Titolazione del coronavirus umani utilizzando un test immunoperossidasi
Summary
In questo video, dimostriamo un metodo alternativo per il rilevamento e la titolazione di virus utilizzando una tecnica di rilevazione enzimatica antigene conosciuto come un saggio immunoperossidasi. Qui, vi mostreremo come raccogliere i campioni virali, preparare le cellule per il test, e infine il saggio immunoperossidasi utilizzando diluizioni seriali per determinare il titolo virale.
Abstract
Calcolo del infettive titoli virale rappresenta un approccio di base e sperimentali indispensabile per virologi. Saggi di placca classica non può essere utilizzato per i virus che non causino un rilevante effetto citopatico, che è il caso per i ceppi OC43 e 229E di coronavirus umani (HCoV). Un test alternativo immunoperossidasi indiretti (IPA) è qui descritto per la rilevazione e la titolazione di questi virus. Cellule sensibili vengono inoculate con diluizioni seriali logaritmica di campioni in una piastra da 96 pozzetti. Dopo una crescita virale, il rilevamento virale da IPA fornisce il titolo infettivo dei virus, espressa come "Dose Tissue Culture Infettive" (TCID50). Questo rappresenta la diluizione di un virus contenente campione a cui la metà di una serie di pozzi di laboratorio contengono virus replicante. Questa tecnica è un metodo affidabile per la titolazione di HCoV in campioni biologici (cellule, tessuti o fluidi).
Protocol
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
