In Vivo 2-Photon Kalcium Imaging i Layer 2 / 3 av Möss
Summary
För att förstå nätverk dynamik mikrokretsar i hjärnbarken är det viktigt att samtidigt spela in aktiviteten hos ett stort antal nervceller. In-vivo två-photon kalcium avbildning är den enda metoden som tillåter en att spela in verksamheten i en tät neuronal befolkning med encelliga upplösning.
Abstract
För att förstå nätverk dynamik mikrokretsar i hjärnbarken är det viktigt att samtidigt spela in aktiviteten hos ett stort antal nervceller. In-vivo två-photon kalcium avbildning är den enda metoden som tillåter en att spela in verksamheten i en tät neuronal befolkning med encelliga upplösning. Metoden består i att implantera en kranial imaging fönster, injicera en fluorescerande färg kalcium indikator som kan tas upp av ett stort antal nervceller och slutligen registrera aktiviteten hos nervceller med tid förfaller kalcium avbildning med en in-vivo två photon mikroskop. Samtidig injektion av astrocyternas-specifika färger gör att man kan skilja nervceller från astrocyter. Tekniken kan utföras på möss som uttrycker fluorescerande molekyler i specifika undergrupper av nervceller för att bättre förstå det nätverk interaktioner mellan olika grupper av celler.
Protocol
Discussion
Fördelen med denna metod under elektrofysiologiska inspelningar är att det är mindre invasiv och gör inspelningarna av aktivitet i tät neuronala neuronala nätverk. När du gör detta förfarande det är viktigt att komma ihåg att största försiktighet när du utför kraniotomi inte skada dura. Även en liten mängd subdural blödning med obskyra kraftigt avbildning.
Acknowledgements
Vi vill tacka för Olga Garaschuk för bra diskussioner om optimering merparten lastning av kalcium indikatorer.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Oregon Green BAPTA1-AM | Reagent | Invitrogen | O-6807 | |
| Fluo 4- AM | Reagent | Invitrogen | F-14201 | |
| Sulforhodamine 101 | Reagent | Invitrogen | S-359 | |
| Pluronic F-127 in DMSO | Reagent | Invitrogen | P-3000MP | |
| Centrifugal Filter (0.45 micron) | Reagent | Millipore | UFC3 0HV 0S |
References
- Garaschuk, O., Milos, R. I., Konnerth, A. Targeted bulk-loading of fluorescent indicators for two-photon brain imaging in vivo. Nat Protoc. 1, (2006).
- Stosiek, C., Garaschuk, O., Holthoff, K., Konnerth, A. In-vivo two-photon calcium imaging of neuronal networks. Proc Natl Acad Sci USA. 100, 7319-7324 (2003).
- Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes. Biomed Eng Online 2:13. Biomed Eng Online. 2, (2003).
