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Chapters
- 00:05Title
- 02:20Plasmid Constructs
- 03:07Protein Expression and Purification
- 06:16FRET-based Protease Assay for Enzyme Kinetic Study
- 08:54Quantitative FRET Spectrum Analysis
- 13:36Representative Results
- 15:11Conclusion
Um novo método que envolve a análise quantitativa de FRET (Förster Resonance Energy Transfer) sinais é descrito para o estudo de cinética enzimática.<em> K<sub> M</sub</em> E<em> K<sub> Gato</sub</em> Foram obtidos por hidrólise do domínio catalítico de SENP1 (SUMO / Sentrin protease específica 1) para pré-SUMO1 (modificador ubiquitina-like Pequeno). Os princípios gerais deste estudo cinético quantitativo-FRET baseada protease pode ser aplicado a outras proteases.
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Quantitative FRET AnalysisF&246;rster Resonance Energy TransferSENP1 Protease Kinetics DeterminationPosttranslational ModificationsUbiquitinUbiquitin-like ProteinsProtein Activity RegulationSUMO ModificationCellular ProcessesSUMO-specific ProteaseEndopeptidaseIsopeptidaseCatalytic EfficiencySpecificityKinetic ConstantsKcat/KM RatioMethods For Determining Kinetic ParametersPolyacrylamide Gel-based Western-blotRadioactive-labeled SubstrateFluorescent CompoundProtein Labeled Substrate
