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S. cerevisiae의의 양적 proteomics와 단백질 단지의 식별
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JoVE 신문 생물학
Identification of protein complexes with quantitative proteomics in S. cerevisiae
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S. cerevisiae의의 양적 proteomics와 단백질 단지의 식별

DOI:
10.3791/1225-v

•

11:12 min

•

March 04, 2009

•

, ,
1Department of Cellular and Physiological Sciences,University of British Columbia – UBC, 2Department of Biochemistry and Molecular Biology,University of British Columbia – UBC

Chapters

  • 00:00Title
  • 00:45Introduction
  • 01:17Preparation of the Bait and SILAC Control Strain
  • 02:44Grinding of Cells
  • 04:05Pre-clearing Cell Lysate
  • 05:51Eluting From IgG Beads by TEV Protease Cleavage
  • 06:45Trichloroacetic Acid (TCA) Precipitation
  • 08:11EtOH/ Acetate Precipitation
  • 09:00Sample Analysis by Western Blotting and/ or Silver Staining
  • 09:30Representative Results/ Outcome
  • 10:15Conclusion

Summary

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여기 Saccharomyces cerevisiae의에서 단백질 단지를 식별하기위한 새로운 양적 proteomics 기술을 설명합니다. 본 연구에서는, 우리는 높은 특이성과 ER 단백질 Scs2p의 바인딩 파트너를 식별하는 탠덤 질량 분석계 다음 친화 정화와 함께 SILAC 방법을 사용했습니다.

Tags

Protein ComplexesQuantitative ProteomicsS. CerevisiaeLipidsCellular MembranesCompartmentalizationIntracellular Signaling MoleculesNonvesicular RoutesMembrane Contact Sites (MCSs)Endoplasmic Reticulum (ER)Plasma Membrane (PM)Lipid-synthesizing EnzymesLipid TrafficER-PM MCSsYeast ModelEukaryotesScs2pMolecular PartnersGel ElectrophoresisIn-gel DigestionMass Spectrometry

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