Titration von Human Coronaviren Mit einem Immunoperoxidase Assay
Summary
In diesem Video zeigen wir eine alternative Methode für den Nachweis und Titrierung von Viren mit Hilfe einer enzymatischen Antigennachweis Technik als Immunperoxidase Test bekannt. Hier zeigen wir Ihnen, wie Sie Ihre virale Proben zu sammeln, bereiten die Zellen für die Prüfung und schließlich die Immunperoxidase Assay unter Verwendung von Verdünnungsreihen der virale Titer zu bestimmen.
Abstract
Berechnung von infektiösen viralen Titer stellt eine grundlegende und wichtige experimentelle Ansatz für Virologen. Klassische Plaque-Assays können nicht für Viren, die nicht verursachen erhebliche zytopathischen Effekte, die den Fall für Stämme 229E und OC43 der menschlichen Coronavirus (HCoV) verwendet werden. Eine alternative indirekte Immunperoxidase Assay (IPA) wird hier für den Nachweis und die Titration von diesen Viren beschrieben. Empfängliche Zellen mit seriellen Verdünnungen logarithmischen von Proben in einem 96-Well-Platte ausgesät. Nach viralen Wachstums ergibt Virusnachweis durch IPA das infektiöse Virus-Titer, als "Tissue Culture Infectious Dose" (TCID50) ausgedrückt. Dies entspricht der Verdünnung eines Virus-haltige Probe bei der die Hälfte einer Reihe von Labor-Brunnen enthalten replizierende Virus. Diese Technik ist eine zuverlässige Methode für die Titration von HCoV in biologischen Proben (Zellen, Gewebe oder Flüssigkeiten).
Protocol
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
