S |
References
- Garaschuk, O., Milos, R. I., Konnerth, A. Targeted bulk-loading of fluorescent indicators for two-photon brain imaging in vivo. Nat Protoc. 1, (2006).
- Stosiek, C., Garaschuk, O., Holthoff, K., Konnerth, A. In-vivo two-photon calcium imaging of neuronal networks. Proc Natl Acad Sci USA. 100, 7319-7324 (2003).
- Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes. Biomed Eng Online 2:13. Biomed Eng Online. 2, (2003).
