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Un approccio G-quadruplex del DNA-affinità per purificazione di enzimaticamente attiva G4 Resolvase1
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A G-quadruplex DNA-affinity Approach for Purification of Enzymatically Active G4 Resolvase1
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Un approccio G-quadruplex del DNA-affinità per purificazione di enzimaticamente attiva G4 Resolvase1

DOI:
10.3791/55496-v

•

11:25 min

•

March 18, 2017

•

, , , , ,
1Department of Cancer Biology,Wake Forest School of Medicine, 2YX Genomics, 3Department of Biology,Ball State University, 4Department of Hematology and Oncology,Roper St. Francis Hospital

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:54Lyse Bacterial Pellets Expressing Human Recombinant G4 Resolvase1 (rG4R1)
  • 03:06Prepare G4-magnetic Beads
  • 04:07Bind Histidine-tagged rG4R1 to Cobalt Beads
  • 05:47Elute rG4R1 from Cobalt Beads
  • 07:07Bind rG4R1 to G4-bound SPB and Elute in an ATP-dependent Manner
  • 08:55Results: Analysis and Quantification of Catalytically Active, Purified rG4R1
  • 10:06Conclusion

Summary

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G4 Resolvase1 lega a strutture G-quadruplex (G4) con ristretti affinità segnalato per una proteina G4 vincolanti e rappresenta la maggioranza dell'attività svolgimento G4-DNA in cellule HeLa. Descriviamo un nuovo protocollo che sfrutta l'affinità e l'attività svolgimento ATP-dipendente di G4-Resolvase1 per purificare specificamente G4R1 ricombinante cataliticamente attivo.

Tags

Keywords: G-quadruplex DNAG4 Resolvase1Enzymatic PurificationATP-dependent PurificationRecombinant ProteinBacterial ExpressionCatalytically Active EnzymeLysozymeProtease InhibitorSonicationCentrifugationStreptavidin Paramagnetic Beads

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