Identification of protein complexes with quantitative proteomics in S. cerevisiae

Jesse Tzu-Cheng Chao; Leonard J. Foster; Christopher J. R. Loewen

doi:10.3791/1225

Journal

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생물학

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鉴定与定量蛋白质组学在酿酒酵母中的蛋白质复合物

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JoVE 신문 생물학

Identification of protein complexes with quantitative proteomics in S. cerevisiae

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鉴定与定量蛋白质组学在酿酒酵母中的蛋白质复合物

DOI:

10.3791/1225-v

•

11:12 min

•

March 04, 2009

•

Jesse Tzu-Cheng Chao, Leonard J. Foster, Christopher J. R. Loewen

¹Department of Cellular and Physiological Sciences,University of British Columbia – UBC, ²Department of Biochemistry and Molecular Biology,University of British Columbia – UBC

Chapters

00:00Title
00:45Introduction
01:17Preparation of the Bait and SILAC Control Strain
02:44Grinding of Cells
04:05Pre-clearing Cell Lysate
05:51Eluting From IgG Beads by TEV Protease Cleavage
06:45Trichloroacetic Acid (TCA) Precipitation
08:11EtOH/ Acetate Precipitation
09:00Sample Analysis by Western Blotting and/ or Silver Staining
09:30Representative Results/ Outcome
10:15Conclusion

Summary

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在这里，我们描述了一个新的量化确定在酿酒酵母中的蛋白质复合物的蛋白质组学技术。在这项研究中，我们一起串联质谱法，具有高特异性识别ER蛋白，Scs2p的具有约束力的合作伙伴的亲和纯化使用的SILAC方法。

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