La titulación de coronavirus humanos mediante un ensayo de inmunoperoxidasa
Summary
En este vídeo, se demuestra un método alternativo para la detección y titulación de virus utilizando una técnica de detección de antígenos enzimática conocida como prueba de inmunoperoxidasa. Aquí le mostraremos cómo recoger las muestras virales, preparar las células para la prueba, y finalmente la prueba de inmunoperoxidasa utilizando diluciones seriadas para determinar el título viral.
Abstract
Cálculo de los títulos virales infecciosas representa un enfoque experimental básico y esencial para los virólogos. Ensayos clásica placa no se puede utilizar para detectar virus que no causan importantes efectos citopáticos, que es el caso de las cepas 229E y OC43 de coronavirus humano (HCoV). Un ensayo alternativo inmunoperoxidasa indirecta (IPA) es aquí descritos para la detección y valoración de estos virus. Células susceptibles son inoculadas con diluciones seriadas logarítmicas de las muestras en una placa de 96 pocillos. Después de un crecimiento viral, detección de virus por el IPA se obtiene el título de virus infecciosos, expresado como "la dosis infecciosa cultivo de tejidos" (TCID50). Esto representa la dilución de una muestra que contiene el virus en la que la mitad de una serie de pozos de laboratorio contienen replicación del virus. Esta técnica es un método fiable para la valoración de HCoV en muestras biológicas (células, tejidos o fluidos).
Protocol
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
