mRNA Interactome Capture from Plant Protoplasts

00:05Title
01:15In Vivo mRNA-protein Crosslinking by UV Irradiation
02:38Protoplast Lysis Under Denaturing Conditions
03:59mRNP Pull-down and Purification by Oligo-d(T)₂₅ Beads
08:14mRBP Concentration and Protein Assays
10:04Results: Capture of UV-crosslinked mRNA-bound Proteins by Oligo-d(T)₂₅ Beads
11:53Conclusion

Summary

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Aqui, apresentamos um protocolo de captura interativo aplicado aos protoplastos de mesofila da folha de Arabidopsis thaliana . Este método baseia-se criticamente na reticulação UV in vivo e permite o isolamento e identificação de proteínas de ligação a mRNA de plantas a partir de um ambiente fisiológico.

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