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Ottimizzando la costituzione genetica di chimico sonde in GPCR per foto-reticolazione Mapping e chimica di Bioorthogonal in cellule di mammiferi dal vivo
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JoVE 신문 화학
Optimizing the Genetic Incorporation of Chemical Probes into GPCRs for Photo-crosslinking Mapping and Bioorthogonal Chemistry in Live Mammalian Cells
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Ottimizzando la costituzione genetica di chimico sonde in GPCR per foto-reticolazione Mapping e chimica di Bioorthogonal in cellule di mammiferi dal vivo

DOI:
10.3791/57069-v

•

14:02 min

•

April 09, 2018

•

, , ,
1Institute of Biochemistry, Faculty of Life Sciences,University of Leipzig

Chapters

  • 00:04Title
  • 01:11Fluorescence-based Screening of Incorporation Efficiencies
  • 04:22Genetic Incorporation of ncAAs into GPCRs
  • 08:21Ultrafast Bioorthogonal Labeling of GPCRs on Live Mammalian Cells
  • 11:11Results: Incorporation of Chemical Probes into GPCRs in Mammalian Cells for Cross-linking and Imaging Studies
  • 12:52Conclusion

Summary

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Un'analisi di fluorescenza facile è presentata per valutare l'efficienza di amino-acil-tRNA-sintetasi/tRNA coppie conglobando amino acidi non canonico (ncAAs) proteine espresse nelle cellule di mammifero. L'applicazione di ncAAs per studiare i recettori accoppiati a proteine G (GPCR) è descritto, tra cui la mappatura foto-reticolazione di associazione siti e bioorthogonal GPCR etichettatura su cellule vive.

Tags

GPCRPhoto-crosslinkingBioorthogonal ChemistryNon-canonical Amino AcidsAmber Codon SuppressionFluorescence AssayMammalian CellsProtein-protein InteractionsLigand BindingLive Cell Imaging

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