A sorotipagem capsular de

O objetivo geral deste procedimento é realizar a sorotipagem da cápsula de Streptococcus pneumoniae ou pneumococo utilizando a reação de Quellung. Isso é realizado primeiramente inoculando caldo de infusão de coração com um cultivo puro fresco, incubado durante a noite, de pneumococos. Na segunda etapa, uma gota do inóculo é transferida para uma lâmina de microscópio de vidro.

Em seguida, soro antissoro é adicionado em volume igual sobre a lâmina. Na etapa final, ambas as gotas são misturadas e uma lamínula é colocada sobre a suspensão. Por fim, a suspensão pode ser observada em contraste de fase para verificar a reação positiva ou negativa de quelação pulmonar.

Este método demonstra o método padrão-ouro para syp pneumocócica. O método é simples, fácil de realizar e fácil de interpretar. A demonstração visual deste método é importante, pois indivíduos novos nesta técnica podem ter dificuldade em reconhecer qual é a densidade celular adequada para realizar o teste qualm.

Inicie utilizando um laço estéril descartável de um microlitro para obter uma pequena alça de uma cultura pura fresca de pneumococos cultivada em uma placa de ágar-sangue de cavalo sólido e não seletivo, e inocule os pneumococos em 100 microlitros de caldo de infusão cardíaca. A suspensão deve apresentar turvação visível leve, e agite suavemente o tubo para emulsificar a solução celular. Utilize um novo laço de um microlitro para transferir uma gota do inóculo para um microscópio de lâmina de vidro.

No próximo slide, coloque uma lamínula circular pequena sobre a suspensão e verifique a densidade da suspensão em contraste de fase com aumento de 400 vezes. Se o inóculo for muito denso, dilua a suspensão celular com mais caldo e misture suavemente as células novamente; se o inóculo for muito leve, por exemplo, se houver menos de 50 células visíveis, adicione mais bactérias à suspensão celular e misture suavemente novamente.

Com experiência, a densidade da suspensão celular pode ser avaliada agitando-se o tubo e segurando-o contra a luz, momento em que deverá apresentar turvação visível, mas leve. Quando observada ao microscópio, a solução celular deverá ter aproximadamente essa densidade.

Uma vez que a diluição ideal da célula bacteriana tenha sido alcançada, transfira cerca de um microlitro do inóculo para a lâmina de microscópio de vidro. Em seguida, usando um novo alça, adicione um volume igual à temperatura ambiente.

Antissoro na lâmina e misturar bem as duas gotas. Com o laço, colocar imediatamente uma lamínula pequena sobre a suspensão, tomando cuidado para não tocar a gota com a pinça. Em seguida, observar a suspensão em contraste de fase conforme demonstrado anteriormente.

Uma reação de Quellung negativa é observada quando há pouca ou nenhuma inchação das células pneumocócicas. Semelhante ao controle negativo, uma suspensão de células pneumocócicas sem adição de antissoros. Uma reação de Quellung positiva ocorre quando o anticorpo específico do tipo se liga à cápsula do pneumococo, levando a uma alteração em seu índice de refração.

Quando visualizadas em contraste de fase, as bactérias aparecem inchadas e mais visíveis. Não se esqueça de que, ao realizar este procedimento, você está trabalhando com micro-organismos vivos. Por esse motivo, é necessário ter cuidado para seguir boas práticas de laboratório, usar roupas de proteção, o equipamento laboratorial apropriado e descartar todo o material e reagentes ao final do processo de forma segura.

Uma vez dominada, esta técnica pode ser realizada em aproximadamente 10 minutos, se realizada corretamente. Após visualizar este procedimento, você terá uma boa noção de como realizar a sorotipagem do pneumococo utilizando a reação de Quellung. Esta técnica é importante para compreender a epidemiologia pneumocócica, tanto na colonização nasofaríngea quanto em doenças invasivas.