2015년 5월 24일
이 프로토콜의 목표는 사후 적출된 돼지 눈에서 온전한 유리체핵과 피질을 전체적으로 분리하는 효과적인 기술을 보여주는 것입니다.
이 절차의 전반적인 목표는 사후 및 핵이 있는 돼지 안구에서 온전한 유리체 중심부와 피질을 분리하는 효과적인 기술을 보여주는 것입니다. 이는 먼저 주변 각막 결막을 절제하여 공막을 노출시킴으로써 수행됩니다. 두 번째 단계에서는 전층 공막 플랩을 생성하고 확장합니다.
그 다음 맥락막을 공막에서 분리하고, 맥락막-망막 조직을 유리체로부터 벗겨냅니다. 최종적으로, 손상되지 않은 유리체 핵과 피질 전체를 적출하여 유리액의 물리적, 생체역학적 및 화학적 특성을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 부분 유리체 적출과 같은 기존의 다른 방법들과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은, 유리체의 해부학적 구조를 유지하면서 온전한 유리체 핵과 피질 전체를 분리할 수 있다는 점입니다. 먼저 적출된 안구를 주변의 과잉 조직을 통해 스티로폼 해부판에 핀으로 고정하는 것으로 시작하십시오.
안구가 완전히 고정되면, 미세 핀셋과 미세 가위를 사용하여 각막연(limbus) 부위의 결막을 절개하고 둔성 박리로 공막에서 분리합니다. 둔성 박리를 진행하면서 추가적인 박리가 가능하도록 각막연을 따라 결막을 절개합니다. 그 다음, 가능한 한 많은 공막이 노출되도록 안구 전체 둘레에서 소량의 결막만 남기고 모두 제거합니다.
다음으로, 메스를 사용하여 각막연에서 평행하게 약 5mm, 후방으로 3mm 지점까지 공막 절개를 조심스럽게 시행하여 암갈색의 맥락막이 보일 때까지 절개하여 공막 플랩을 만듭니다. 그런 다음 공막과 맥락막 사이의 층을 따라 조직을 조심스럽게 둔성 박리하여, 두 조직 사이의 공간을 넓히기 위해 맥락막을 부드럽게 안쪽으로 밀어 넣을 수 있을 때까지 진행합니다. 날카로운 미세 가위를 사용하여 첫 번째 절개선에 수직 방향으로 공막을 다시 절개하여 T자형 절개창을 만듭니다.
그 다음, 공막 조직을 하부의 맥락막으로부터 제거하기 위해 원주 방향으로 둔성 박리를 계속 진행하고, 맥락막을 공막에서 부드럽게 밀어내어 플랩을 확장합니다. 각막연에 수직으로 만든 절개선이 시신경에 도달하고, 각막연에 평행하게 만든 절개선이 안구 원주의 최소 45도에 이를 때까지 맥락막을 공막에서 부드럽게 둔성 박리합니다. 이 플랩을 이용하여 안구의 반대편에서도 둔성 박리를 반복합니다.
그 다음, 두 공막 플랩을 절개하여 맥락막의 넓은 영역을 노출시킵니다. 이제 눈의 둘레를 따라 둔성 절개를 계속합니다. 맥락막을 공막에서 박리하고, 노출된 영역 내의 나머지 맥락막 망막 조직을 제거합니다.
시신경에서부터 시작하여 맥락막에 절개창을 냅니다. 그 다음 핀셋을 사용하여 하층의 유리체로부터 조직을 조심스럽게 벗겨냅니다. 유리체 전체를 손상 없이 얻을 때까지 맥락막을 둔성 박리하고 계속해서 벗겨냅니다.
그 다음, 각막에 부착된 공막연을 사용하여 유리체 전체를 원하는 위치에 배치합니다. 이 시점에서 유리체는 여전히 전방 공막 및 수정체에 부착되어 있어야 합니다. 마지막으로, 공막 내측과 수정체 주변에서 유리체를 둔탁하게 박리합니다.
공막을 모두 제거하려면, 필요에 따라 둔탁한 도구를 사용하여 수정체를 유리체로부터 걷어내십시오. 방금 시연한 프로토콜을 따르면, 유리체 피질에 부착된 잔여 망막 조각을 통해 확인할 수 있듯이 핵과 피질이 온전한 상태로 유리체 절제가 성공적으로 이루어질 것입니다. 이 이미지에서 볼 수 있듯이, 온전한 전체 유리체액은 특정 바이러스혈증 실험을 위해 여러 가지 방법으로 사용될 수 있습니다.
예를 들어, 여기서는 유리체 피질이 존재하는 상태에서 온전한 유리체 내 산소의 확산 속도와 그에 해당하는 시상수를 연구하였습니다. 산소의 확산은 더 긴 간격에 걸쳐 일어났습니다. 날카로운 도구를 사용하는 것은 위험할 수 있으므로, 이 절차를 수행하는 동안 적절한 취급 및 폐기와 같은 예방 조치를 항상 취해야 함을 잊지 마십시오.
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본 프로토콜은 사후 적출된 돼지 안구에서 온전한 유리체 중심부와 피질을 분리하는 효과적인 기술을 보여줍니다. 이 방법은 유리체의 해부학적 구조를 보존하기 위해 세심한 해부 과정을 포함합니다.
손상되지 않은 유리체를 분리하면 약물 확산, 산소 운반 및 안구 내 대류를 정확하게 평가할 수 있으며, 이는 유리체망막 약물 전달 및 생체역학적 모델링의 핵심 파라미터입니다. 이 방법은 천연 조직 구조를 보존하여 생물리학적 측정값의 변동성을 줄임으로써 안과 치료제의 전임상 평가를 지원합니다. 이는 구조적 무결성이 중개 연구 결과의 예측 신뢰도에 직접적인 영향을 미치는 안구 연구의 중요한 공백을 해결합니다.
이 기술은 전임상 효능 시험 전 리드 최적화 및 제형 결정을 위한 초기 단계의 생물물리학적 특성 분석을 가능하게 함으로써 신약 발견의 연속적 과정에 부합합니다.