Encyclopedia of Experiments: Biology
JoVE 비디오를 활용하시려면 도서관을 통한 기관 구독이 필요합니다. 전체 비디오를 보시려면 로그인하거나 무료 트라이얼을 시작하세요.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- For at måle den gennemsnitlige levetid for en nematodepopulation skal du starte med udviklingssynkroniserede L1-larver i M9-buffer. Bestem larvernes massefylde, og tilsæt derefter 50 til hver plade. Forbered mindst tre replikatplader pr. Tilstand samt backupplader.
Lad disse orme udvikle sig normalt, indtil de når L4-fasen. Nu kan du tilføje FUdR til pladerne, hvilket forhindrer ormene i at producere afkom. Alternativt skal du flytte ormene til nye plader hver dag efter optælling for at sikre, at du kun måler levetiden for en enkelt generation.
Dernæst skal du fjerne alle mænd. Dette vil fjerne variablerne af sex og parring fra eksperimentet. Den næste dag skal du tælle antallet af levende orme på pladen ved at lede efter spontan bevægelse eller reaktion på blid berøring. Fjern eventuelle døde orme og registrer tallene. Tæl overlevende orme dagligt, indtil der ikke er nogen tilbage. I eksempelprotokollen vil vi se en demonstration af en levetidsanalyse.
- Læg de forberedte bakteriefrøede plader med 50 L1-dyr hver. Opsæt pladerne i en 20 grader Celsius inkubator, indtil embryonerne udvikler sig til L4-fasen. Normal udvikling fra L1 til L4 tager cirka 40 timer.
Derefter, for at forhindre afkom produktion, tilføje 160 mikroliter af 50x FUdR til hver plade. Fjern derefter hannerne, da levetiden typisk kun måles med hermafroditter. Når de er afsluttet, skal du pakke pladerne i 20 grader Celsius inkubatoren.
Indtil alle ormene er døde, skal du dagligt score deres levedygtighed. For at gøre det skal du forsigtigt røre ved hver ikke-bevægelig nematode på hovedet med en platintråd eller øjenvipper. Ikke-reaktive dyr er døde og skal fjernes fra pladen. Vær opmærksom på eventuelle uregelmæssigheder under denne rutine.
